关键词:
骨质疏松症
脉冲电磁场
TRPV4
初级纤毛
氧化应激
摘要:
骨质疏松症(Osteoporosis,OP)是一种全身性代谢性骨病,严重时可导致脆性骨折,使患者终身残疾甚至死亡。随着人口老龄化加剧,骨质疏松症正给越来越多的患者及其家庭带来的沉重的经济负担和精神压力。目前骨质疏松一线治疗药物除价格昂贵外,往往都具有较明显的副作用,而脉冲电磁场(Pulse electromagnetic fields,PEMFs)作为一种无创安全的骨质疏松症替代疗法,一直受到人们的广泛关注。但PEMFs的作用机制至今不明,影响了该疗法在临床的推广应用。本课题组在前期研究中发现,促进成骨细胞分化成熟活性离不开初级纤毛的参与,而瞬时受体电位香草素受4型通道蛋白(Transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)作为一种定位于初级纤毛的Ca通道,很可能参与了这一过程,为进一步研究TRPV4所承担的角色,为阐明PEMFs的作用机制奠定基础,本论文主要开展了如下研究。1.自新生Wistar大鼠颅骨中分离培养并扩增成骨细胞,以50Hz 0.6m T PEMFs处理成骨细胞,研究PEMFs促进骨形成过程中TRPV4通道蛋白表达的变化情况。2.用TRPV4激动剂GSK1016790A和PEMFs同时处理成骨细胞,观察成骨性分化和矿化成熟受影响情况;3.用针对IFT88的sh RNA干扰初级纤毛发生,观察成骨性分化受影响情况;再用TRPV4阻断剂HC-067047同时处理成骨细胞,观察成骨细胞分化和矿化成熟受影响情况;4.检测上述各种情况下成骨细胞发生氧化应激与TRPV4和Ca浓度变化之间的关系;5.本论文采用了免疫荧光染色、Western blot、RT-PCR等技术与方法。本论文主要得到了如下实验结果:1.在PEMFs促进成骨细胞成骨性分化过程中,TRPV4的表达量显著降低;如果同时用GSK1016790A来激活TRPV4功能,则PEMFs促进成骨性分化作用消失。***4可被定位于整根初级纤毛中;当用RNA干扰法抑制初级纤毛发生后,TRPV4的表达量显著升高,同时PEMFs促进成骨性分化作用显著下降;如同时采用HC-067047处理成骨细胞,则PEMFs促进成骨性分化作用又得以恢复。3.干扰初级纤毛导致的TRPV4高表达可导致成骨细胞Ca超载和氧化应激,而用HC-067047预处理成骨细胞或保持完整的初级纤毛可以抑制TRPV4表达,避免氧化应激发生,提高成骨细胞的成骨性分化和矿化成熟能力。本论文得到如下结论:***处理成骨细胞导致胞内TRPV4表达量下降,而激活TRPV4导致PEMFs促进成骨性分化活性受损,说明TRPV4低表达有利于成骨性分化;2.初级纤毛可以控制TRPV4表达,使其处于低表达水平;干扰初级纤毛可以破坏其对TRPV4表达的控制,引起TRPV4高表达,进而影响PEMFs的促进成骨性分化能力;***4高表达可致胞内Ca浓度升高,引起Ca超载,发生氧化应激,损伤成骨性分化能力。PEMFs正是通过抑制TRPV4表达水平来促进成骨细胞的成骨性分化和矿化成熟的。本论文从全新角度提出PEMFs促进骨形成的作用机制,为推广应用骨质疏松症的PEMFs疗法提供了实验依据。