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关键词： 蛋白激酶B   原发性肝细胞癌   乙型肝炎病毒感染   免疫组化  

摘要： 目的:探讨蛋白激酶B(PKB/Akt)在乙型肝炎病毒(HBV)感染原发性肝细胞癌组织中的表达及及临床价值。方法:采用SP免疫组化法,检测35例HBV感染原发性肝细胞癌(HBV肝癌)、乙肝后肝硬化和正常肝组织中PKB/Akt的表达。结果:HBV肝癌组和肝硬化组PKB阳性表达率分别为94.3%和66.7%,显著高于对照组(40.0%),有统计学差异(P<0.05);HBV肝癌组阳性表达率显著高于肝硬化组(P<0.05);肿瘤浸润和淋巴结转移组织中PKB/Akt阳性表达率显著高于无肿瘤浸润和淋巴结转移组织(P<0.05),PKB/Akt阳性表达率在性别、年龄、肿瘤大小和肿瘤分化程度等病理因素之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PKB/Akt在HBV肝癌组织中呈高表达,PKB/Akt在HBV肝癌的肿瘤浸润、淋巴结转移的机制中起着重要的作用。

关键词： 乙型肝炎   肝细胞癌   肝硬化   核心抗原  

摘要： 乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒所引起的疾病。它通过感染者的血液和体液进行传播。全世界约有4亿人感染乙肝病毒，每年约150万人死亡。仅仅在中国就有1.3亿人感染乙肝病毒。中国每年约有30万人死亡，其中包括18万肝细胞癌患者。乙肝病毒DNA包含4个开放阅读框：核心，表面，X和聚合酶。核心基因编码乙型肝炎e抗原和乙型肝炎核心抗原。乙肝病毒核心基因突变和SNPs与慢性乙肝患者的肝炎活动性有关。\n 目的：1．探清肝细胞癌和肝硬化患者乙肝病毒核心区域的PCR-RFLP模式。\n 2．评价PCR-RFLP模式在肝细胞癌和肝硬化患者中的临床意义。\n 材料与方法：从2010年1月1日到2010年11月7日共收集了320名肝细胞癌患者和130名肝硬化患者。根据统一的纳入标准选择患者。患者的年龄范围从14岁到82岁。感染艾滋病病毒、丙肝病毒或有甲状腺疾病的患者排除在外。巢式PCR是用于扩增HBV-DNA。有关乙肝病毒，肝细胞癌和肝硬化的实验分析，分子生物学研究：HBV DNA，PCR-RFLP模式，测序。\n 研究结果：有五个典型PCR-RFLP限制性酶裂解Tsp5091模式(C，D，E，G&C/G)彼发现。RFLP图案的分布中，E-8.7%，D-2.5%是C-62.8%，G-13.7%和C/G mixture-12.2%在320肝细胞癌的病例中被发现； C-57%，E-11.5% G-17%，D-4.6%，和C/Gmixture-10%在130肝硬化病例中被发现。在这两种情况中，显然RFLP图案的D是最低的。PCR-RFLP模式的分布在肝细胞癌和肝硬化之间没有显著性差异。\n 结论：RFLP C模式患者的血清AFP,HBV-DNA，血清ALT显著高于其他模式。尽管HBV-DNA处于高水平，但PCR-RFLP C/G模式的患者具有低水平的血清AFP和ALT。

关键词： HCV   准种   变异  

摘要： 丙型肝炎病毒(HCV)易发生变异,在宿主体内主要以准种形式存在。HCV准种能够参与病毒逃避宿主的免疫监控及抗病毒治疗的耐药性,导致病毒在宿主体内持续存在,形成慢性感染。该文就HCV准种的产生、研究方法、基因组各区段内准种的研究及其临床意义作一综述。

关键词： HIV抗体   酶联免疫吸附测定   获得性免疫缺陷综合征  

摘要： 目的了解医院内患者人类免疫缺陷病毒(HIV)感染状况,分析其感染途径,提出预防措施。方法对2007年1月至2009年12月就诊的部分患者采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行HIV抗体检测。结果在23 367例患者中有76例检出HIV抗体阳性,总检出率为0.325%。2007、2008和2009年检出率分别为0.204%、0.302%和0.459%。结论 HIV的感染率逐年上升。对高危人群和可能经医源性途径传播或感染HIV的患者进行常规HIV抗体检测,是尽早发现HIV感染并防止其医源性传播和医疗纠纷的必要措施。

关键词： 丙型肝炎病毒   5’非编码区   非结构蛋白5A   基因变异   临床意义  

摘要： 研究背景和目的： 丙型肝炎(Hepatitis C)是威胁人类身体健康的重要传染病,其病原体是丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV),全球范围内大约有1.7亿人感染了HCV,我国的感染率约为3%。HCV感染容易慢性化,慢性丙型肝炎约有20%-30%会在20年内缓慢进展为肝硬化和肝癌,HCV感染成为导致肝癌及终末期肝病的重要原因。HCV为单股正链RNA病毒,整个基因组只有一个开放读码框(Open reading frame, ORF),位于基因组中央,在基因组的5’和3’末端各含有一段非编码序列(Non-cording Region, NCR)。基因组从5’NCR依次为C、E1、E2、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B及3’NCR, C区编码核壳蛋白,E1、E2区编码包膜糖蛋白,P7及NS2到NS5分别编码不同功能的非结构蛋白。HCV具有高度变异性,但不同区段变异率不同,有些区段变异性较大,而另有些区段则遗传保守性很高,其中5’NCR和C区最保守,E区最容易变异。HCV 5’NCR是整个基因组最为保守的区域,长度和序列非常稳定,这个区段核苷酸突变少,并且其变异可以代表基因型。HCV可以分为6个基因型及不同亚型,HCV基因型分布有明显的地域差别,我国大陆主要是1b、2a型及少量的la、2b、3b、4a及6a型等。研究表明,HCV基因型与临床有密切的关系,基因1型HCV感染者往往病毒载量较高,疾病进展快,对干扰素的应答较差,但是基因型对临床的影响仍然存在一定的争议。HCV 5’NCR是病毒复制的起始部分,在病毒的复制及病毒蛋白的翻译方面起到很重要的作用,5’NCR某些核苷酸的特异性变异可能会影响病毒的复制水平及对干扰素的治疗应答。NS5A是HCV编码的非结构蛋白,在HCV多蛋白的成熟和RNA的复制过程中具有十分重要的作用,具有抗肝细胞凋亡作用,并下调干扰素a(IFNa)刺激的抗病毒效应。HCV NS5A某些区域的基因变异可能导致其抗干扰素作用的减弱,研究最多的区域是ISDR,日本学者研究发现NS5A羧基末端第2209到2248氨基酸的40个氨基酸区域的序列与干扰素治疗的敏感性有关,将这个区域称为干扰素敏感决定区(ISDR),认为ISDR变异株(4个以上氨基酸突变)对干扰素的应答较好,但是欧洲和美国的一些研究并未证实ISDR的突变与治疗转归的关系,考虑ISDR外还存在与干扰素疗效相关的序列,如V3区、干扰素及利巴韦林耐药区(IFN/RBV resistance determining region, IRRDR)等。目前对ISDR变异与干扰素应答关系的研究较多,但是对NS5A区基因全序列的变异对干扰素应答影响的研究还很少,国内尚未见报道。 为了明确HCV 5’NCR及NS5A的变异情况以及变异对临床的影响,本研究应用基因芯片法及基因测序法检测山东地区HCV感染者5’NCR区,对进行抗病毒治疗的基因1b型慢性丙型肝炎病人进行NS5A序列测定,观察HCV 5’NCR及NS5A的变异情况及其临床意义。 材料与方法： 1.2005年1月至2008年10月期间济南市传染病医院门诊及住院的慢性丙型肝炎及肝硬化病人170例,抗HCV及HCV RNA均阳性,并排除了HAV、HBV、HEV、HIV感染及酒精性肝炎和药物性肝炎,空腹抽静脉血5m1。应用聚乙二醇干扰素a-2a 180ug或a-2b 1.0-1.5ug/kg治疗,基因1型疗程12个月联合利巴韦林800-1200mg,非基因1型疗程6个月联合利巴韦林800-1000mg。应用基因芯片法检测HCV基因型,观察基因型与疾病严重程度、感染途径、HCV RNA定量及干扰素应答的关系。 2.2008年1月至2009年12月期间济南市传染病医院住院的慢性丙型肝炎病人118例,进行HCV 5’NCR的序列测定,应用分子生物学软件ClustalX2.0及Mega4.0进行分析,以Mega4.0软件构建遗传进化树,以此了解不同病毒株的亲源性;与国内外HCV流行株相比较,观察不同病毒株5’NCR区核苷酸序列的变异,了解山东地区HCV 5’NCR的基因变异特点;观察特征性的基因变异与HCVRNA定量水平及干扰素应答的关系。 3.对35例进行抗病毒治疗的基因1b型慢性丙型肝炎病人治疗前的血清进行NS5A序列测定,全长NS5A序列设计5对引物,分5段进行测序,测序结果应用ClustalX2.0及Mega4.0软件进行核苷酸及氨基酸序列的比对,与HCV 1b型标准株HCV-J比较,观察NS5A全基因的核苷酸及氨基酸变异率及特异性的区域ISDR、V3区、IRRDR等的变异情况,以及以上变异与干扰素应答的关系。 结果： 1.基因芯片法检测HCV基因型结果为：基因1b型63.1%

关键词： 妊娠   乙型肝炎病毒前S1抗原   乙型肝炎病毒  

摘要： 目的 探讨妊娠期乙型肝炎病毒(HBV)前S1抗原在乙肝五项常规模式中的表达及临床意义.方法 用ELISA法检测3 600例孕妇血清标本中的乙型肝炎病毒前S1抗原和乙型肝炎病毒HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb.结果 前S1抗原在大三阳HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+), HBsAg(+)HBcAb(+), HBsAg(+)HBeAg(+),小三阳HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)模式中的阳率显著增高,依次为92.1%,79.3%,87.5%,76.3%.HBeAg阳性组的前S1抗原阳性率与HBeAg阴性组比较明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 妊娠期乙型肝炎病毒前S1抗原的检测可起到提示病毒是否复制的补充作用,与其他乙型肝炎病毒血清标志物同时检测对妊娠期妇女更有临床意义. 同时产前产后联合阻断HBV携带孕妇的母婴传播,其有效保护率高,能明显减少宫内感染的发生.

关键词： 乙型肝炎   PCR-RFLP图案   肝细胞癌   肝硬化  

摘要： 简介：乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒所引起的疾病。它通过感染者的血液和体液进行传播。全世界约有4亿人感染乙肝病毒，每年约150万人死亡。仅仅在中国就有1.3亿人感染乙肝病毒。中国每年约有30万人死亡，其中包括18万肝细胞癌患者。乙肝病毒DNA包含4个开放阅读框：核心，表面，x和聚合酶。核心基因编码乙型肝炎e抗原和乙型肝炎核心抗原。乙肝病毒核心基因突变和sNPs与慢性乙肝患者的肝炎活动性有关。 目标：1探清肝细胞癌和肝硬化患者乙肝病毒核心区域的***模式。 2评价PCR-RFLP模式在肝细胞癌和肝硬化患者中的临床意义。 材料与方法：从2010年1月1日到2010年11月7日共收集了320名肝细胞癌患者和130名肝硬化患者。根据统一的纳入标准选择患者。患者的年龄范围从14岁到82岁。感染艾滋病病毒、丙肝病毒或有甲状腺疾病的患者排除在外。某式PCR是用于扩增HBV-DNA。有关乙肝病毒，肝细胞癌和肝硬化的实验分析分子生物学研究：HBV DNA，PcR-RFLP模式，测序 研究结果：有五个典型PcR-RFLP限制性酶裂解sp509I模式(c，D，E，G&c/G)被发现。RFLP图案的分布中，E-8．7%，D 2．5%是Cc-62．8%，G-13．7%和C/G mixture-12.2%在320肝细胞癌的病例中被发现;C-57%，E-11．5%G-17%，D-4.6%，和C/Gmixture-10%在130肝硬化病例中被发现。在这两种情况中，显然RFLP图案的D是最低的。PcR-RFLP模式的分布在肝细胞癌和肝硬化之间没有显著性差异。 结论：RFLP C模式患者的血清***-DNA，血清ALT显著高于其他模式。尽管HBv DNA处于高水平，但PcR RFLP C/G模式的患者具有低水平的血清AFP和ALT。

关键词： 肝炎病毒,乙型   T淋巴细胞   受体,白细胞介素2   受体,白细胞介素7   流式细胞术  

摘要： 目的 检测乙型肝炎病毒( HBV)感染者外周血CD4+T细胞表面CD25 - CD127 -的表达情况及临床意义.方法 用流式细胞术比较分析53例慢性乙肝患者、53例HBV携带者和26例正常对照人群CD4+T细胞表面CD25 - CD127 -的表达情况,并对20例用干扰素治疗的HBV-DNA阳性慢性乙肝患者随访.结果 ①与正常对照组比较,慢性乙肝患者、HBV携带者CD4+ CD25 -CD127 -T细胞均显著升高,两者比较有统计学差异(Q =4.559,P＜0.05；Q=6.230,P＜0.05)；②HBV- DNA阳性患者(n=77) CD4+ CD25 - CD127 -T细胞显著低于HBV- DNA阴性患者(n=29),两者比较有统计学意义(t =2.290,P=0.024)；③与治疗前比,慢性乙肝患者干扰素治疗12周后CD4+CD25- CD127 -T细胞显著降低,两者比较差异有统计学意义(t =2.469,P=0.024).结论 乙型肝炎病毒感染者外周血CD4+ CD25 - CD127 -T细胞与病毒的感染和清除相关,外源性干扰素可降低CD4+ CD25 - CD127 -T细胞。

关键词： 乙型肝炎   肝炎病毒   遗传异质性   基因表达  

摘要： 目的：研究乙型肝炎病毒感染不同临床转归中HBV 全长基因组准种特点和突变情况等及其可能的临床意义。<br>　　 方法：41例未接受抗病毒治疗的HBV 感染者纳入本研究，分为急性乙型肝炎组（AHB, 10 例）、慢性HBV 携带组（ASC, 10 例）、慢性乙型肝炎组（CHB, 11 例）和慢性重型乙型肝炎组（CSHB, 10 例）。收集患者外周血血清，抽提HBV DNA，PCR 扩增全长基因组后克隆、测序。每例患者获得14-16 个序列，并进行HBV 全长基因组、多片段[大/中/主蛋白编码序列, 核心启动区(CP), C、X、P 基因和rt 区]的准种异质性分析及相关基因突变统计等生物信息学分析。<br>　　 结果：共获得619 个HBV 全长基因组序列。AHB、ASC、CHB 和CSHB 组间基因型构成无统计学差异。准种异质性上，CHB 组和CSHB组无显著性差异；ASC 组和CHB 组、ASC 组和CSHB 组相比，多个基因的异质性小于后两者；而AHB 组和其余三组比较，准种异质性最小。CSHB 组内死亡患者的中/主蛋白编码序列的准种复杂度明显高于好转患者（P 均<0.05）。四组患者的G1896A、T1753C、A1762T、G1764A、C1766T突变率显著不同，均是CSHB 组>CHB 组>AHB 组>ASC 组。AHB 组和CHB 组各有2 例患者发现单个位点的拉米夫定相关补偿性耐药突变，突变位点为rtT128P、rtV173L、rtW153Q。CHB 和CSHB 组中观察到C 基因的核苷酸缺失，其中CSHB 组患者发生较长片段的框移突变，而AHB 和ASC 患者未发现C 基因的缺失或插入变异。<br>　　 结论：慢性感染比急性感染具有更宽的HBV变异谱系，慢性感染中免疫清除期比免疫耐受期具有更宽的HBV 变异谱系，随着病情的加重，HBV 的准种越趋向于复杂，HBV 的准种异质性与病毒感染的时间及免疫压力有关。病情严重者中，与病毒复制和核心抗原表达改变以及免疫逃逸相关的HBV基因突变较多。

关键词： 人乳头瘤病毒   宫颈癌   宫颈癌前病变  

摘要： 目的：探讨高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变（CIN）及宫颈浸润癌（ICC）中的表达及临床意义。 方法：研究对象为2009年3月至2010年6月来我院妇科门诊就诊的138例宫颈细胞学异常患者,且细胞学结果≥ASCUS,先利用杂交捕获二代（HCⅡ）技术做HPV DNA检测,再行阴道镜检查及宫颈活检等组织病理学检查,根据病理结果的严重程度,分为5组,即慢性宫颈炎组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组及ICC组,比较在各组中HR-HPV感染的比例。 结果：采用HCⅡ方法检测宫颈脱落细胞中HPV DNA含量,在慢性子宫颈炎（42例）、CINⅠ（35例）、CINⅡ（23例）、CINⅢ（18例）、及ICC（20例）中HR-HPV阳性率分别为40.48%,65.71%,86.96%,94.44%,100%。随着病变严重程度的升高HR-HPV感染率显著上升;CIN（78.95%）中HR-HPV的阳性率高于慢性宫颈炎者（x2=17.66,P＜0.05）;ICC组与CIN中HR-HPV阳性率差异无统计学意义（x2=3.65,p＞0.05）;在本课题中高级别CIN （CINⅡ+CINⅢ）及ICC组中HR-HPV阳性率无明显差异,高级别CIN（90.24%）中HR-HPV的阳性率明显高于低级别CIN（CINI,65.71%）,差异具有统计学意义（x2=6.84,P＜0.05）。在45例不能明确意义的不典型鳞状细胞（ASC-US）患者中,HR-HPV阳性者36例,阴性者9例子,子宫颈高级别病变（≥CINⅡ）在HR-HPV阳性组和阴性组的发生率分别为41.67%和0%,差异有统计学意义（P＜0.05）。以组织病理学检查结果作为诊断的金标准,计算出HR- HPV阳性对诊断子宫颈高度病变的敏感性为100%,阴性预测值为100%。 结论：HR-HPV是高级别CIN及宫颈癌重要致病因素,其阳性率与宫颈病变严重程度成正相关,病变程度越严重,阳性率越高;HR-HPV的检测在低级别CIN与高级别CIN鉴别中有重要意义;HR-HPV检测可对宫颈细胞学结果为ASCUS的患者有效的进行进一步分流管理。