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关键词： HBVX基因   乙型肝炎病毒   临床治疗   突变检测   PCR-HRM分析  

摘要： 背景：<br>　　乙型肝炎病毒(HBV)变异株是病毒基因碱基序列与同型的代表株或共有序列比较有独特的变化。HBV的DNA多聚酶由于在DNA复制过程中缺乏校正功能,具有较高突变率。在慢性感染者中,HBV持续承受宿主巨大的免疫压力,更易发生变异,但大多数变异并无实际意义;若变异发生在重要功能的区段内,影响了病毒蛋白质的合成和结构,可使变异的病毒逃避免疫监控,大量复制增殖,致病性增强,导致乙肝慢性化、重症化及致癌化。既往重点对HBV基因组、P基因区、前C及C区的变异研究,而位于HBV基因前C/C区上游约200bp左右的X区(nt1374-nt1838)是目前研究的热点,其含有基本核心启动子(Base Core Promoter,BCP)、核心上游调节序列(Core Upstream Regulation Sequences,CURS)、负性调节元件(Negative Regulation Element,NRE)、增强子Ⅱ(Enhancer,EnhⅡ)和直接重复序列(Direct Repeatsequence,DR)1,2等重要的基因表达调控元件,编码154个氨基酸残基的X蛋白,具有广泛的反式激活作用,在HBV的复制和表达中起重要作用。因此,据上述推测,HBVX基因变异对HBV复制及乙肝患者病程进展起着重要影响。<br>　　目的：<br>　　研究HBVX基因变异对HBV复制情况、乙肝患者病程进展、肝功能的影响及与HBV基因型的关系,为临床治疗乙肝患者及监测病情进展提供理论基础。<br>　　方法：<br>　　根据2005年病毒性肝炎防治方案诊断标准,将168例乙肝患者分为乙型肝炎携带者为29例,慢性乙型病毒性肝炎为70例,肝炎肝硬化31例,乙肝肝癌38例。所有入选患者以无菌操作取新鲜血液4ml。标本离心后分离血清置EP管,放入-70℃低温冰箱保存。采用PCR-HRM分析技术检测血清HBVX基因变异情况;直接测序(或克隆测序)确认变异位点;利用NCBI网站上的genotypetool确定HBV基因型;ELISA检测HBV血清标志物;采用日立7600型全自动生化分析仪检测肝功能指标(ALT、AST、ALB及TBIL);放射免疫技术检测肝纤维化指标(HA、LN、IV-C及PIIIP)。<br>　　结果：<br>　　1.采用PCR-HRM分析技术能很好地区分基因不同位点突变。168例乙肝患者血清HBVX区段突变检出率前五位的位点是nt1764(72.6％)、nt1719(68.5%)、nt1762(67.8%)、nt1727(54.2%)、nt1726(37.5%)及nt1730(37.5%)。<br>　　***基因变异与血清肝脏功能指标无显著性关系(p>0.05,t检验)。在HCC病例组里,BCP双变异联合CP聚集变异与层粘连蛋白(LN)之间差异有统计学差异(p<0.05)。<br>　　***阴性组BCP双变异(nt1762A→T/1764G→A)联合CP聚集变异(nt1719T→C/1726A→C/1727A→T/1730C→G)、nt1755A-C/nt1768T-A双变异的检出率均显著高于HBeAg阳性组(p<0.05)。<br>　　***高水平(105copies/ml≤HBVDNA)BCP双变异联合CP聚集变异、nt1755A-C/nt1768T-A双变异的检出率均显著高于HBVDNA低水平组(103copies/ml≤HBVDNA<1×105copies/ml)(p<0.05)。<br>　　***基因型中BCP双变异、CP聚集变异、BCP双变异联合CP聚集变异及nt1755A-C/nt1768T-A发生率均较B基因型高(p<0.05)。<br>　　***双变异联合CP聚集变异和nt1755A→C/nt1768A→G双变异检出率随着乙肝病程进展有升高的趋势,在乙肝肝癌组中检出率最高。<br>　　结论：<br>　　***-HRM分析在HBV基因突变检测中是一种较新的技术,但此技术对所检测样本要求较高,可能影响其在临床的广泛使用。<br>　　***1755A→C/nt1768A→G双变异是除BCP双变异外新的双位点联合突变。<br>　　***基因变异能导致乙肝患者血清HBeAg表达障碍,同时能提高变异株HBV复制能力,且与HBVC基因型、乙肝患者病程密切相关。<br>　　***双变异联合CP聚集变异能加重乙肝患者病情,趋向肝硬化、肝细胞癌发

关键词： microRNA-143   生物学标记   癌,肝细胞   诊断  

摘要： 目的探讨血清中miR-143的表达在乙型肝炎病毒感染相关性肝病的诊断及预后评估中的应用价值。方法收集79例慢性乙型肝炎、61例乙型肝炎肝硬化、67例HBV相关性肝癌患者的一般临床资料及血清样本,同时收集30例健康体检者的一般临床资料及血清样本。分别提取各血清样本中的microRNA,再经实时定量PCR检测各血清中miR-143的表达水平,分析miR-143在各组之间的表达差异。结果与健康对照组相比,血清miR-143的表达量在HBV相关性肝癌组中表达量下降,且差异具有统计学意义（P<0.001）,在慢性乙型肝炎组及乙型肝炎肝硬化组中的表达量亦下调,但差异无统计学意义。在区分HBV相关性肝癌组与健康对照组时,受试者工作曲线分析结果显示单用血清miR-143的曲线下面积为0.890（95%CI:0.810;.945）,敏感性为83.6%,特异性为83.3%;单用AFP的曲线下面积为0.836（95%CI:0.742;.907）,敏感性为70.7%,特异性为96.7%;联合血清miR-143与AFP时的曲线下面积为0.945（95%CI:0.875;.983）,敏感性为89.7%,特异性为96.7%。结论血清miR-143有可能成为一种新的无创性HBV相关性肝癌诊断的血清学标记物。

关键词： 肺表面活性蛋白A   肠道病毒71型   神经源性肺水肿  

摘要： 目的探讨肠道病毒71型(EV71)感染患儿血清肺表面活性相关蛋白A(SP-A)水平变化及其临床意义。方法选取2011年4至12月河北医科大学附属邢台市人民医院儿科收治的EV71感染的患儿40名,分为普通组18例,重症组14例,危重组8例。同时选取体检健康儿童15名作为正常对照,采用ELISA定量法检测患儿血清SP-A水平的变化。结果普通组和重症组血清SP-A与对照组比较P>0.05,危重组血清SP-A明显高于对照组、普通组及重症组P<0.05。结论通过检测血清SP-A水平,对EV71感染神经源性肺水肿(NPE)早期判断有临床指导价值。

关键词： 乙型肝炎病毒   基因型   肝炎类别   临床意义  

摘要： 目的探讨乙型肝炎病毒基因型在临床诊断中的意义。方法将185例确诊的乙型肝炎患者根据临床诊断分为无症状乙型肝炎携带者(ASC)、急性乙型肝炎(AHB)、慢性乙型肝炎(CHB)、肝硬化(LC)、肝细胞癌(HCC)5个疾病组,30例体检健康组作为对照,采用实时荧光定量PCR、PCR-反向点杂交等指标进行测定。结果乙型肝炎病毒基因B、C两组肝病患者中,HBV基因B型占57.8%,基因C型占42.2%,HBV-DNA载量与HBV基因型无明显差异。结论 185例肝病患者以HBAV基因B型为主,C型次之。

关键词： 肝炎病毒/分离和提纯   实验室技术和方法  

摘要： 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的传染性疾病。其感染呈世界性分布，感染者中约50％～85％呈慢性转化，引起肝脏的慢性炎症坏死和纤维化，部分患者甚至会发展成肝硬化和肝癌，严重危害患者的健康和生命。HCV主要以输血和应用血液制品及性传播为主要传播途径．发病隐匿，症状不典型，病毒的传播不易控制，患者因不能及时诊断而错过治疗的最佳时机。因此丙型肝炎的早期诊断显得尤为重要。目前。实验室检测丙型肝炎病毒的手段主要有四项。

关键词： 乙型肝炎病毒   乙型肝炎病毒表面大蛋白  

摘要： 目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者在用恩替卡韦抗病毒治疗过程中血清HBV表面大蛋白(HBV-LP)水平变化的临床意义。方法检测40例CHB患者在用恩替卡韦抗病毒治疗的0、12、24、36、48、72、96周血清中的HBV-LP、HBV DNA、HBeAg水平。结果治疗过程中,HBVDNA载量对数值及HBV-LP吸光度(A)值均下降,且呈正相关(r=0.989,P<0.01)。不同治疗时期HBV DNA阴性患者的HBV-LP A值与HBV DNA阳性患者比较,差异较大。HBV DNA阳性组的HBV-LP A值均值为1.478。以HBV-LP A值≥1.5为界值时,其与抗病毒治疗效果明显相关(P<0.01)。结论在抗病毒治疗过程中,血清HBV-LP与HBV DNA有较好的相关性,可作为新的判断病毒复制的生物指标。

关键词： 乙肝病毒外膜大蛋白   肝炎病毒   乙型   病毒复制  

摘要： 目的探讨乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV—LP）与乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV—DNA）的相关性，动态检测俩项指标，分析其在诊断乙型肝炎和临床治疗，妒的意义。方法采用酶联免疫吸附试验和实时荧光定量聚合酶链反应技术对230例乙型肝炎患者血清标本进行HBV—LP和HBV-DNA平行检测。结果乙型肝炎病毒感染患者血清HBV—LP含量与HBV—DNA拷贝数间呈正相关（r=0．84，P〈0．01），230例乙肝病毒感染患者血清标本中，HBV-LP阳性率为84.78％，HBV-DNA阳性率为84．35％，两者差异无统计学意义（P〉0．05）。55例HBeAg阴性血清标本中，HBV—LP与HBV-DNA的阳性检出率分别为63．63％（35／55）、58．18％（32／55），两者差异无统计学意义（P〉0．05）。HBV—DNA阳性194例中，HBV—LP阳性率（82．47％）明显高于HBeAg阳性率（52．06％）（x2=80：3，P〈0．01）。结论HBV—LP及HBV-DNA是判断乙型肝炎病毒感染患者体内病毒复制程度的重要指标，尤其是HBeAg阴性患者体内病毒复制及预后判断有价值的血清学检测指标，为临床诊断及治疗提供可靠的实验室数据。

关键词： 丙型肝炎病毒   基因型   临床意义  

摘要： 丙型肝炎是经血或血制品传播的急慢性肝炎类疾病,可转化为肝硬化或肝癌。其致病因子丙型肝炎病毒是一种高异质性RNA病毒,可根据其基因变程度的不同分为多个基因型与亚型,其基因分型与地理分布,病情进展及干扰素的治疗效果有关,近年来发展出了多种检测基因分型的方法。本文就近年来丙型肝炎基因分型的各种检测方法作一比较并综述了基因分型的临床意义,为临床对各种检测方法的选择提供一定的依据。

关键词： 基因   抑制   乳头状瘤病毒感染   宫颈肿瘤   宫颈上皮内瘤样病变  

摘要： 目的研究宫颈癌及癌前病变中凋亡抑制基因Survivin的表达及高危型-人乳头瘤病毒（***）的感染情况，探讨两者在宫颈癌发病机制中的作用。方法入选宫颈上皮内瘤变（CIN）I25例、CINⅡ～Ⅲ23例及宫颈癌34例，另取20例正常宫颈作为对照。采用免疫组织化学SP法检测survivin的表达，以聚合酶链反应技术检测***感染情况。结果Survivin阳性表达率和***感染率均为宫颈癌[85．3％（29／34）和88．2％（30／34）]高于CIN[52．1％（25／48）和54．2％（26／48）]（P〈0．05），CIN高于正常宫颈[0和10．0％（2／20）]（P〈0．05），CINⅡ-Ⅲ[65．2％（15／23）和73．9％（17／23）]高于CINI[32．0％（8／25）和28．0％（7，25）]（P〈0.05）。在宫颈癌中Survivin阳性表达与组织学分级相关（P〈0．05），而与年龄、临床分期及病理分型无关（P〉0．05）。HR-HPV感染与年龄、I临床分期、组织学分级及病理分型均无关（P〉0．05）。在宫颈癌中Survivin阳性表达与HR-HPV感染呈正相关（r=0．403，P〈0．05）。结论Survivin阳性表达及***感染可能与宫颈癌的发生、发展密切相关。两者在宫颈癌的发病机制中可能起着协同作用。

关键词： 丙型肝炎病毒核酸   抗-HCV检测   荧光定量PCR法   临床意义   RNA定量检测   HCV感染   肝脏慢性炎症   公共卫生问题  

摘要： 丙型肝炎是一种主要经血液传播的疾病,HCV感染可导致肝脏慢性炎症、坏死和纤维化,部分患者甚至可发展为肝硬化及肝癌[1],对人类的健康和生命危害极大,已成为严重的社会和公共卫生问题。抗-HCV检测可反映HCV的感染或既往感染,而HCV-RNA定量检测是反映HCV复制的特征指标,是抗病毒治疗的依据。本文对277例抗-HCV阳性患者同时进行HCV-RNA定量检测,