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关键词： 甜味蛋白质   基因工程   异源表达   分子改性   结构   甜味受体  

摘要： 甜味蛋白质由于具有高甜味、低热量、安全无毒等特点，因此在食品与饮料等领域有较强的应用价值。到目前为止，已从天然植物中获得8种天然甜味蛋白。本文对这8种甜味蛋白的甜味性质及其甜味产生的分子机制进行了介绍，并重点阐述了莫内林（monellin）、植物甜蛋白（brazzein）和索马甜（thaumatin）这3种代表性甜味蛋白的基因工程、异源表达与分子改性进展，对其在不同宿主内的表达产率及甜味性质进行了总结分析，并对甜味蛋白质的研究、应用和产业化发展进行了展望。

关键词： 重组蛋白药物   真核表达系统   基因工程  

摘要： 重组蛋白药物具有活性高、特异性强、毒性低等优势,在全球范围内具有广阔的应用前景。目前,用于高效生产重组蛋白药物的表达系统包括原核和真核表达系统。由于真核表达系统具有完善的翻译后修饰和蛋白折叠等优势,在重组蛋白药物生产中得到广泛应用,常用的真核表达系统有酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞和植物细胞表达系统。本文就常见的真核表达系统的特点、应用和发展前景作一综述,以期为重组蛋白药物选择合适的表达系统,促进新型药物研发提供参考。

关键词： 现代生物技术   人类生活方式   生态环境   现代农业发展   生物酶   科学出版社   应用与价值   基因工程  

摘要： 生物技术对社会经济、生态环境、生物文明等领域的进步影响深远,甚至有人说“21世纪是生物学的世纪”。生物酶、基因工程等现代生物技术已被广泛应用于下游加工技术,并对社会生产和人们的日常生活产生重要影响,推动社会发展与人类生活方式进入新次元。笔者参考由杨慧林、吕虎主编,科学出版社出版的《现代生物技术导论》(第三版)一书,详细介绍现代生物技术的理论和研究方法等,阐述现代生物技术在农业领域的应用与价值,为现代农业发展提供新的技术支持。

关键词： 虚拟仿真   生物制药   基因工程   实验教学  

摘要： 基因工程是生物制药专业本科教学中实践性与应用性极强的一门课程,在专业人才培养中占有重要地位,将虚拟仿真技术融入基因工程实验教学能够实现教学模式的创新,并有效地提升教学质量。文章介绍了利用虚拟仿真进行基因工程实验教学的设计理念、基因工程虚拟仿真平台的建设内容和实施方案,并对平台的建设实践和效果进行了初步分析。今后将根据相关反馈结果和交流信息,继续完善平台,提高生物制药专业学生的综合能力,实现高素质人才的培育。

关键词： 人胸膜间皮瘤   从头测序   单核苷酸多态性   基因插入缺失   基因结构变异   基因拷贝数变异  

摘要： 通过DNA从头测序分析人胸膜间皮瘤发生的高关联度突变基因。提取恶性胸膜间皮瘤(MPM)组织和正常胸膜组织DNA,构建基因文库,用Illumina HiSeqX Ten PE 150平台测序,将测序结果与人类基因组数据库的参考序列进行比对、注释,并对测序结果进行过滤、错误率分布检查、GC含量分布检查分析。MPM组织DNA平均过滤37829946 bp,错误率小于0.12%,GC含量占41.17%,而正常胸膜组织DNA平均过滤39089681 bp,错误率小于0.1%,GC含量占41.7%,两者测序质量均在Q 30(≥80%)以上,MPM为87.43%,正常胸膜为88.36%。以上高质量测序数据通过BWA比对到参考基因组(GRCh 37/hg 19),得到最初比对序列,利用重复标记后的比对序列进行覆盖度、深度等统计,覆盖深度达到10 X以上该突变位点可信。结果显示,实验病例XL14覆盖深度达到10 X的占98.59%,覆盖率达到99.83%;对照病例Z5占98.50%,覆盖率达到99.79%。对该序列进行基因注释分析,发现一系列单核苷酸多态性、基因插入缺失、基因结构变异、基因拷贝数变异,筛选出总变异位点数29277个,可能致病的变异位点数22个,致病性的变异位点数5个,不确定变异有害性的位点数为3353个,其余变异位点均为良性。进一步对突变基因进行富集、关联性分析,预测出突变基因TXNDC2与人胸膜间皮瘤的发生高度相关,相关系数达到0.8以上;突变基因PIEN、ABCC1、UGT1A7、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A9、ALDH3B1、UGT1A5等与人胸膜间皮瘤有一定关联性,关联度在0~0.2之间。基因TXNDC2、PIEN、ABCC1、UGT1A7、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A9、ALDH3B1、UGT1A5的变异可能与人胸膜间皮瘤的发生发展有关。本实验为人胸膜间皮瘤分子诊断提供了参考。

关键词： 科学数据   创新要素   社会经济价值   人类基因组计划   社会经济发展   核心议题   动态平衡   保障安全  

摘要： 科学数据是最为活跃的创新要素,是科学和社会经济发展的基础资源。人类的研究活动已经积累了大量数据财富,并且还将以更快的速度和更大的规模延续这一趋势。如何在保障安全的前提下实现高水平的数据开放共享,充分发挥数据的学术价值及衍生的社会经济价值,不仅是人类基因组计划、国际地圈生物圈计划等大科学计划的核心议题,也是全球学术界乃至全社会的共同关注。

关键词： TP53单克隆抗体   抗体,单克隆   基因工程抗体技术   载体构建   免疫组织化学  

摘要： 目的:利用基因工程抗体技术制备TP53重组抗体,并进行临床病理诊断应用的初步探究。方法:将杂交瘤来源的TP53单克隆抗体重链及轻链可变区基因分别与pGEM-T载体连接,测序分析并选择有效重链及轻链序列分别与pFUSEss-CHIg-mG2B、pFUSE2ss-CLIg-mk及pcDNA3.4载体连接。利用ExpiCHO-S™Expression System进行真核表达,经Protein A柱纯化获得TP53重组抗体。最后将TP53重组抗体和商品化TP53抗体进行蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)应用的初步探究。结果:通过抗体表达纯化获得TP53重组抗体,液相色谱-质谱测定结果显示TP53轻链/重链分子量分别为25 kDa和53 kDa,ELISA效价为1∶2180000,亲和力测定Ka值为6.6×10^(10) L·mol^(-1)。WB结果显示TP53重组抗体与商品化TP53抗体表达结果一致。IHC结果显示TP53重组抗体和商品化TP53抗体识别靶标均定位于细胞核,在人肾癌、人乳腺叶状腺癌、人乙状结肠腺癌及小鼠肝癌中的检测结果一致,且TP53重组抗体在人高分化鳞癌、人肝细胞癌和人乳腺癌中的免疫组化检测效果优于商品化的TP53抗体。结论:本研究成功制备了小鼠抗人TP53重组抗体,并为临床病理诊断提供初步的数据支持。

关键词： 转基因   筛选标记   数字PCR   FMV35S   定量检测  

摘要： 以含有FMV35S标记基因的大豆转化体MON87705为材料,利用实时聚合酶链式反应(real-timepolymerase chain reaction,real-time PCR)和数字PCR(digital PCR,dPCR)技术,建立一种转基因作物的定量检测方法。通过real-time PCR法对扩增体系测试,建立的检测方法对FMV 35S标记基因具有高度特异性;利用双重微滴式dPCR进行定量检测参数的测定,结果表明:在基因组DNA 0.005~20 ng/μL质量浓度范围,靶标基因的测量拷贝数与理论拷贝数具有良好的线性关系;dPCR方法对FMV 35S标记基因的检出限可达到5 copies,定量限为0.1%。利用两个dPCR平台,对不同含量的转基因作物的盲样进行测定,内标准基因和外源特异性片段的双重、三重测定,均获得准确的定量结果,数据可靠,再现性良好。因此本研究建立的基于筛选标记基因FMV 35S的转基因dPCR定量检测方法在满足转基因成分定量检测标准的参数要求的同时,能够进一步提高检测效率,可为转基因作物成分定量提供一种准确、简便的检测技术。

关键词： 高职   基因工程制药技术   课程思政  

摘要： 课程思政是当前人才培养改革的热点、重点和难点,该文以《基因工程制药技术》课程为例,分析其教学过程中课程思政育人功能未得到很好发挥的原因,通过优化课程建设、提升教师课程思政能力、完善课程思政评价办法3方面落实《基因工程制药技术》课程思政教学改革,以期更好地完成课程教学工作,提高课程思政育人效果。

关键词： 单克隆抗体   基因工程   抗体类型转换   表达条件优化  

摘要： 为建立抗体类型转换和表达体系,以最新制备的1株IgM类抗体——鼠抗人DCP单克隆抗体7C2为研究对象,首先从7C2杂交瘤细胞中克隆IgM轻重链可变区,再将IgM可变区序列与鼠IgG1恒定区序列融合克隆至真核表达载体,并转入293细胞系中。利用蛋白质免疫印迹技术,成功检测到IgG1抗体在细胞内的表达并分泌至培养上清。在进一步优化密码子、宿主细胞和信号肽等影响抗体表达的因素后,建立了双质粒瞬转和基于双顺反子表达方式的稳转表达体系,可用于将鼠源IgM类抗体转换为IgG类抗体并进行表达。该研究为拓展非IgG类抗体的应用范围提供重要途径,同时为提高重组抗体在真核体系中的表达效率提供参考。