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关键词： 姜黄素   人   胚样小体/药物作用   干细胞   细胞分化/药物作用   基因表达/药物作用   眼色素上皮   Wnt蛋白/代谢  

摘要： 背景 来源于多能干细胞的视网膜色素上皮（RPE）细胞移植治疗年龄相关性黄斑变性（AMD）和视网膜色素变性（RP）是近年研究热点,但RPE体外分化诱导效率低下、成本高等一直是难以克服的障碍.研究表明,姜黄素（curcumin）可促进人胚胎干细胞（ESCs）的定向诱导分化,但其对人ESCs向RPE样细胞的定向分化的作用机制尚不清楚. 目的 研究体外培养的人ESCs向视网膜色素上皮（RPE）样细胞的诱导分化过程,探讨curcumin对人ESCs向RPE细胞定向诱导效率的影响及其机制. 方法 将人ESCs株进行体外培养,将处于对数生长期的ESCs传代至基质膜（Matrigel）包被的6孔板中,以mTeSRTM1培养基培养至过渡融合状态后更换为含质量分数87％ KnockOutTM DMEM、质量分数10％血清替代物（SR）、质量分数1％非必需氨基酸和质量分数1％谷氨酰胺及青链霉素双抗的分化诱导体系,同时加入终浓度为1 μmol/L的curcumin处理24 h,对照组培养基中未加入curcumin.分别于诱导培养3周及5周时提取细胞RNA及蛋白,采用荧光定量逆转录PCR（RT-PCR）法检测诱导RPE（iRPE）细胞中干细胞标志物、RPE相关标志物及Wnt/β-catenin信号通路相关因子mRNA的相对表达水平;采用Western blot法及免疫荧光染色检测人ESCs、iRPE细胞及人RPE细胞中相关标志物蛋白的表达水平;通过细胞吞噬实验检测iRPE细胞的吞噬功能. 结果 Curcumin组诱导后3周时即可见iRPE细胞色素化,随着时间延长色素化程度更高,而对照组细胞在诱导后5周时开始出现细胞色素化.RT-PCR结果显示,curcumin诱导后3周及5周,curcumin组iRPE细胞中ESCs标志物NANOG mRNA的相对表达水平明显低于对照组,差异均有统计学意义（t=13.086,P=0.022;t=34.186,P=0.004）,而RPE标志物Pax6、RX、CRALBP及RPE65 mRNA的相对表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.Western blot检测显示,CRALBP、RPE65和MITF蛋白在iRPE细胞中表达,表达强度与人RPE细胞相近,而人ESCs不表达上述蛋白.免疫荧光染色显示,iRPE细胞中Pax6、MITF和ZO-1蛋白表达阳性,分别定位于细胞质和细胞膜,可见curcumin组得到的细胞为iRPE细胞,纯化效率达到100％,体外细胞吞噬实验显示,iRPE细胞的细胞质内呈现的聚苯乙烯荧光微球接近阳性对照组,而阴性对照组iRPE细胞中未见到聚苯乙烯荧光微球.诱导培养后第3周和第5周时,curcumin组细胞中Wnt信号通路下游靶因子Lef1、MYC和TCF7,Wnt受体FZD3及Wnt配体Wnt2B和Wnt7B的mRNA相对表达水平明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）. 结论 Curcumin能提高人ESCs向RPE样细胞的定向诱导效率,其主要机制可能是通过促进Wnt/β-catenin信号通路的活性,从而促进iRPE细胞的分化和成熟。

关键词： 转基因作物   德国   欧盟   种植   克里斯蒂   农业部长   路透社   州政府  

摘要： 据英国路透社8月24日报道，一份文件显示，德国已开始行动，依据欧盟新规停止种植转基因作物。据称，德国农业部长克里斯蒂安·施密特已通知德国各州政府．他计划告知欧盟，德国将使用新的“选择退出”权停止种植转基因作物，即便一些品种在欧盟批准的范同内。

关键词： 锰过氧化氢酶   转运蛋白   共表达   发酵优化  

摘要： 构建Mn2+转运蛋白MntH与来源于Thermus thermophilus HB27的含锰过氧化氢酶的共表达基因工程菌,并进行了发酵培养基及培养环境条件的优化,确定培养基中最佳的碳氮源种类及其浓度分别为:甘油7.0 g/L,酵母粉3.75 g/L和蛋白胨11.25 g/L;当培养基中的Mn2+浓度为1 mmol/L时,最佳的IPTG诱导浓度为0.05 mmol/L。此外,最佳的培养基初始p H值及培养温度分别为:p H 8.0和37℃,在最优发酵条件下工程菌摇瓶发酵培养24 h,过氧化氢酶活最高可达476 U/m L是未优化前3倍。在5 L发酵罐的验证实验中,过氧化氢酶的酶活进一步提高至1 094 U/m L。

关键词： 标准重力加速度   中风病人   水玉   衬片   生物分子   系外行星   微型飞行器   胚胎干细胞   小同   生殖能力  

摘要： 加速度之王世界上速度最快的生物是一种叫水玉霉的真菌,它可以让孢子在两微秒内从静止加速到每小时32公里,相当于2万个标准重力加速度。能量采集船科学家研制出一种新式船只,能从波浪中捕捉能源并将其存储在电池中。神奇的大脑帽美国发明了一款"大脑帽",可使中风病人仅靠意念支配身体移动。

关键词： Genomic cloning   genetic engineering   insect biotechnology   recombinant proteins   sex control   silk   TARGETED GENE-EXPRESSION   YELLOW-FEVER MOSQUITO   ARTIFICIAL PARTHENOGENESIS   PROTEIN-PRODUCTION   H-CHAIN   TRANSFORMATION   FIBROIN   GLAND   MUTAGENESIS   INTERFERON  

摘要： Genetic engineering of the silkworm, Bombyx mori, opens door to the production of new kinds of silk and to the use of silkworms as proteosynthetic bioreactors. The insertion of foreign genes into silkworm genome and the control of their expression by diverse promoters have become possible but are not yet efficient enough for commercial use. Several methods of gene targeting are being developed to minimize position effect on transgene expression and facilitate cloning. Parthenocloning can be exploited to conserve genetic traits and improve selection and amplification of clones containing genes of interest. Some silkworm clones have been bred for decades as genetically stable female stocks whose unfertilized eggs are induced to develop by heat-shock treatment. Any exclusively female generation contains exact copies of the maternal clone-founder genome. Ovaries transplanted in either direction between the standard and the parthenogenetic genotypes yield eggs capable of parthenocloning. In addition, use of male larvae as ovary recipients eliminates diapause in eggs produced in the implants. Unfertilized eggs of some silkworm clones respond also to the cold-shock treatment by producing homozygous fertile sons; cloned females can be crossed with their parthenogenetic sons to obtain progeny homozygous for the transgene in both sexes. Rational exploitation of available parthenozygous pools and the use of parthenocloning methods enable rapid fixation and maintenance of the desired genotypes.

关键词： 基因工程   教材  

摘要： 本书首先介绍了基因工程的发展历程、研究内容和发展前景，然后根据基因工程操作的技术路线，对核酸的制备、限制性内切核酸酶、基因克隆载体、目的基因的制备、外源基因导入受体细胞、外源基因的表达等进行了详细的介绍。同时，根据基因工程的最新进展，对基因组与改造、蛋白质工程、代谢工程及基因工程应用进行了介绍。

关键词： BIOTECHNOLOGY ethics   ALZHEIMER'S disease   AMYOTROPHIC lateral sclerosis   DRUG therapy   MULTIPLE sclerosis  

摘要： The article focuses on the importance of ethics in medical biotechnology with specific reference to research in medical biotechnology.

关键词： 转基因作物   转基因技术   安全性  

摘要： 近年来,转基因农产品安全性问题在社会上引起了巨大争议,致使很多人谈"转基因"色变,但事实上,转基因作物并非那么可怕。大量实验显示,转基因农产品不具有致敏性、急性毒性,转基因蛋白几乎不可能进入动物的器官并蓄积,大部分动物饲养试验也没有发现转基因产品的有害性。

关键词： 鸡基因工程复合抗病毒制剂   冻干   保护剂   保存期  

摘要： 采用不同高压灭菌条件处理的不同比例的脱脂奶粉、蔗糖、海藻糖以及维生素C组成的保护剂配方对鸡基因工程复合抗病毒制剂进行冻干,冻干后通过外观检查、p H值检测、复水性检测及效价测定比较筛选出了理想的冻干保护剂,之后将普通水剂型和冻干型鸡基因工程复合抗病毒制剂分别置于4℃、-20℃、-70℃条件下进行保存期试验,结果表明采用脱脂奶粉+蔗糖、脱脂奶粉+蔗糖+海藻糖+维生素C两种配方对鸡基因工程复合抗病毒制剂的保护效果最好,冻干后效价仍为220;普通水剂和冻干型鸡基因工程复合抗病毒制剂在-70℃保存条件下保存360天内效价均未降低,普通水剂分别于90天、180天后效价开始明显下降,而冻干型鸡基因工程复合抗病毒制剂的效价均无明显降低,稳定性良好。本研究初步筛选出了鸡基因工程抗病毒制剂的冻干配方,显著延长了其保存期,为鸡基因工程抗病毒制剂规模化生产和推广应用奠定了基础。