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关键词： 羊口疮病毒   载体   重组病毒   基因工程  

摘要： 重组病毒载体是当前病毒基因工程研究的热点之一。羊口疮(orf),也称羊传染性脓疱皮炎,是由羊口疮病毒(orf virus,ORFV)引起的急性、接触性、嗜上皮性人畜共患传染病。ORFV为痘病毒科(Poxviridae)、脊索动物痘病毒亚科(Chordopoxrinae)的副痘病毒属(Parapoxvirus)成员,线性双股DNA病毒,病毒基因组较大,改造后可容纳较大的外源基因,适合开发为活病毒载体。本文综述了orf重组活病毒载体的优势、构建策略及其应用研究的最新进展,为ORFV研究、重组活病毒开发应用提供参考。

关键词： 基因工程   OBE   评价方式   达成度  

摘要： 随着基因工程在各行各业的广泛应用,生物类相关企业急需一批掌握DNA重组技术的专业人才。为了适应建设地方应用型高水平大学的要求,在产出导向性教育理念的指导下,《基因工程》的课程教学体系进行重构,并将线上线下混合式教学、翻转课堂、在线互动等以学生为主体的评价模式融入考核体系。经过教学实践,教学效果达到预期目标,课程改革达到了激发学生兴趣、培养学生能力的目的。

关键词： 内胚层   分化   长链非编码RNA   DANCR   WNT信号通路  

摘要： 【目的】探讨DANCR在人胚胎干细胞(hESC)向内胚层(DE)分化中的作用。【方法】建立体外诱导hESC向DE分化的体系,检测DANCR的表达水平与DE分化的相关性;利用慢病毒体系敲低hESC的DANCR表达水平,将敲低DANCR的hESC进行DE分化;用qPCR和Western blot方法检测DE分子标志物SOX17和FOXA2,以及原条分子标志物Brachyury(T),EOMES,MIXL1和GSC的表达水平;用Dual luciferase reporter assay和qPCR证明在DE分化过程中DANCR与WNT通路的相互作用。【结果】体外诱导hESC向DE分化的体系能够有效模拟体内DE分化,DANCR的表达水平随DE分化进程逐渐下降。建立敲低DANCR的hESC细胞株,DANCR表达水平相比对照组显著降低(P<0.001)。干扰DANCR表达使分化早期的原条分子标志物Brachyury(T),EOMES,MIXL1和GSC,以及分化后期的DE分子标志物SOX17和FOXA2的mRNA表达水平相比对照组显著降低(全部P<0.05)。并且,在DE分化过程中,敲低DANCR组的WNT通路的转录活性相比对照组显著降低(P<0.05),表现为WNT通路下游基因FZD5,FZD8,SFRP1,FRZB和ANKRD6 mRNA表达水平明显减少(P<0.05)。然而,敲低DANCR对TGFβ通路的SMAD2/3和p-SMAD2蛋白表达水平没有显著影响(P>0.05)。人为激活细胞内β-CATENIN蛋白活性,能够有效回补由于敲低DANCR导致的DE分化缺陷。【结论】DANCR在DE分化过程中逐渐下调并促进DE分化发生,DAN⁃CR可能通过与WNT通路相互作用参与调控hESC向DE分化。

关键词： L-酪氨酸   基因工程   微生物   微生物发酵   代谢工程  

摘要： L-酪氨酸是一种具有重要营养功能的芳香族氨基酸，在食品、饲料、医药以及化工等行业具有广泛的应用。通常生产L-酪氨酸的方法有化学合成法、水解法和代谢工程改造微生物合成法。相较于前2种方法的众多缺陷，代谢工程改造微生物合成L-酪氨酸越来越广泛被利用。该文综述了利用代谢工程改造微生物提高L-酪氨酸产量的方法，以期为相关科研者提供一定的思路。

关键词： DNA条形码   蚕豆   trnL基因   DNA测序   分子鉴定  

摘要： 为建立一种基于DNA条形码技术的快速识别蚕豆方法，本研究首先根据DNA提取试剂盒操作说明对13种供试样进行DNA提取，接着用trnL基因扩增的引物和方法进行扩增，然后用ExoSAP-IT酶处理纯化PCR扩增产物，再对纯化后的产物进行测序，接下来多序列比较，寻找蚕豆鉴定的特异性位点和序列，通过Primer premier 5和网络版的Primer 3软件进行特异引物的设计，最后进行PCR特异片段扩增反应进行PCR产物检测。结果显示采用天根DNA提取试剂盒提取植物基因组DNA效果较好；trnL基因的扩增电泳条带清晰，条带大小均在500 bp左右；用特异引物P1、P2进行PCR扩增实验，只有蚕豆有198 bp大小的条带，其它材料无扩增，可以达到蚕豆分子鉴定的目的。本研究成功开发出基于DNA条形码技术，可鉴定出蚕豆的分子标记。

关键词： 乙型肝炎病毒   HBV整合   探针捕获   高通量测序   克隆测序  

摘要： 目的 采用探针捕获和高通量测序技术研究HepG2.2.15与HepAD38 2个乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)肝癌细胞系中病毒DNA在宿主基因组中的整合位点特征。方法 提取HepG2.2.15与HepAD38细胞基因组DNA,采用探针捕获和高通量测序策略对2个肝癌细胞株中整合的HBV DNA进行捕获测序,使用Trimmomatic、BBAP、BWA(Burrows-Wheeler Aligner)等生物信息学软件进行数据分析;最后通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)及克隆测序对病毒DNA整合特征进行验证。结果 利用探针捕获和高通量测序技术分别在HepG2.2.15与HepAD38细胞系中检测出12、7个HBV DNA整合事件,随机分布在chr1、chr2、chr7、chr9、chr16、chr17、chr19、chrX染色体上,整合位点上下游基因出现频率较高的有DPP7、TRIM56、GPC3等。结论 成功建立基于探针捕获和高通量测序技术检测HBV DNA在宿主基因组上的整合片段的方法,HepG2.2.15与HepAD38细胞系中HBV整合事件在染色体上随机发生,大部分整合位点发生在HBV基因组上的X基因区域。

关键词： 石油污染物   基因工程菌   微生物修复   合成生物学   降解  

摘要： 构建基因工程菌(genetically engineered microorganisms,GEMs)是石油污染生物修复的重要发展方向.目前,通过基因编辑、过表达和定向进化等手段改造微生物的石油污染物降解和调控途径,可以提高微生物的环境适应能力和污染物降解能力,用于石油污染物的生物降解和监测.本文概述了石油污染物降解基因工程菌的主要构建策略,包括选择和改造宿主菌、改造与优化石油污染物关键酶和代谢通路、开发微生物全细胞传感器和构建基因工程菌的自毁程序.此外,基因工程菌也可用于石油污染的酶修复、微生物菌群修复和细菌-植物联合修复.随着系统生物学和合成生物学在降解微生物中的应用,基因工程菌在石油污染修复中展现出良好的研究和应用前景.

关键词： 工程思维   基因工程   单元教学   干扰素  

摘要： “基因工程”一章内容对于培养学生的工程思维具有重要的育人价值。本单元以“通过基因工程生产人干扰素”为主线设计6个学习活动,沿着“需求(问题)分析→设计方案→实施→优化方案→再实施,直到获得理想的工程成果”的思维路径,引导学生针对5个依次提升的工程需求,不断寻求解决问题的思路,实现技术和工程的迭代和优化,帮助学生形成工程思维。