关键词:
灰葡萄孢
挥发性物质
促生作用
真菌病毒
非编码RNA
摘要:
灰霉病主要由葡萄孢(Botrytis spp.)和葡萄孢(Botrytis-like fungi)类似属引起,可以危害1400余种植物。往往造成重大损失。本实验室前期分离到一株灰霉病菌菌株QT5-19,该菌株在培养基上不产菌核和孢子,致病力丧失,能够产生挥发性气体抑制其他真菌生长,并促进植物生长。研究还发现QT5-19中携带真菌病毒,为了探究其对宿主真菌的影响,将QT5-19与另一个灰葡萄孢菌株QS17-3对峙培养,获得了1个传毒后菌株QS17-3V。本论文以QS17-3和QS17-3V为研究材料,探究QS17-3V的生物学特性及其促进植物生长的分子机制,取得的主要研究结果如下:(1)明确了菌株QS17-3V的分类属性及主要生物学特性在PDA培养基上20℃下培养QS17-3V,菌丝体初期白色,生长速度15.2 mm/d,4 d开始产生白色气生菌丝,直到15 d不产菌核和分生孢子。基于G3PDH序列对菌株QS17-3V、QS17-3和QT5-19进行系统进化分析,结果显示,这些菌株与灰葡萄孢(***)聚为一支。形态学与分子系统学鉴定QS17-3V属于灰葡萄孢。与QS17-3相比,在7种不同的培养基上培养,QS17-3V在CDA上生长速度明显快于QS17-3,在CMA、MM和SDA上生长速度较QS17-3慢。在MMN、YMEA和YSS上的生长速度与QS17-3相比无显著差异(P>0.05)。QS17-3V在所有培养基上均不产菌核和孢子。显微观察结果表明:菌株QS17-3V菌丝形态正常,分生孢子大小为5~7μm×3~4μm(长×宽)。致病力测定结果显示菌株QS17-3V在烟草、番茄上可以致病,培养72 h后病斑直径显著低于QS17-3在同等接种条件下造成的病斑直径。挥发性气体活性测定结果表明:QS17-3V产生的挥发性有机物质(Volatile organic compounds,VOCs)显著抑制灰霉病菌Streptobotrys sp.菌株Strepto BC-1菌核形成以及灰葡萄孢菌株Rose BC-3分生孢子产生,对瓜果腐霉、尖孢镰刀菌等病菌菌丝生长具有显著抑制作用。(2)发现QS17-3V产生的VOCs能对显著促进番茄生长,明确了VOCs的主要成分。在密封玻璃箱中测定了菌株QS17-3V和QS17-3产生的VOCs对番茄生长的影响,以灭菌空皿释放的挥发性物质处理为对照。结果显示,培养21 d后(20℃),与QS17-3的VOCs和对照VOCs处理相比,QS17-3V的VOCs处理番茄植株株高增加20.18%,茎基直径增加23.18%,植株鲜重增多27.94%,干重增加27.16%,差异达到显著水平(P<0.05)。可见,菌株QS17-3V产生的VOCs具有促进番茄生长的能力。通过顶空吸附法,抽取菌株QS17-3V产生的VOCs(PDA培养物,7 d),用GC-MS检测VOCs,并与数据库比对,共鉴定出10种挥发性物质。4种物质在QS17-3V中产生较多。(3)明确了QS17-3V中的真菌病毒种类通过宏病毒组测序技术,分析了菌株QS17-3V和QT5-19中的真菌病毒种类及含量。共检测到6种真菌病毒,其中,在QS17-3V中检测到3种真菌病毒,属于Fusariviridae、杆状RNA病毒科和副粘病毒科,在QT5-19中检测到5种真菌病毒,包括双分体病毒科、长尾病毒科、Fusariviridae、杆状RNA病毒科以及未分类的逆转录病毒科,2种真菌病毒在两个菌株中均存在,1种是Fusarivirus,另外1种是未描述的新种。(4)基于分析RNA深度测序数据,为揭示QS17-3V产生VOCs提供了重要线索对QS17-3V和QS17-3(QS17-3V的近等基因系)在转录水平上的差异表达基因进行了分析。共得到了m RNA、lnc RNA、s RNA和circ RNA等4个文库,共得到了1329个lnc RNA以及1054381个s RNA和circ RNA对应的基因信息6624个。共筛选到差异表达基因、差异的lnc RNA、mil RNA和circ RNA分别为1869、81、11和70个。差异表达基因和差异nc RNA的靶基因GO功能注释主要富集到蛋白质结合、生物代谢过程和催化活性等过程中。KEGG富集分析结果表明:差异表达基因集中在代谢途径。其中,有178个基因与代谢有关,可能是促生VOCs合成相关的基因。