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关键词： 肺癌   微小RNA-508-3p   PAX2基因   RNA干扰   侵袭   凋亡  

摘要： 目的探讨微小RNA-508-3p(miR-508-3p)在肺癌组织中的表达及其对肺癌细胞增殖活力、侵袭能力、凋亡率的影响与机制。方法采用定量聚合酶链反应(qPCR)法和蛋白质印迹法(Western blotting)检测肺癌组织中miR-508-3p和配对盒基因2(PAX2)表达,分析两者的相关性。分别用miR-508-3p模拟物(miR-508-3p组)、模拟物阴性对照miR-NC(miR-NC组)、PAX2 siRNA si-PAX2(si-PAX2组)、siRNA阴性对照(si-NC组)、miR-508-3p抑制剂anti-miR-508-3p(anti-miR-508-3p组)、抑制剂阴性对照anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、共转染miR-508-3p和PAX2过表达质粒pcDNA-PAX2(miR-508-3p+pcDNA-PAX2组)、共转染miR-508-3p和空白质粒pcDNA-NC(miR-508-3p+pcDNA-NC组)转染肺癌A549细胞,并设置空白组。采用噻唑蓝(MTT)法检测24~72 h的细胞增殖活力;采用Transwell小室及流式细胞术分别检测细胞侵袭能力及凋亡率,采用Western blotting检测A549细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。根据双荧光素酶活性检测结果评估miR-508-3p对PAX2的靶向调控。结果肺癌组织miR-508-3p表达低于癌旁组织,PAX2 mRNA和PAX2蛋白表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);PAX2蛋白和miR-508-3p的表达呈显著负相关(P<0.05)。与空白组比较,miR-508-3p组Bax表达和细胞凋亡率均升高,MMP-2、Bcl-2蛋白表达和增殖活力、侵袭能力均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与si-NC组比较,si-PAX2组PAX2、MMP-2、Bcl-2表达降低,Bax表达、凋亡率升高,增殖活力和侵袭能力降低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-508-3p靶向PAX2基因,调控PAX2蛋白的表达。PAX2可以逆转miR-508-3p对A549细胞增殖活力、侵袭能力以及细胞凋亡的影响。结论 miR-508-3p在肺癌组织低表达,其过表达可降低A549细胞增殖活力及侵袭能力,诱导细胞凋亡,机制与靶向调控PAX2基因有关。

关键词： 内皮祖细胞   阿魏酸   细胞增殖   细胞迁移   细胞黏附   细胞成管   血小板衍生生长因子   血管新生  

摘要： 目的观察阿魏酸(FA)对人脐带血内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移、黏附、成管以及分泌血小板衍生生长因子(PDGF)能力的影响。方法取足月健康新生儿脐带血,通过密度梯度离心法分离得到单个核细胞,经CD31抗体和DAPI核染、FITC-UEA-I和Dil-AC-LDL双荧光联合染色法鉴定得到EPCs。将鉴定成功的EPCs分别加入0、1、2、4、8、16 mg/L FA培养,筛选FA促EPCs增殖的最佳浓度。另将EPCs分为FA组和对照组,FA组用最佳浓度FA干预,对照组加入等体积PBS液。采用CCK-8试验观察细胞增殖能力,细胞划痕试验观察细胞迁移能力,黏附能力试验测定细胞黏附数量,Matrigel体外成管试验测定细胞成管数量,ELISA法检测细胞培养上清液中的PDGF水平。结果 FA组细胞增殖OD值为0.77±0.13;对照组为0.43±0.07;FA组贴壁细胞数为(48.66±5.82)个,对照组为(31.32±2.90)个;FA组细胞迁移绝对宽度为(13.13±0.25) mm,对照组为(10.77±0.76) mm;FA组体外成管数为(594.91±73.12)个,对照组为(271.64±31.02)个;FA组PDGF水平为(249.97±14.23)pg/mL,对照组为(53.97±9.62) pg/mL;与对照组相比,FA组细胞增殖能力增加,细胞黏附数增多,细胞迁移绝对宽度增加,体外成管数增多,PDGF水平升高(P <0.05或<0.01)。结论 FA能够在体外促进EPCs的增殖、迁移、黏附和成管能力,并促进细胞分泌PDGF,从而加强EPCs的血管新生作用。

关键词： 长链非编码RNA   肝癌   微小RNA   增殖   侵袭   转移  

摘要： 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)GSTM3TV2对肝癌细胞增殖、侵袭和转移的影响,并探讨其与微小RNA(miR)-597的相互作用。方法选取郑州大学附属南阳市中心医院、南阳市宛城区第一人民医院和郑州大学第一附属医院2016年5月到2018年5月收集的126例肝癌和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁和肝癌组织中GSTM3TV2和miR-597表达水平;在肝癌细胞系HepG2建立lncRNA对照组和GSTM3TV2 KD组细胞系,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell和体内异体移植瘤实验检测GSTM3TV2的体内外功能;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析GSTM3TV2与miR-597的关系;将miRNA抑制剂转染HepG2细胞,分析其作用机制。计量数据比较采用t检验。结果肝癌组织中GSTM3TV2表达水平(2.96±0.34)明显高于癌旁组织(2.96±0.34),差异有统计学意义(t=4.819,P<0.05)。lncRNA对照组细胞48 h吸光度(A)值(2.17±0.22)明显高于GSTM3TV2 KD组(1.09±0.20),差异有统计学意义(t=3.429,P<0.05)。lncRNA对照组细胞侵袭数量[(154.82±13.83)个]明显高于GSTM3TV2 KD组[(87.29±10.43)个],差异有统计学意义(t=5.018,P<0.05)。lncRNA对照组细胞体内成瘤体积[(1048.45±251.30)mm3]明显大于GSTM3TV2 KD组[(759.49±142.09)mm3],差异有统计学意义(t=4.719,P<0.05)。lncRNA对照组细胞体内肿瘤重量[(1.09±0.21)g]明显高于GSTM3TV2 KD组[(0.61±0.15)g],差异有统计学意义(t=3.185,P<0.05)。lncRNA对照组细胞淋巴结转移数量[(15.29±3.39)个]明显多于GSTM3TV2 KD组[(8.22±2.09)个],差异有统计学意义(t=3.103,P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶活性结果显示miR-597是GSTM3TV2的靶基因。lncRNA对照组细胞miR-597表达水平(1.09±0.21)明显低于GSTM3TV2 KD组(2.80±0.26),差异有统计学意义(t=3.529,P<0.05)。结论lncRNA GSTM3TV2通过调节miR-597促进肝癌细胞增殖、侵袭和转移等恶性细胞生物学行为。

关键词： 间充质干细胞   体外培养   免疫   细胞治疗  

摘要： 间充质干细胞是目前应用前景最广泛的优质再生医学资源,由于其没有配型、排异等问题,极其适合于临床研究和应用。为满足临床应用的大量需求,间充质干细胞的体外大规模扩增是必需的。然而体外培养的间充质干细胞随着传代次数的增加,会产生许多生物学变化。该文对在体外连续传代的间充质干细胞的细胞和分子水平上的特征和功能变化作一综述,旨在为进一步优化细胞治疗方案做出理论参考,力求为推动干细胞产业的标准化作出贡献。

关键词： 细胞生物学   现代生物技术   生物化学   基因工程   计算机科学   抵御能力   发酵技术   物质原料  

摘要： 生物技术即人类通过微生物或动植物等生命体对物质原料进行加工制作,从而获得目标产品为社会服务的综合性科技手段。发酵技术与现代生物技术是其主要内容,包括基因工程、生物化学、细胞生物学、计算机科学等在内的现代生物技术为生命活动的深入钻研与深化应用提供了理论支撑,极大地提升了人类面对疾病与灾害的抵御能力。法律视角下,生物技术对生命的根本决定性与对社会的普遍影响力,使其发展面临着全方位的挑战。

关键词： 项目式教学   细胞生物学   实验教学   学习兴趣   综合素质  

摘要： 细胞生物学是一门实践性很强的专业课程,其实践教学知识点多、内容繁杂。传统教学模式下学生学习兴趣不高,而项目式教学能够在一定程度上提高学生的学习兴趣和综合能力。文章分析了项目教学法的特点,指出项目式教学法在细胞生物学实践教学中应用的必要性。实践证明,项目式教学法使学生的学习积极性和主动性都得到了显著提升,课程教学质量也得到了提高。

关键词： 科教融合   生物物理学   会议简讯   学术期刊   系统生物学   栏目设置   神经科学   细胞生物学  

摘要： (2022年1月修订)1征稿范围与栏目设置1.1征稿范围本刊为国内外公开发行的全国性学术期刊,月刊,每月20日发行。征稿的学科范围是生物化学、分子生物学、生物物理学、细胞生物学、神经科学、免疫学,以及基因组学、蛋白质组学、系统生物学等相关学科领域。1.2栏目设置本刊设有综述与专论、研究快报、研究报告、技术与方法、新技术讲座、科教融合、Letter to Editor、动态与评论、学术争鸣等栏目。同时也刊登学术会议简讯、征文通知、书讯等。

关键词： 胰腺癌   表皮生长因子受体   增殖   侵袭   迁移  

摘要： 目的探讨分选蛋白(SNX)17通过激活表皮生长因子受体(EGFR)影响胰腺癌细胞侵袭、增殖和迁移能力。方法采集3例人胰腺癌组织及癌旁组织样本,自2021年1月至2021年3月收集于贵州医科大学附属医院肝胆外科,用免疫组织化学(IHC)染色检测癌组织与癌旁组织中SNX17的表达量。用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测胰腺癌细胞系中SNX17的相对表达量;用空siRNA以及两种敲低SNX17的小干扰RNA(siRNA)分别转染上述细胞,分组为NC组、SNX17-si1组和SNX17-si2组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验检测胰腺癌细胞的增殖能力,Transwell及划痕实验检测胰腺癌细胞迁移能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测在SNX17敲低的癌细胞中EGFR以及细胞外调节激酶(ERK)的相对表达量差异。最后在胰腺癌细胞中共转染siRNA以及EGFR的过表达质粒进行功能回复实验(分组为NC组、SNX17-si1组、EFGR-overexpression+SNX17-si1组),组间比较采用t检验,组内两两比较采用LSD-t检验。结果免疫组织化学检测结果显示癌组织中SNX17相对表达量高于癌旁组织(5.750±1.323,t=4.345,P<0.05),差异有统计学意义。RT-qPCR发现在胰腺癌细胞系中,人胰腺癌细胞-2(MIA PaCa-2,19.240±2.048、t=8.844,P<0.05)和人胰腺癌细胞-1(PANC-1,5.796±1.256,t=3.712,P<0.05)细胞中SNX17相对表达量显著高于其他胰腺癌细胞系,差异有统计学意义。CCK-8实验技术结果显示,SNX17-si1组、SNX17-si2组低于NC组吸光度值(0.707±0.059比0.346±0.075比1.109±0.052比0.602±0.047,t=12.060、4.642、21.440、12.750,P<0.01),差异有统计学意义。平板克隆结果显示转染组细胞集落数减少。划痕实验结果显示敲低SNX17降低细胞的侵袭能力。Transwell迁移实验结果显示,SNX17-si1组、SNX17-si2组单位视野穿过的细胞数低于NC组[(666.300±14.400)个比(574.300±10.800)个比(129.300±4.300)个比(93.700±3.100)个,t=46.260、53.220、29.850、15.450,P<0.01],差异有统计学意义。而侵袭实验结果表示,SNX17-si1组、SNX17-si2组单位视野穿过的细胞数低于NC组[(137.5±20.1)个比(100.8±17.4)个比(324.5±7.9)个比(289.8±10.2)个,t=6.836、5.807、41.020、28.430,P<0.01],差异有统计学意义。Western blot检测结果显示,SNX17-si1组与SNX17-si2组EGFR的相对表达量低于NC组(0.477±0.032比0.278±0.042比0.853±0.053比0.826±0.050,t=14.920、6.640、16.130、16.430,P<0.01),差异有统计学意义。在回复实验中,CCK-8、Transwell实验及划痕实验证明共转染EGFR-overexpression+SNX17-si1逆转敲低SNX17所导致的胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的降低。最后用Western blot结果表明,共转染组比较单独转染SNX17-si1的组别,EGFR的相对表达量分别增高(0.712±0.010、t=70.220,P<0.05;1.002±0.027、t=37.580,P<0.05),差异均有统计学意义。结论SNX17通过影响EGFR促进胰腺癌细胞MIA PaCa-2和PANC-1的增殖、侵袭、迁移能力。

关键词： 间质干细胞   骨髓   颌   生物学行为   影响因素  

摘要： 颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cell,JBMMSC)是存在于上下颌骨内的一种具有较强增殖能力和多向分化潜能的成体干细胞。病理因素、理化因素及生物因素均可影响JBMMSC的生物学特性。由于组织来源和成骨方式不同,相比来源于长骨的骨髓间充质干细胞,JBMMSC的生物学特性具有部位特异性,相同的影响因子对两种细胞的影响程度也不同。同时JBMMSC还具有取材方便、创伤小、免疫原性低等特点,在颅颌面骨缺损修复、牙周组织再生以及提高口腔种植术后成功率等方面具有广阔的应用前景,在基础和临床研究中引起广泛的关注。但关于JBMMSC增殖和分化的调节机制始终不清晰,影响了其作为种子细胞的应用。本文对JBMMSC生物学特性、影响因素以及在临床与基础研究中的应用进展进行综述,以期为相关基础及临床研究提供依据。

关键词： 黄芩苷   Wnt/β-catenin信号通路   肺癌H460细胞   生物学特性  

摘要： 目的探讨中药单体黄芩苷对人肺癌H460细胞增殖、凋亡、上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移生物学特性及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测不同浓度的黄芩苷对H460细胞细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50)。通过流式细胞术检测黄芩苷对H460细胞凋亡的影响,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中上皮性钙黏附素(E-cadherin)、神经性钙黏附素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)基因表达量,划痕实验检测黄芩苷对H460细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测黄芩苷对H460细胞侵袭能力的影响,Western印迹检测H460细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及Wnt/β-catenin信号通路Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)等关键蛋白表达情况。结果黄芩苷可抑制H460细胞增殖,且呈浓度依赖性关系,对H460细胞的IC50为(188.1±11.52)μmol/L;黄芩苷以浓度依赖性促进H460细胞凋亡,抑制H460细胞侵袭和迁移;qRT-PCR结果发现黄芩苷能够促进H460细胞中E-cadherin基因表达,抑制N-cadherin和Vimentin基因表达;黄芩苷可下调PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达,上调Bax蛋白表达,且能够抑制Wnt/β-catenin信号通路中Wnt1和β-catenin蛋白表达。结论黄芩苷可抑制人肺癌H460细胞增殖、EMT、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,该过程的分子机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。