关键词:
卵巢肿瘤
沉默视黄醇结合蛋白2
迁移
侵袭
上皮-间质转化
摘要:
目的探讨下调视黄醇结合蛋白2(RBP2)基因表达对卵巢癌细胞生物学特性的影响及其机制。方法建立稳定下调RBP2表达的顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP-RBP2i,并设置阴性对照组和空白对照组。采用细胞计数盒8(CCK-8)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法检测上皮-间质转化(EMT)相关分子标志物的表达。通过裸鼠移植瘤实验验证RBP2对卵巢癌生长的影响,采用美国TCGA数据库中的卵巢癌临床数据分析RBP2表达与肿瘤转移和患者预后的关系。结果下调RBP2的表达后,SKOV3/DDP细胞的增殖能力明显下降,第5天时,SKOV3/DDP-RBP2i组、阴性对照组和空白对照组的增殖活性分别为(56.67±4.16)%、(84.67±3.51)%和(87.00±4.00)%,差异开始有统计学意义(P<0.001)。SKOV3/DDP-RBP2i组的凋亡率为(14.19±1.50)%,高于阴性对照组[(8.77±0.75)%]和空白对照组[(7.48±0.52)%,P<0.001];侵袭细胞数为(55.20±2.39)个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为(82.60±5.18)个和(80.80±7.26)个,P<0.001)];划痕愈合率为(28.47±2.72)%,低于阴性对照组和空白对照组[分别为(50.58±4.06)%和(48.92±4.63)%,P<0.001]。SKOV3/DDP-RBP2i组细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白表达量高于阴性对照组(P=0.015,P<0.001)和空白对照组(P=0.006,P<0.001),N-cadherin的mRNA和蛋白表达量低于阴性对照组(P=0.012,P<0.001)和空白对照组(P=0.005,P<0.001),vimentin的mRNA和蛋白表达量也低于阴性对照组(P=0.016,P=0.001)和空白对照组(P=0.011,P=0.001)。裸鼠接种细胞后,自第5周开始,SKOV3/DDP-RBP2i组、阴性对照组和空白对照组的肿瘤体积差异有统计学意义,SKOV3/DDP-RBP2i组的肿瘤体积小于阴性对照组和空白对照组(P=0.001)。生物信息学分析显示,发生转移的卵巢癌患者RBP2表达量高于未转移者(P=0.043),RBP2高表达卵巢癌患者的生存时间(中位生存时间为41个月)短于RBP2低表达患者(中位生存时间为69个月,P<0.001)。结论下调RBP2表达可抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制EMT有关。