关键词:
电穿孔
骨髓间充质干细胞
绿色荧光蛋白质类
转染
摘要:
目的探讨电穿孔法转染增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因对人骨髓间充质干细胞(Human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)生物学特性的影响。方法采用密度梯度离心法分离健康人BM-SC,将pEGFP-N1质粒电穿孔转染hBMSCs,倒置显微镜下观察转染前后细胞的形态学变化,荧光显微镜观察转染后细胞EGFP的表达,流式细胞仪检测转染效率;取第5代未转染及转染后24 h的hBMSCs,常规培养,绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测转染前后细胞亚型;对转染前后的hBMSCs进行成脂和成骨诱导分化培养,油红O和茜素红染色观察诱导分化结果。结果分离培养的hBMSCs形态均一,转染前后细胞形态无明显差异;转染24 h后荧光镜下观察到有绿色荧光出现,转染效率为(48.65±11.23)%,转染前后的细胞生长曲线无显著差异;流式细胞仪检测CD44及CD105阳性率均在99%以上,不表达CD45,符合BMSCs特征,转染后hBMSCs表型未见明显变化;转染前后分别定向诱导均可形成成脂细胞及成骨细胞。结论电穿孔法可使EGFP获得较高的转染效率,转染后的hBMSCs生物学特性未发生改变。