教学课程资源库 更多>>

ISBN: (纸本)9787030333995

关键词： 骨髓增殖性肿瘤   骨髓间充质干细胞   造血干细胞移植   JAK2V617F突变   JAK2基因12号外显子突变   嵌合状态  

摘要： 间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）是造血微环境的重要组成部分，具有自我增殖能力以及多向分化潜能。目前有研究发现MSC与肿瘤微环境间存在着复杂的联系，证实MSC参与了多种血液系统疾病的发生、发展过程，但目前对骨髓增殖性肿瘤（MPN）的研究不多。此外，临床上已利用MSC支持造血和免疫调节的特性，促进造血干细胞移植（HSCT）后的造血重建以及防治移植物抗宿主病（GVHD），可是目前对于异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后骨髓MSC的来源尚无定论。 第一部分 目的：研究MPN患者骨髓MSC的生物学特性，检测其MSC是否存在JAK2基因突变。方法：1.体外分离培养健康志愿者和初诊MPN患者的MSC。2.细胞形态学观察，流式细胞术鉴定MSC表面标记。3.检测MSC成脂、成骨、成软骨分化能力。4.对患者MSC进行核型分析。***-PCR检测MSC造血以及免疫相关分子的表达。6.检测MPN患者MSC以及外周血或骨髓单个核细胞是否存在JAK2V617F突变、JAK2基因12号外显子（JAK2exon12）突变。结果：1. MPN患者的MSC细胞形态、表面标志、分化能力、染色体核型、造血及免疫相关分子表达与正常对照相比无明显差异。2.检测到21例真性红细胞增多症（PV）、17例原发性血小板增多症（ET）及1例原发性骨髓纤维化（PMF）的外周血/骨髓标本存在JAK2V617F突变，但未发现其MSC存在该突变。3.检测到2例PV和1例ET的外周血/骨髓标本存在JAK2exon12突变，但未发现其MSC存在该突变。结论：MPN患者MSC与健康供者MSC的生物学特性无明显差异;在外周血或骨髓单个核细胞JAK2基因突变阳性及阴性的MPN患者中，均未检测到MSC存在该突变。 第二部分 目的：研究allo-HSCT术后患者MSC嵌合状态。方法：1.体外分离21例allo-HSCT术后患者骨髓MSC。2.细胞形态学观察，流式细胞术检测细胞表面标志。3.诱导MSC成脂、成骨、成软骨方向分化。4。荧光标记的多重PCR扩增短串联重复序列（STR-PCR）结合毛细管电泳检测MSC供者嵌合状态。结果：移植术后患者MSC与健康志愿者相比，具有相似的细胞形态、免疫表型以及分化潜能。STR-PCR示allo-HSCT后患者骨髓/外周血供体细胞嵌合率为（96.85±1.5）%，但MSC供体细胞嵌合率为（5.24±2.5）%。一例双份脐血移植（DCBT）患者骨髓的优势脐血嵌合度为96.4%，外周血标本优势脐血嵌合度95.7%，患者骨髓MSC的优势脐血嵌合度为5.4%。结论：异基因造血干细胞移植术后，MSC大部分来源于患者本身。双份脐血移植术后患者造血重建仅来自于其中一份脐血，MSC大部分来源患者本身，部分嵌合的供者MSC来源于植入的单份脐血。

关键词： 细胞生物学   学报   连续出版物   中华人民共和国   颁奖活动  

摘要： 2012年8月11日,在第四届细胞结构与功能的信号基础研讨会(长春)上举行了第二届《"中国细胞生物学学报》—Cell Signaling Technology细胞生物学科学研究优秀人才奖"暨第一届《"中国细胞生物学学报》—Cell Signaling Technology细胞生物学科研新秀奖"颁奖仪式。与会代表参加了本次

关键词： 神经母细胞瘤   Sox2   BE(2)-C细胞系   生物学特性   基因芯片  

摘要： 研究背景与目的 神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是小儿最常见的颅外恶性实体肿瘤,占小儿所有恶性肿瘤的10%,恶性程度高,多数患儿预后不良。尽管近年来手术结合化疗的综合疗法在治疗NB方面取得了很大的进步,但是其发病率和死亡率仍然较高。因此,深入研究NB的发生、发展机理至关重要。神经母细胞瘤是一种胚胎性肿瘤,胚胎期神经嵴细胞发育分化受阻是神经母细胞瘤发生的主要原因,亦是衡量神经母细胞瘤恶性程度及影响预后的主要危险因素。Sox2是一种胚胎干细胞转录调控基因,是调控胚胎发育的关键因子,在早期胚胎发育过程中对维持胚胎干细胞多潜能性和自我更新的能力具有关键性的调控作用。故我们试图探索Sox2基因在神经母细胞瘤中的表达及其对神经母细胞瘤干细胞生物学特性的影响,探讨其在神经母细胞瘤发生发展过程中所起的作用。材料与方法 ***2在神经母细胞瘤中的表达：采用RT-PCR、Real-time PCR、Western blot及免疫组织化学等方法检测Sox2在神经母细胞瘤组织和瘤旁组织中的表达情况,并结合临床资料,分析其表达与临床病理参数的关系。 ***2对神经母细胞瘤干细胞生物学特性的影响：采用RT-PCR检测Sox2在神经母细胞瘤BE(2)-C细胞中的表达情况。利用慢病毒载体感染BE(2)-C细胞构建Sox2高表达[BE(2)-C-Sox2]和低表达[BE(2)-C-shRNA]细胞,然后采用CCK-8活细胞数检测和流式细胞仪细胞周期分析,探讨Sox2对BE(2)-C细胞增殖能力的影响。维甲酸(RA)和5-溴2’-去氧尿甙(BrdU)干预细胞诱导分化后采用Western blot检测细胞标志蛋白的表达差异,分析Sox2对BE(2)-C细胞分化能力的影响。平板克隆和软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成数目和克隆形成率,分析Sox2对BE(2)-C细胞克隆形成能力的影响。裸鼠成瘤实验分析Sox2对BE(2)-C细胞体内成瘤能力的影响。 3.基因芯片检测Sox2下调时神经母细胞瘤干细胞基因表达谱变化：应用基因表达谱芯片检测BE(2)-C细胞和BE(2)-C-shRNA细胞基因表达谱情况,筛选差异基因,并采用Real-time PCR检测验证相关差异表达的基因。 结果 ***2在神经母细胞瘤中的表达：RT-PCR结果显示在神经母细胞瘤组织中可检测到Sox2基因mRNA水平表达。免疫组织化学染色结果显示Sox2主要在肿瘤细胞核中表达,而瘤旁组织中表达呈阴性。Real-time PCR及Western blot结果均显示神经母细胞瘤组织中Sox2的表达水平明显高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。经统计分析发现Sox2在高分期肿瘤中的表达水平高于低分期肿瘤(P<0.05),且未经化疗的肿瘤其Sox2的表达水平高于经化疗的肿瘤(P<0.05)。Sox2在神经母细胞瘤中的表达水平与性别、年龄、肿瘤部位、大小、病理分型等参数无相关性(均P>0.05)。 ***2对神经母细胞瘤干细胞生物学特性的影响：RT-PCR结果显示在神经母细胞瘤BE(2)-C细胞系中可检测到Sox2基因mRNA水平表达。利用慢病毒载体感染BE(2)-C细胞成功构建Sox2高表达[BE(2)-C-Sox2]和低表达[BE(2)-C-shRNA]稳定细胞。CCK-8活细胞数检测显示72h时BE(2)-C-Sox2细胞的AV值(1.465±0.046)高于BE(2)-C细胞(1.01±0.018),差异有统计学意义(P<0.05);而BE(2)-C-shRNA细胞的AV值(0.912±0.020)低于BE(2)-C细胞(1.201±0.018),差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪细胞周期分析显示BE(2)-C-Sox2组S期细胞百分比(55.2±4.3%)高于BE(2)-C组细胞(38.6±3.5%),BE(2)-C-shRNA组S期细胞百分比(21.8±5.7%)低于BE(2)-C组细胞,三组组间比较差异有统计学意义(P<0.05),而三组细胞G0/G1期细胞百分比的比较情况呈现出相反的结果;BE(2)-C-Sox2、BE(2)-C及BE(2)-C-shRNA组的细胞增殖指数分别为65.2±5.6%、36.3±2.8%、51.7±4.6%,三组组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。RA或BrdU干预后Western blot检测细胞标志蛋白(Peripherin、NF-68、Vimentin、S-100)显示,经RA或BrdU干预的BE(2)-C-Sox2细胞其标志蛋白表达量低于经同种药物干预的BE(2)-C细胞和空载体细胞(P<0.05);而经RA或BrdU干预的BE(2)-C-shRNA细胞其标志蛋白表达量高于经同种药物干预的BE(2)-C

关键词： 传统教学模式   启发式教学   多媒体辅助教学  

摘要： 本文基于医科学生人才素质培养的要求,提出了以学生发展为中心,要着力提高学生的学习兴趣,激发学生的主动思维和创新能力。本文指出要综合运用多媒体辅助教学及适当的双语教学,对传统的教学模式要进行继承与发展,医学细胞生物学的教学在理论中要注意讲授一些最新的科学发展情况,在实验教学环节中就加强培养学生的实验技能。本文对医学细胞生物学教学改革的相关方法进行了有益的探讨,对教学模式中诸多教学元素的优缺点进行了相应的阐述,取长补短,进一步深化医学细胞生物学教学改革,这对提高医学细胞生物学的教学效果有一定的促进作用。

关键词： 软骨细胞   肝细胞生长因子   转染   生物学特性  

摘要： 耳廓在人体上仅仅占据很少数的总体表面积,但耳廓却是人体外部最复杂的三维立体结构之一。目前国内文献对先天性外中耳畸形发病率报道为1/7000,男女之比约2：1,双侧者占10%,且右侧畸形较多。目前小耳、耳畸形的重建及创伤后耳的重建仍然是耳鼻喉科医生面临的最大挑战。多年来耳廓软骨的最佳取代物为左冠状动脉前区域的肋软骨,1971年Tanzer提出运用肋软骨作为耳廓支架并分四个阶段进行耳廓重建手术,随着术式越来越标准化,现被大多数国家用于耳廓重建手术[2-7]。然而自体软骨移植后易吸收,同时手术也有着许多不可避免的问题,如手术瘢痕、创伤疼痛及气胸等情况。金属和有机材料支架经历从最初的铁铜合金到乳胶和塑料等,以及后来使用的硅胶,均因为无法满足对身体无不良反应、可塑性及生物相容性原则而未得到广泛的应用。随着组织工程技术的不断发展,通过生物组织工程软骨再塑耳廓成为耳廓重建的目标。这其中由于自身软骨组织取材少难以达到所需细胞数量,且体外培养的软骨细胞由于软骨细胞自身的性质易发生“去分化”不能达到组织工程软骨的需要,从而限制了软骨组织工程耳廓重建的发展。本研究将肝细胞生长因子(HGF)利用腺病毒表达载体转染于体外培养的新西兰大白兔耳廓软骨细胞,观察携带HGF基因的耳廓软骨细胞的生物学特性,为后期利用此类细胞应用于构建耳廓软骨组织工程的研究打下基础。 第一章兔耳廓软骨细胞的分离及培养 本部分的研究目的主要是探讨兔耳廓软骨细胞分离培养的方法和生物学特性。主要通过机械法及酶消化法从2周龄新西兰大白兔的耳廓软骨中分离获得软骨细胞并进行原代和传代培养。在倒置显微镜下观察细胞形态及其生长情况,并绘制生长曲线,使用甲苯胺蓝异染染色、免疫组化染色等了解其生物学特性。结果显示：兔耳廓软骨细胞体外原代培养形成单层细胞的时间为1周左右,传代培养时间约3至5天。原代细胞以类圆形或多角形形态为主,随着传代的进行,细胞形态向纤维样细胞改变并失去其表型特征。甲苯胺蓝染色证实细胞可合成蛋白多糖,异染反应主要集中在细胞集落样生长区,异染程度以前三代培养明显,随后逐渐减弱。机械法和酶消化法相结合分离获得的细胞活性率达85%以上,Ⅱ型胶原免疫组化染色可见细胞中Ⅱ型胶原含量随着体外培养传代而减少,到5代以后Ⅱ型胶原含量几乎完全丧失。研究结论：采用机械法与酶消化法结合体外培养兔耳廓软骨细胞可获得活性较高的软骨细胞,随着体外传代培养,耳廓软骨的Ⅱ型胶原含量逐渐减少,细胞形态改变,软骨组织的生物学特性丧失。 第二章Ad-HGF对兔耳廓软骨细胞的转染表达及增殖效应 本部分的研究目的主要是通过观察腺病毒携带的肝细胞生长因子(Ad-HGF)对兔耳廓软骨细胞的转染表达及增殖效应。实验以不同感染强度(50,100,200)的腺病毒携带的荧光蛋白(Ad-GFP)转染体外培养的新西兰大白兔耳廓软骨细胞,感染后72h用流式细胞仪检测转染效率。并以最佳感染强度的Ad-HGF转染兔耳廓软骨细胞,ELISA方法检测转染48h,72h后细胞上清中HGF的表达水平。MTT法绘制生长曲线,使用Ⅱ型胶原的免疫组化染色了解转染肝细胞生长因子基因的耳廓软骨细胞的生物学特性。实验结果示：Ad-GFP感染强度(MOI)为100时,转染效率达50%。以MOI=100的Ad-HGF转染细胞48h,72h上清中HGF的表达分别为(513±20.77)pg/ml和(312.7±23.37) pg/ml。Ad-HGF转染的三代细胞生长曲线较耳廓软骨三代细胞的曲线前移、抬高。Ⅱ型胶原的免疫组化阳性细胞比值在三代细胞,Ad-HGF转染的三代细胞中分别为(0.652±0.0278),(0.682±0.039),p>0.05,无差异性;在兔耳廓软骨五代细胞,Ad-HGF转染的五代细胞中分别为(0.23±0.0469),(0.35±0.0367),p<0.05。实验结果示：Ad-HGF可有效转染兔耳廓软骨细胞且持续表达HGF, HGF对体外培养的兔耳廓软骨细胞有促增殖、维持其生物学特性的作用。

关键词： podoplanin   CLEC-2   蜕膜基质细胞   增殖   侵袭   早孕期  

摘要： 目的：探讨跨膜糖蛋白podoplanin在人早孕期母胎界面的表达及其对蜕膜基质细胞增殖及侵袭等生物学功能的影响。 方法：收集正常早孕期蜕膜及绒毛组织，应用本实验室建立的胰酶消化、密度梯度离心法分离和培养蜕膜基质细胞（decidual stromal cells，DSCs）和滋养细胞（trophoblasts，Tros）。采用免疫组织化学、免疫细胞化学以及流式细胞术分别检测podoplanin和及其受体C型凝集素样受体-2（C-type lectin-like receptor-2，CLEC-2）的表达水平和特点;并以siRNA干扰技术沉默蜕膜基质细胞podoplanin的表达，然后采用MTT比色法检测其活力、BrdU细胞增殖ELISA法检测其增殖能力、以流式细胞术分析其凋亡情况以及Transwell法分析podoplanin沉默后细胞侵袭能力的改变。 结果：正常早孕蜕膜基质细胞和滋养细胞均表达podoplanin和CLEC-2，podoplanin在DSCs的表达水平显著高于Tros者，而CLEC-2在Tros和DSCs中表达水平均较低;采用siRNA干扰podoplanin在DSCs的表达后，在显著降低细胞活力并抑制细胞增殖和侵袭能力的同时，促进了该细胞的凋亡。 结论：人早孕期母-胎界面均表达podoplanin及其受体CLEC-2，且podoplanin在蜕膜基质细胞的表达水平较高，提示podoplanin可能通过与内源性受体CLEC-2的相互作用参与调节DSCs的生物学功能并维持正常妊娠。Podoplanin可能在促进蜕膜基质细胞的增殖和侵袭、抑制其凋亡的信号通道中发挥着中介作用，这种作用有利于维持细胞自身的正常生物学功能和调节滋养细胞侵袭过程，从而最终有利于胎盘的形成和正常妊娠的维持。

关键词： 网络课程   医学细胞生物学   双语教学   天空教室  

摘要： 为达到构建特色医学细胞生物学双语网络课程的目的,作者将"天空教室软件平台"和"Deepthroat网站生成系统"两种工具相结合构建网络课程,制作了集丰富文字、插图、视频音频等为一体的医学细胞生物学双语网络课程,并由此认为:在天空教室网络教学平台上实施双语教学活动,是保证医学细胞生物学双语教学质量的有效手段,对于提高学生专业外语水平和信息获取能力具有重要意义。

关键词： 间充质干细胞   胎盘组织   生物学特性   细胞移植   局灶性脑缺血   动物实验  

摘要： 间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)是一种具有自我更新和多向分化能力的干细胞，有着潜在的临床应用价值。以往研究主要集中在人骨髓来源的间充质干细胞，但由于人骨髓来源的间充质干细胞的获得需要通过骨髓穿刺，而且其数量随年龄的增长而急剧下降，限制了人骨髓源间充质干细胞的应用。近年来有实验表明，MSCs还可从脐血、胎盘、羊水、脐静脉内皮下层、外周血及肌肉等组织中分离得到。其中，胎盘组织最受关注，它除了在胎儿发育、营养支持和维持耐受中发挥重要作用外，含有丰富的成体干细胞，成为寻找人类成体干/祖细胞的新组织来源。胎盘来源MSCs的表型、分化潜能与骨髓MSCs相似，且胎盘作为孕妇分娩后的废弃物，易于获得且对其研究和应用无伦理道德的争论，目前已成为间充质干细胞来源的新的研究热点。<br>　　 胎盘羊膜中胚层(Amniotic Mesoderm)和绒毛膜中胚层（Chorionic Mesoderm）分别是体外分离获得羊膜间充质干细胞(Amniotic Mesenchymal stem cells，AMSCs)和绒毛膜间充质干细胞(Chorionic Mesenchymal stem cells，CMSCs)的组织来源，两者均由胚胎发育过程中的胚外中胚层(Extroembryonic Mesoderm)发育而来，但是随着胚外中胚层被分割并与不同的胚胎组织发生相互作用，分布于不同位置的胚外中胚层组织发生了不同的变化，这些变化是否会导致体外分离培养获得的MSC具有不同的生物学特性，进一步深入研究不同来源MSCs生物学特性，将为不同疾病模型的修复提供更有针对性的种子细胞。<br>　　 本研究旨在建立了有效的AMSCs和CMSCs体外扩增体系，比较两群MSCs的生物学特性，并在此基础上，将AMSCs通过立体定向技术注入大鼠局灶性脑缺血MCAO模型（大脑中动脉闭塞脑出血模型，middle cerebral artery occlusion model，MCAO模型）脑内，观察植入细胞的存活、迁移、分化及大鼠神经功能恢复，初步探讨AMSCs移植治疗局灶性脑缺血的作用和可能机制。<br>　　 第一部分AMSCs和CMSCs组织分布及体外扩增体系的建立。<br>　　 目的:分析AMSCs、CMSCs在人胎盘组织中的分布特性、并建立相应的体外扩增体系。<br>　　 方法:取健康产妇正常剖宫产之足月胎儿的新鲜胎盘组织，钝性分离羊膜层与绒毛膜层，采用不同方法对羊膜、绒毛膜组织进行消化及体外培养，倒置显微镜观察体外培养AMSCs、CMSCs的细胞形态;流式细胞仪分别检测其表面标志;采用多种诱导条件分别将两群MSC细胞向脂肪细胞、软骨细胞及骨细胞方向诱导，并用特异性染色法对诱导后细胞进行鉴定。比较多种因子不同浓度下对CMSCs体外扩增效果，选取75ng/mlFL进一步比较其对两群MSC细胞的扩增效果，流式细胞仪检测优化培养条件下培养的两群MSC的细胞表型;细胞计数分析FL对两群MSCs的促增殖作用;RT-PCR分析两群MSC中FL受体flt3基因表达;分别将FL作用下的两群MSC细胞向脂肪细胞、软骨细胞及骨细胞方向诱导，RT-PCR分析脂肪细胞、软骨细胞和骨细胞特异性基因在诱导后两群MSC细胞中的表达情况。<br>　　 结果:(1)免疫荧光染色显示:羊膜组织中CD90和CD166阳性细胞主要分布于羊膜上皮和羊膜间质中，而绒毛膜组织中CD90和CD166阳性细胞主要分布血管内皮下、血管附近间质内;免疫组织切片染色结果显示:羊膜上皮、绒毛膜板间质内以及绒毛中轴血管周围间质内可见CD105阳性染色的细胞;(2)倒置显微镜观察AMSCs、CMSCs均呈典型的成纤维细胞样贴壁生长，流式细胞仪分析显示，两群MSC均高表达CD73、CD90和CD105，不表达CD14、CD34、CD45和HLA-DR;(3)体外扩增培养的AMSCs、CMSCs成骨诱导后，细胞均由长梭形向立方形转变，Von Kossa染色可见细胞呈集落生长并出现钙结节;成软骨诱导2周后，AMSCs、CMSCs形态逐渐变得扁平，anti-collagen typeⅡ免疫组织化学染色可见阳性细胞表达Ⅱ型胶原;成脂肪诱导2周，培养的两群MSC细胞内均有明显的脂滴出现，油红O染色阳性;(4)细胞计数结果表明，含FL的培养基能有效地促进两群细胞的体外增殖，且FL对CMSCs的促增殖作用更强;(5)流式细胞仪分析显示，含FL的培养基培养的两群MSC仍高表达CD73、CD90、CD105，不表达CD14、CD34、CD45和HLA-DR;(6) RT-PCR结果显示，AMSCs、CMSCs均表达flt3的mRNA;添加

关键词： HEPATITIS-C-VIRUS   SEMLIKI-FOREST-VIRUS   HUMAN RHINOVIRUS TYPE-2   EBOLA-VIRUS   DC-SIGN   FUNCTIONAL RECEPTOR   INFLUENZA-VIRUS   COXSACKIEVIRUS ENTRY   ACTIN POLYMERIZATION   MEMBRANE PENETRATION  

摘要： The cell imposes multiple barriers to virus entry. However, viruses exploit fundamental cellular processes to gain entry to cells and deliver their genetic cargo. Virus entry pathways are largely defined by the interactions between virus particles and their receptors at the cell surface. These interactions determine the mechanisms of virus attachment, uptake, intracellular trafficking, and, ultimately, penetration to the cytosol. Elucidating the complex interplay between viruses and their receptors is necessary for a full understanding of how these remarkable agents invade their cellular hosts.