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关键词： 大鼠   脂肪源间充质干细胞   超小超顺磁氧化铁(USPIO)   多聚赖氨酸(PLL)   细胞培养  

摘要： 研究背景 帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的神经退行性疾病,特征性的病理改变是多巴胺神经元凋亡和黑质纹状体通路损害,主要临床表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势平衡障碍。随着人口老龄化的加速,其发病率呈逐年上升的趋势,是威胁老年人健康的一类重大疾病,65岁以上人群发病率超过1%,给家庭和社会都造成了沉重的负担。美国目前约有50万PD患者,且每年以5万例的速度递增,而我国现已逐步进入老龄化社会,PD患者已达到200万人,每年新增帕金森病患者近20万人。若不及时进行有效的治疗,患者病情呈慢性进行性加重,晚期往往全身僵硬、活动受限,约30%中晚期患者生活不能自理,最后常死于各种并发症。目前无论是药物治疗还是手术治疗只能暂时改善症状而不能阻止病情进行性发展。随着再生与组织工程医学的兴起,利用干细胞移植替代凋亡的多巴胺能神经元成为治疗PD一种新策略。 干细胞移植作为治疗中枢系统疾病的新治疗策略而被广泛研究。脂肪源间充质干细胞(adipose-derived stromal cells,ADSCs)是一种极具潜力的种子细胞,自Zuk于2001年发现以来,其生物学特性及分化潜能等方面与骨髓源间充质干细胞非常相似,并且由于ADSCs具有来源丰富、易获取、创伤小、增殖快等优势,使其成为一种更为理想的种子细胞。如何对移植的干细胞标记及活体示踪是近年的研究热点和难点,近年来,得益于分子影像学的快速发展为此提供了可能。磁共振成像(MRI)是目前临床普遍应用成熟的影像学技术,但是常规MR成像的空间、时间分辨率无法显示移植细胞,研究表明,借助新型磁共振造影增强剂可以反复无创地追踪移植的干细胞。其中超小超顺磁氧化铁(ultrasmallsuperparamagnetic particles of iron oxide,USPIO)标记是一种较为理想的MR示踪方法。目前已有不少学者相继报道利用超顺磁氧化铁颗粒(super-paramagnetic iron oxide,SPIO)可成功标记细胞并对其进行示踪,但关于ADSCs的标记及USPIO示踪还鲜有报道,如何提高标记效率同时又减少标记物对细胞的毒性是移植治疗过程中的前提。本课题旨在探讨USPIO对ADSCs的标记的适宜浓度及示踪。 本研究拟采用超小超顺磁氧化铁(USPIO)对大鼠脂肪源间充质干细胞(ADSCs)(?)进行标记,对比分析不同浓度的超小超顺磁氧化铁(USPIO)对ADSCs标记的效率,并分别用CCK-8及Alamar blue方法对已标记细胞的活力进行检测,探寻USPIO对ADSCs适宜的标记浓度。为观测已标记ADSCs在PD模型大鼠体内的存活、迁移提供了相关的实验基础。 目的：建立大鼠脂肪源间充质干细胞的分离和培养方法,并对其形态学、细胞表面标志物进行检测,为USPIO标记ADSCs提供细胞来源。 方法： 1.大鼠脂肪源间充质干细胞的原代培养、纯化、传代 大鼠脂肪源间充质干细胞的原代培养：SD大鼠,体重120+20g,采用36g/L水合氯醛,按1ml/100g体重的剂量进行腹腔注射麻醉,麻醉满意后将大鼠摆俯卧位,固定四肢于平板上,剃除背部及腹部的鼠毛。置于超净工作台上,依次用碘酊、酒精消毒,将解剖器械盒、三个玻璃培养皿(加入冷PBS液)等依次排放在超净台上。严格无菌条件下操作,逐层分离组织,尽量减少出血及红细胞污染,取出肾周脂肪组织,选取含血管较少的部分置于培养皿中,包裹好迅速转移至细胞房。用无菌的0.01mmol/L磷酸缓冲液(PBS)反复冲洗脂肪组织,尽量剔除软组织和血管,然后置于青霉素瓶中用眼科剪剪碎;再用吸管将细碎的脂肪组织转移至一次性离心管(15m1),加入0.075%的Ⅰ型胶原酶37℃振荡消化30min～40min;含10%FBS的DMEM/F12等体积中和,100gm nylonmesh过滤后离心(1200g×10min),弃上清,以含10%FBS的DMEM/F12重悬细胞,轻柔吹打制成单细胞悬液,混匀,细胞计数仪下计数后以1×106/ml密度接种于25cm2塑料培养瓶;置于37℃、5%CO2饱和温度培养箱中培养。48h后全量换液,去除悬浮细胞。以后每2-3天半量换液一次,待细胞生长至70%-80%融合后传代培养。 2.脂肪源间充质干细胞表面标志物的流式细胞仪检测 取第3代ADSCs,将培养好的脂肪源间充质干细胞吹打分离下来,收集于50m1离心管中,并以吸管轻轻吹打、将脂肪源间充质干细胞吹散,250xg4℃离心5分钟,弃上清;用0.01mol/L的PBS10m1重悬细胞,清洗1-2次;用适量0.01mol/L PBS调整细胞浓度1×106个/ml,分装于EP管中,共5管,每管1ml,分别做好标记。分别加入抗鼠CD29-PE、抗鼠CD90-F

关键词： 白血病   WT1基因   生物学特征   单克隆细胞   信号途径  

摘要： 研究目的：在不表达WT1基因的U937细胞中转导WT1基因，观察U937细胞增殖、凋亡、周期、对药物的反应性及细胞迁移能力等生物学特性的改变，进一步探究WT1基因在白血病中的作用及相关机制。<br>　　 研究方法：采用PCR方法从质粒载体pCMV-CB6-WT1-B(+17aa/-KTS)、pCMV-CB6-WT1-D（+17aa/+KTS）扩增目的片段WT1-B(+17aa/-KTS)和WT1-D(+17aa/+KTS)，连接到pCDHI-MCS1-EF1-copGFP慢病毒载体上，采用磷酸钙共沉淀法转染293T细胞，包装病毒，感染U937细胞，流式分选GFP阳性细胞，筛选出稳定表达WT1基因的单克隆细胞，RT-PCR及western blot方法鉴定WT1基因及蛋白的表达，随后检测转导WT1基因后U937细胞生物学特性的改变。采用MTT方法检测细胞的增殖活性和姜黄素对单克隆细胞的抑制率。采用流式细胞技术检测单克隆细胞加入姜黄素后细胞周期和凋亡的改变。采用甲基纤维素半固体培养基观察各单克隆细胞集落形成能力的差别。应用Transwell迁移实验观察各单克隆细胞迁移能力的差别。同时采用基因表达谱芯片检测分析WT1表达引起功能相关的基因改变和涉及的信号通路，并用定量RT-PCR验证基因表达的可信性。<br>　　 结果：WT1(-KTS)和WT1(+KTS)没有明显改变U937细胞的增殖活性(p＞0.05)，但降低了对姜黄素的敏感性、能对抗姜黄素引起的U937细胞凋亡（p均＜0.05）。WT1(-KTS)还提高了U937细胞的集落形成能力(p＜0.01)和迁移能力(p＜0.01)，而WT1(+KTS)则未明显改变U937细胞的集落形成能力和迁移能力（p均＞0.05）。虽然WT1(-KTS)和WT1(+KTS)没有明显改变细胞周期，但加姜黄素处理后，空载体与转导WT1细胞的周期改变有显著性差异(p＜0.05)。基因芯片分析结果显示，WT1(-KTS)引起的显著性差异基因涉及细胞增殖、凋亡、粘附迁移、细胞周期调节等功能，差异基因参与的信号转导通路主要有JAK-STAT途径、趋化因子信号途径、MAPK信号途径、mTOR信号途径、ErbB信号途径等。而WT1(+KTS)引起的显著性差异基因则明显少于WT1(-KTS)，主要涉及细胞生长、凋亡、代谢过程等。<br>　　 结论：不同的WT1异构体在白血病发生中的作用不全相同。WT1(-KTS)抑制U937细胞凋亡，降低U937细胞对化疗药物的敏感性，促进细胞迁移及集落形成，可能与激活JAK-STAT途径、趋化因子信号途径、MAPK信号途径、mTOR信号途径等有关。WT1(+KTS)对靶基因的转录调节活性可能弱于WT1（-KTS），仅表现出抗凋亡和降低对药物敏感性的作用。

关键词： 教学参考资料   医学院校   细胞生物学  

ISBN: (纸本)9787548208280

摘要： 医学细胞生物学是结合医学科学的特点，探讨细胞生命现象的科学。是一本很好的辅导学习材料。

关键词： 多形性腺瘤   肿瘤相关成纤维细胞  

摘要： 目的：涎腺多形性腺瘤（Pleomorphic adenoma, PA）是口腔颌面部常见良性肿瘤。占涎腺上皮性肿瘤的51%，占良性肿瘤的88%。女性略多于男性。可发生于任何年龄，以30-60岁最多见。好发于腮腺和颌下腺，其中80%-90%发生于腮腺，约3%-4%可发生癌变并发生转移，甚至导致死亡。该瘤虽为良性，但包膜常被瘤细胞侵袭或包膜结构不完整，是介于良恶性之间的肿瘤，因此依其生物学特性分类，也可将其归类为临界瘤。该瘤膨胀性生长影响容貌，且手术后易复发，5年后的复发率为3.4%，多次复发有恶变可能，复发次数越多，其恶变的可能性将越高。本研究目的为检测PA组织中是否存在肿瘤相关成纤维细胞（Tumorassociated fibroblasts, TAFs），进而研究PA来源TAFs的生物学特性，并与涎腺腺样囊性癌（Adenoid cystic carcinoma, ACC）来源的TAFs相比较。 材料和方法：病例组选择大连医科大学附属第一医院口腔科住院接受手术治疗的PA患者66例，其中男性26例，女性40例，均经组织病理学确诊。对照组为同时期同一地区无血缘关系个体的正常涎腺，共18例。对实验组和对照组进行组织固定、包埋、切片等处理后，采用免疫组织化学染色检测波形蛋白（Vimentin，VIM），平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin, α-SMA)，基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinases-2, MMP-2)在66例PA及18例对照组中的表达。使用Image pro-plus6.0(IPP6.0)、SPSS16.0软件进行蛋白定量及统计学分析，以p＜0.05为有统计学差异。用于细胞实验的PA、ACC组织取自大连医科大学附属第一医院口腔科，均经组织病理学确诊。在无菌条件下进行原代细胞提取，置于CO2细胞培养箱中培养，免疫荧光染色进行细胞鉴定，待细胞铺满瓶底面积的70-80%时，取细胞进行迁移试验，在倒置荧光显微镜下观察并拍照，以计算细胞迁移面积的大小判断其迁移速度。 结果：VIM在实验组和对照组中表达无统计学差异（p＞0.05），α-SMA在PA间质中表达高于对照组（p＜0.001），MMP-2在PA间质中表达高于对照组（p＜0.001）。TAFs迁移实验证明PA来源的TAFs较ACC来源的TAFs迁移速度慢，并且MMP-2在ACC间质中表达高于PA组（p＜0.05）。 结论：1. TAFs存在于PA组织中。2. PA来源的TAFs比ACC来源的TAFs迁移能力弱。3. MMP-2在正常涎腺、PA及ACC间质中的表达量呈递增关系。

关键词： 细胞生物学   实验教学   教学改革  

摘要： 对《细胞生物学》实验教学存在的问题进行剖析,探讨教学改革的措施,提出精选实验内容,优化教学方法和教学手段,建立网络教学平台和完善考核体系,为深化教学改革,培养合格医药人才提供参考。

关键词： 人脐带间充质干细胞   干扰素γ   生物学特性   免疫调节  

摘要： 背景：间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC)是存在于多种组织中的一种具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞。因其具有易于分离扩增、多向分化、造血支持、低免疫原性和免疫调节等特性,而成为组织工程和再生医学中理想的种子细胞。其中人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord matrix stem cell, hUC-MSC)具有以下不可比拟的优势：第一,利用胎儿分娩后的废弃物,组织来源广泛,无伦理学限制;第二,相比骨髓间充质干细胞具有更强的增殖能力,易于长期培养,经体外扩增可获得丰富的细胞;第三,具有成体干细胞和胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)的双重表面标记;第四,连续多次传代后仍然维持干细胞特性。因此,人脐带间充质干细胞作为细胞治疗中一种非常有希望的干细胞替代来源,具有无限的潜力和广泛的临床应用前景,而其免疫学特性正是细胞治疗成功与否的决定性因素。人脐带间充质干细胞可以抑制T淋巴细胞、B淋巴细胞和树突状细胞的增殖及因子分泌,并且在临床上可以减轻移植后移植物抗宿主病(graft versus host disease, GVHD)的发生程度[2-4]。关于人脐带间充质干细胞的免疫调节机制目前还不明了。但研究显示,间充质干细胞本身并不具有或具有很低的免疫抑制能力,在受到激活的淋巴细胞或其分泌的炎性因子刺激后间充质干细胞才具有较强的免疫调节能力。干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)炎性因子中重要的一员。它是活化T淋巴细胞和NK细胞分泌的一种主要促炎因子。另外,IFN-γ在临床上被用来抗病毒,抗肿瘤,调节免疫反应等。因此,深入了解IFN-γ对人脐带间充质干细胞的影响,显得尤为重要。本研究旨在探讨IFN-γ刺激后人脐带间充质干细胞的生物学特性的变化及免疫调节能力的变化,为脐带间充质干细胞应用于治疗免疫相关疾病及IFN-γ联合脐带间充质干细胞应用于临床治疗提供理论和实验依据。 目的：本文旨在探讨IFN-γ对人脐带间充质干细胞的生物学功能的影响,为人脐带间充质干细胞的临床应用提供必要的理论基础。 方法：(1)应用流式细胞技术检测IFN-γ刺激前后人脐带间充质干细胞的免疫表型以及胚胎干细胞的全能标志物。(2)在诱导体系中,定向诱导人脐带间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞分化,用油红○染色、Von Kossa染色观测脂滴形成、钙盐沉积情况以鉴定人脐带间充质干细胞的多向分化潜能。(3)应用CCK-8试剂盒检测干扰素丫刺激前后人脐带间充质干细胞的增殖潜能。(4)体外建立人脐带间充质干细胞和人外周血单个核细胞的共培养体系。利用ELISA方法(Brdu掺入试验)检测人外周血单个核细胞的增殖情况,从而反映人脐带间充质干细胞对活化后的人外周血单个核细胞的免疫抑制作用。(5)利用酶联免疫吸附试验试剂盒检测干扰素γ刺激前后人脐带间充质干细胞的PGE-2的分泌量。(6)应用实时定量PCR方法检测干扰素γ刺激前后人脐带间充质干细胞中COX-2、IDO-1以及IDO-2的表达。 结果：(1)人脐带间充质干细胞表面表达一般干细胞的标志。与对照组相比,干扰素γ刺激组人脐带间充质干细胞表面SSEA-4表达下降(IFN-γ刺激组：8.15±2.94%,control组：16.42±8.5%;p<0.05),CD54表达升高(IFN-γ刺激组：96.64±3.29%,control组：84.12±10.73%;p=0.051)。(2)在特定的诱导条件下,人脐带间充质干细胞具有向脂肪细胞和骨细胞分化的能力。与control组相比,IFN-γ刺激组人脐带间充质干细胞成脂诱导后脂滴形成减少,成骨诱导后两组镜下观钙沉积未见有明显差异。(3)IFN-γ刺激组和control组人脐带间充质干细胞增殖能力无明显差异。(4)人脐带间充质干细胞与人外周血单个核细胞共培养时,具有抑制单个核细胞增殖的能力,且与control组相比,IFN-γ刺激后的人脐带间充质干细胞具有更强的抑制外周血单个核细胞增殖的能力(p<0.05)。当IFN-γ浓度为10ng/ml时即对人脐带间充质干细胞有明显的免疫激活作用,且IFN-γ22的免疫激活作用具有浓度依赖性。(5) IFN-γ10ng/ml刺激48小时后,人脐带间充质干细胞分泌PGE-2增多(p<0.01)。(6) IFN-γ10ng/ml刺激24小时后,IFN-γ刺激组与control组相比,人脐带间充质干细胞COX-2表达水平无明显的统计学差异,但具有表达升高的趋势,IDO-1表达水平明显升高(p<0.01),IDO-2的表达水平无差异。 结论：IFN-γ刺激影响人脐带间充质干细胞表面SSEA-4和CD54的表达,并通过上调IDO-1的表达水平来增强人脐带间充质干细胞

关键词： 乳腺肿瘤   细胞生物学   RNA干扰   半胱氨酰白三烯   半胱氨酰白三烯受体  

摘要： 目的:白三烯(cysteinyl leukotrienes)是花生四烯酸(arachidonic acid)经5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)途径代谢的一系列产物,包括 leukotrieneB4(LTB4)和半胱氨酰白三烯即 leukotriene C4(LTC4)、leukotriene D4(LTD4)和 leukotriene E4(LTE4)。它们在炎症的发展中发挥着重要的作用。炎性介质半胱氨酰白三烯以及相应的受体半胱氨酰白三烯Ⅰ型受体(CysLT1R)和半胱氨酰白三烯Ⅱ型受体(CysLT2R)与哮喘等变态反应性疾病、脑外伤、脑肿瘤、结肠癌及乳腺癌等密切相关。本实验主要研究在乳腺癌细胞中,CysLT2R的表达与肿瘤的增殖,生存,迁移的相关性,其有望成为防治肿瘤转移的新靶点。方法:我们首先通过Western Blotting筛选出CysLT2R表达阳性的乳腺癌细胞系作为模型。首先通过MTT实验初步评价了 LTC4对于MCF-7细胞系存活的影响,我们利用流式细胞术,划痕试验及趋化试验测定了 LTC4对细胞周期及对乳腺癌细胞运动作用的影响。观察MCF-7细胞低表达半胱氨酰白三烯II型受体(CysLT2R)对半胱氨酰白三烯(LTC4)介导的细胞生长、迁移能力、细胞周期等生物学行为的影响。结果:我们首先通过Western Blotting筛选出CysLT2R表达阳性的乳腺癌细胞系MCF-7细胞系作为模型。首先通过MTT实验初步评价了 LTC4对于MCF-7细胞系存活的影响,结果显示LTC4在浓度为0.1nM、1nM、10nM、20nM、50nM、100nM 时对 MCF-7 细胞的抑制率分别为(6.5±0.03)%,(11 ±0.02)%,(16.6±0.04)%,(35.2±0.04)%,(37.8±0.04)%,(38.5±0.02)%。为了进一步研究LTC4对MCF-7细胞增殖抑制作用的机理,我们利用流式细胞术测定了LTC4对细胞周期的影响。本实验发现处于G0/G1期的细胞随LTC4浓度的提高而明显增加,即LTC4可以显著抑制MCF-7细胞于G0/G1期,使细胞无法越过限制点,因此降低了细胞的增殖。针对LTC4对乳腺癌细胞运动的作用,我们首先通过划痕试验及趋化试验发现,LTC4可以明显延长MCF-7细胞的划痕愈合时间,减少穿膜细胞个数,呈剂量依赖关系。观察MCF-7细胞低表达半胱氨酰白三烯II型受体(CysLT2R)对半胱氨酰白三烯(LTC4)介导的细胞生长、迁移能力、细胞周期等生物学行为的影响。针对CysLT2R的已知cDNA序列,设计并体外转录合成4条特异性shRNA,用脂质体介导转染入MCF-7细胞48h,同时设阴性对照组(1条非特异性序列转染)、正常MCF-7对照组(未转染)。Western Blotting检测干扰后CysLT2R蛋白表达水平下调的变化。干扰后,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测50nM LTC4作用下细胞株生长能力;应用流式细胞仪检测50nMLTC4作用下细胞周期变化;应用趋化小室检测50nM LTC4作用下MCF-7细胞侵袭运动活性。与正常MCF-7细胞和阴性对照组比较,MCF-7细胞CysLT2R低表达组的细胞生长增殖无明显变化(P>0.05),细胞周期无明显变化。干扰后,MCF-7细胞表现出侵袭活性明显增强(P<0.01)。结论:根据预实验选定的条件,我们进一步通过MTT、Western Blotting、流式细胞术、Transwell实验、划痕实验、转染等技术,得出以下结论:LTC4可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移能力,并诱导MCF-7细胞停滞于G0/G1期,其最佳浓度为50nM。低表达CysLT2R对LTC4介导的乳腺癌MCF-7细胞的增殖的抑制作用无影响。低表达CysLT2R可以降低LTC4对乳腺癌MCF-7细胞的迁移及运动能力的抑制作用,低表达CysLT2R后乳腺癌MCF-7细胞的迁移及运动能力明显增强。

关键词： 细胞生物学教学   能力培养   生物技术   实验技能  

摘要： 为使学生适应现代科学技术的飞速发展,在生物技术专业的细胞生物学理论和实验课程教学中,应重视培养学生分析问题、解决问题的能力。

关键词： 脐带血   NK细胞   IL-2   IL-15   免疫表型   细胞毒性  

摘要： 目的本研究探讨脐带血表型为CD3-CD56+的NK细胞以及经IL-2、IL-15诱导扩增后免疫表型与细胞毒活性等生物学改变的特性。 方法使用Ficoll淋巴细胞分离液分离出脐带血单个核细胞，在无血清培养的条件下，分别加入IL-2、 IL-15、IL-2联合IL-15，在培养箱中培养14天，流式细胞仪检测CD3-CD56+NK细胞亚群含量以及NK细胞上CD16、CD62L、NKG2D、NKG2A、NCR44、NCR46、颗粒酶B、穿孔素的表达情况;并且使用WST-1法检测培养后的NK细胞对K562细胞毒活性。 结果经过14天的培养，扩增后的IL-2、IL-15、IL-2/IL-15三组NK细胞分别扩增了10.78±2.51、10.42±3.72、10.54±6.24倍,这三组之间无显著差异;扩增后的CD3-CD56+NK细胞表达CD16的比例有显著减低，IL-2和IL-15组之间差异显著;使用细胞因子扩增后的NK细胞中CD62L的表达未曾改变;使用IL-2扩增后，NKG2A、NCR46表达有所下调，而使用IL-15扩增后则发生相反的作用;IL-2和IL-15两种细胞因子均有上调NKG2D、穿孔素、NCR44表达的作用，且细胞因子之间也存在差异;IL-15有上调NK细胞颗粒酶B的表达作用;细胞因子扩增的NK细胞毒活性显著增高，但细胞因子之间无显著差异。 结论在无血清培养条件下，IL-2和IL-15都能使脐带血中NK细胞出现有效地扩增。虽然CD3-CD56+NK细胞经过两种细胞因子扩增后，与其功能相关的免疫表型呈现出不同的改变特征，但其细胞毒活性均显著增加，且两种细胞因子之间无显著差别，协同作用不明显;NK细胞毒活性是各种活性分子共同作用的结果。

关键词： 肝细胞生长因子   髓核细胞   椎间盘退变  

摘要： 背景椎间盘退变（intervertebral disc degeneration，IVD）是椎间盘突出、椎体滑脱、椎管狭窄等脊柱疾病的首要病因。研究证实，占椎间盘体积1%的髓核细胞在维持正常椎间盘细胞和细胞外基质平衡以及在修复退变的椎间盘过程中发挥着核心作用。肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）是人体中重要的细胞因子，存在于多种组织与细胞，发挥促进细胞增殖、基质表达、血管新生、抑制细胞凋亡等作用，在生命的器官发生、形态形成、个体发育以及组织修复中发挥作用。通过肝细胞生长因子对髓核细胞作用，研究髓核细胞增殖活性以及细胞外基质表达变化，为修复退变的椎间盘寻求切实可靠的方法。 目的1.探讨肝细胞生长因子（HGF）对体外培养的人退变髓核细胞的生物学作用。 2.研究肝细胞生长因子与胰岛素样生长因子联合作用对人退变髓核细胞的影响。 方法收集人退变髓核组织标本，分离培养髓核细胞;免疫组织化学法检测髓核细胞Ⅱ型胶原表达，HE染色观察细胞形态;免疫组化染色观察HGF受体在髓核细胞中表达;设立HGF：0 ng/ml、5ng/ml、50ng/ml、500ng/ml组，采用MTT法测细胞生长曲线，筛选HGF最佳作用浓度;选取第3代髓核细胞，实验分HGF组、HGF+IGF组、IGF组、对照组，RT-PCR检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX9 mRNA表达;流式细胞术测定细胞增殖的周期。 结果免疫组化Ⅱ型胶原染色可见细胞外和胞浆内棕褐色颗粒;HE染色细胞核染成紫色;免疫组化显示髓核细胞表达HGF受体;MTT法提示不同浓度肝细胞生长因子对体外培养的人退变髓核细胞均有明显的促增殖作用，与对照组相比差异均有意义，50ng/ml是实验中肝细胞生长因子的最佳作用浓度;HGF、HGF+IGF、IGF刺激后髓核细胞进入增殖期比例增加，同时促进髓核细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX9 mRNA表达量增加，其中HGF+IGF效果更为显著。 结论1.人退变髓核细胞存在HGF受体;***对体外培养的人退变的髓核细胞有促增殖作用，可以促进细胞外基质表达;HGF与IGF联合作用效果优于两者单独作用。