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关键词： 网络资源   改变   细胞生物学   教学模式  

摘要： 本文阐述了利用网络资源进行细胞生物学教学模式改革的必要性和重要性,并从教师的角色转变、学生的地位转变、交互式教学模式、远程教育教学模式等几个方面论述了充分利用网络资源,改变细胞生物学教学模式所取得的良好的效果,并对未来网络资源在细胞生物学中的进一步应用提出了参考性的建议。

关键词： MiR-101基因   卵巢癌   细胞生物学活性   体外调节   耐药性分析  

摘要： 目的:研究microRNA-101(miR-101)过表达对卵巢癌细胞增殖、迁移、耐药性的影响。<br>　　方法:用携带pre-miR-101序列的慢病毒(Lenti-101)稳定感染卵巢癌细胞A2780、SKOV3;qRT-PCR法检测感染后miR-101表达是否升高;Brdu、Transwell法分别检测卵巢癌细胞增殖、迁移能力的变化;MTT法检测顺铂耐药细胞A2780/DDP、SKOV3/DDP转染Lenti-101后耐药性的变化。<br>　　结果:A2780、SKOV3细胞感染Lenti-101后miR-101表达水平分别增长了7.88倍和5.90倍,差异有统计学意义(P<0.001);与空病毒载体(Vector)相比,Lenti-101感染后A2780和SKOV3细胞增殖能力降低了40％(P<0.001),迁移能力降低了31%(P<0.001);miR-101在卵巢癌顺铂耐药株中低表达,外源性高表达miR-101能显著降低细胞对顺铂的耐药性,使A2780/DDP的IC50从47.20μmol/L降低到15.7μmol/L(P<0.001),SKOV3/DDP的IC50从54.79μmol/L降低到22.02μmol/L(P<0.001)。<br>　　结论:miR-101能降低卵巢癌细胞的增殖迁移能力及耐药性,在卵巢癌中发挥类似抑癌基因的作用。

关键词： 人端粒酶逆转录酶   胎儿成纤维细胞   山羊  

摘要： 胎儿成纤维细胞（Fetal fibroblast cells, FFCs）由于具有易培养、体外培养生长速度快、耐操作、染色体倍性稳定等特点，被作为常用的细胞核移植的供体细胞。既便如此，胎儿成纤维细胞的利用依旧面临着取材较为困难，传代细胞容易衰老，扩大培养难等问题;并且在基因转染过程中常需要将胎儿成纤维细胞在体外多次传代，这将导致细胞快速衰老并逐渐不适合用于核移植操作;而通过各种技术和方法获得稳定传代和有较强增殖能力的胎儿成纤维细胞，就成为了研究人员解决核移植供体细胞问题的途径。人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase，hTERT)与端粒酶活性存在平行关系，并可在分裂增殖的细胞中起到维持端粒的长度的作用。因此，人端粒酶逆转录酶基因被用于本试验的细胞转染，以期该基因能得到表达并最终起到延长细胞寿命的作用。 本研究用含有人端粒酶逆转录酶基因的真核表达载体pCI-neo-hTERT转染了西农萨能山羊的胎儿成纤维细胞。检测了转染细胞的包括细胞生长曲线、hTERT基因的表达、端粒酶活性、端粒长度、细胞核型、细胞致瘤性、以及生长因子Oct-4和Nanog的表达等生物学特点。试验结果显示，人端粒酶逆转录酶被成功转入山羊胎儿成纤维细胞并可在一定程度上延长成纤维细胞体外培养的寿命。人端粒酶逆转录酶基因在转染细胞中得到了表达，端粒酶在不同代数转染细胞中的活性均高于对照组的未转染细胞。应用Real-time PCR的方法测定端粒长度后发现，转染组细胞的端粒的长度在一定程度上得到了维持。另一方面，核型分析表明经人端粒酶逆转录酶转染的细胞仍具有正常核型，染色体数目为58+2条。不同代数的转染细胞注射裸鼠皮下后，均未表现致瘤性。hTERT基因的转染甚至可以提高生长因子Oct-4和Nanog在山羊胎儿成纤维细胞的表达，尤其在低世代细胞中这种差异更为显著，但随着传代次数的增加，hTERT基因对生长因子Oct-4和Nanog表达的促进作用逐渐减弱。 以上结果表明hTERT基因修饰提高了细胞端粒酶活性，一定程度延长了细胞寿命，对山羊胎儿成纤维细胞的生存和增殖具有促进作用，同时还能维持细胞的生物学特征。本细胞系可以作为转基因的供体细胞使用。

关键词： 微RNAs   卵巢上皮性癌   原癌基因蛋白质类   细胞凋亡   抗药性   肿瘤  

摘要： 目的探讨微小RNA-16(microRNA-16, miR-16)调控人上皮性卵巢癌细胞skov-3增殖、侵袭及凋亡的作用及机制,以及在人卵巢癌顺铂耐药细胞skov-3/DDP中的表达及其与铂类药物敏感性的关系。 方法脂质体lipofectamine2000介导miR-16成熟体模拟物(mimics)及相应的阴性对照片段(negative control RNA, NC)分别转染人卵巢癌细胞株及顺铂耐药细胞株。实时荧光定量PCR检测细胞中miR-16的表达;蛋白印迹法检测细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、凋亡抑制基因(B-cell lymphoma2,Bcl-2)蛋白、原癌基因c-myc蛋白的表达;多种方法测定细胞的增殖侵袭能力;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的顺铂半数抑制浓度;caspase-3活性检测试剂盒检测细胞内caspase-3酶的活性;流式细胞术检测血清饥饿及低氧条件下细胞的凋亡情况。 结果 (1)转染1niR-16mimics后skov-3细胞中miR-16水平明显高于转染NC后的细胞(P<0.01);(2)转染niR-16mimics后skov-3细胞中VEGF、MMP-2及Bcl-2蛋白的相对表达量均明显低于转染NC后skov-3细胞(P<0.01);(3)miR-16显著抑制skov-3细胞的增殖及侵袭能力(P<0.05);(4)血清饥饿及低氧条件培养24h后,转染miR-16mimics后skov-3细胞的凋亡率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);培养48h后,转染miR-16mimics后skov-3细胞的总凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P=0.001)。 (5)skov-3/DDP细胞中miR-16表达水平明显低于skov-3细胞,约为后者的1/10(P=0.000),转染miR-16mimics后skov-3/DDP细胞中miR-16水平升高约660倍(P=0.001);(6)skov-3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量较skov-3细胞明显升高,转染miR-16mimics后skov-3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量明显降低(P<0.01);(7)skov-3/DDP细胞转染miR-16mimics后,顺铂半数抑制浓度(14.19±0.06)较转染NC细胞(22.52+0.60)明显降低(P=0.002),且顺铂作用后caspase-3的酶活力单位也明显升高(P=0.000);(8)顺铂(20ug/ml)作用24h或48h后,skov-3组凋亡率明显高于skov-3/DDP组,转染miR-16mimics的skov-3/DDP细胞凋亡率约为转染NC细胞的1.5倍(P<0.01)。 结论 (1)miR-16能够下调上皮性卵巢癌细胞VEGF、MMP-2及Bcl-2蛋白的表达,抑制细胞增殖侵袭能力,增强其对凋亡刺激的敏感性;(2)miR-16能够靶向下调上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞Bcl-2蛋白的表达,并协同调节c-myc蛋白的表达,增强卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,发挥逆转耐药的作用。

关键词： miRNA-451   人A549肺癌细胞   生物学特性  

摘要： 目的通过构建miRNA-451真核表达质粒，转染入人A549肺癌细胞中，研究miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡四个方面的影响，以及miRNA-451对人A549肺癌细胞中iNOS基因表达的影响的研究。 方法通过miRBase数据库检索，查找hsa-miR-45序列，并由此hsa-miR-45序列设计出对应的两条寡核苷酸片段，通过人工合成，将片段转入pGenesil-1.1载体中，最后通过酶切鉴定、送检测序证实目的质粒构建成功，即miRNA-451真核表达载体（pGenesil-1.1-miRNA-451质粒）;利用LipofectamineTM2000脂质体转染试剂盒将目的质粒pGenesil-1.1-miRNA-451及空白阴性对照质粒pGenesil-1.1-control分别转染入人A459肺癌细胞中，再经过抗性筛选试剂G418筛选出遗传性稳定的细胞克隆，以此获得pGenesil-1.1-miRNA-451及pGenesil-1.1-control稳定表达的细胞株;运用Transwell体外侵袭实验检测转染前后细胞侵袭能力;划痕实验检测转染前后细胞迁移能力;流式细胞术检测转染前后细胞增殖与凋亡能力;MTT法检测细胞生长增殖能力;Western blot、免疫细胞化学及免疫荧光细胞化学检测iNOS蛋白表达差异。 结果经酶切鉴定及测序证实pGenesil-1.1-miRNA-451重组质粒构建成功，稳定表达了pGenesil-1-miRNA-451的人A549肺癌细胞与稳定表达pGenesil-1.1-control的人A549肺癌细胞及未处理的人A549肺癌细胞相比，其细胞侵袭能力、迁移能力和细胞增殖能力均受到抑制影响，而细胞凋亡无明显变化;iNOS蛋白水平表达明显下调受到抑制。 结论miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭转移和增殖能力均具有显著的抑制作用，但对细胞的凋亡作用影响不明显;miRNA-451对人肺癌A549细胞中iNOS基因的蛋白质水平具有明显的抑制作用。

关键词： 细胞生物学   优秀人才   学报   连续出版物   颁奖活动   中华人民共和国   湖州  

摘要： 2012年10月13日,在第四届中国医学细胞生物学学术大会暨教学改革与教研室(系)主任会议(天津)上举行了第二届"《中国细胞生物学学报》-湖州海创生物科技细胞生物学教学优秀人才奖"颁奖仪式。与会代表参加了本次颁奖仪式

关键词： 手机辐射   EB病毒早期抗原   DNA损伤   细胞转化  

摘要： 随着科学技术的迅猛发展和对无线通信的需求日益增加，手机已经被广泛使用并且极大地提高了人们的生活质量。与此同时，手机辐射作为可能危害人体健康的新的环境污染因素也引起了人们的关注。为了防护它对人类健康的负面影响，科学家们从流行病学、体内实验和体外实验等方面进行了深入的研究，然而，迄今为止还没有一个具有说服力的证据能够证明手机辐射与癌症发生之间可能存在的联系。 本课题从细胞生物学角度对手机辐射的致癌效应进行了研究。 首先是手机辐射对Raji细胞中EB病毒早期抗原的诱导作用。Raji细胞是携带有潜伏状态EB病毒的细胞系，正常情况下只表达EB病毒核抗原（EBNA）。在受到外界物理或化学因素刺激时，可以表达EB病毒早期抗原（EBV-EA）在内的多种抗原。实验中将Raji细胞分为四组，每组3瓶。其中A组和B组为非辐照组，C组和D组为辐照组，每天在细胞培养箱中使用通话状态手机辐照4小时。进行辐照实验时，将细胞培养瓶的几何中心置于手机天线的正上方，细胞培养瓶底与手机表面距离为1mm。根据SPEAG DASY5测试系统的测量结果显示，辐照手机的SAR值为0.020mw/g（1g取平均）。辐照实验共进行4周，在每次进行免疫组化检测前，使用终浓度为1ng/mL的TPA作用B组和D组细胞48小时。在每周辐照实验后，收集各组细胞，进行细胞免疫组化检测。实验结果表明，手机辐射能够诱导EBV-EA表达，在促癌剂TPA的作用下，这种诱导作用更为明显。 其次本课题还研究了手机辐射对NIH/3T3细胞的转化作用。NIH/3T3细胞体外培养恶性转化系统对环境中的致癌物或促癌物较为敏感，是一种筛选致癌物或促癌物的经典方法。辐照实验采用连续辐照和间隙辐照两种方式进行。在累计40天每天12小时的连续辐照实验中，手机辐射对NIH/3T3细胞的形态和生长速率没有产生明显的影响，但是在细胞粘附性实验中发现，手机辐射能够增加NIH/3T3细胞对DB Matrigel胶的粘附性。而在累计16天的间歇辐照实验中（辐照50分钟间断10分钟，每天重复10次），使用单细胞凝胶电泳技术未能检测出由手机辐射引起的DNA损伤，但是TPA与手机辐射共同对细胞DNA造成的损伤作用比TPA单一因素作用更为明显。 本实验结果表明，手机辐射能够诱导Raji细胞中EBV-EA表达。而在另一个实验中，虽然NIH/3T3细胞在形态和增殖方面没有明显变化，但手机辐射与TPA共同作用时与TPA组相比有明显的DNA损伤作用。本研究为揭示手机辐射与癌症发生之间可能存在的联系提供了依据。

关键词： 穹窿下器   室管膜细胞   免疫阳性   细胞生物学  

摘要： 目的：观察穹窿下器中神经干细胞的分布及形态。<br>　　方法：⑴制备BrdU标记实验动物模型：按照体重50mg/Kg对实验动物腹腔注射BrdU生理盐水注射液。分别于14:00和16:00给药，连续给药三天，制备BrdU模型。⑵免疫组织化学染色：正常动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，浸蜡包埋，选取含穹窿下器部分，石蜡切片，厚度为5um，分别经Nestin和Sox2免疫组织化学染色，封片后Olympus BX-UCB显微照相系统观察照像。⑶Nestin、Sox2免疫荧光组织化学双标染色步骤：正常动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，蔗糖浸泡后选含穹窿下器部分，冰冻切片，厚度为10um，经Nestin、SOX2免疫荧光组织化学双标染色，甘油封固后Olympus BX-UCB显微照相系统观察照像。⑷BrdU标记实验动物免疫组织化学染色：BrdU模型动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，浸蜡包埋，选取含穹窿下器部分，石蜡切片，厚度为5um，经BrdU免疫组织化学染色，封片后Olympus BX-UCB显微照相系统观察照像。⑸BrdU模型动物经BrdU，Sox2免疫荧光组织化学双标染色：模型动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，蔗糖浸泡后选含穹窿下器部分，冰冻切片，厚度为10um，经BrdU、Sox2免疫荧光组织化学双标染色，甘油封固后Olympus BX-UCB显微照相系统观察照像。⑹统计学处理：阳性细胞采用专业图像分析软件Image-Pro Plus6.0测定平均光密度值。用spss13.0软件进行分析。采用SNK-q检验，以P<0.05为有显著性差异。<br>　　结果：①镜下，经甲苯胺蓝染色后，可以看到SFO内有丰富的毛细血管分布，两外侧区有一些较大的血管，血管周围的组织排列较紧密，核心区域是微血管。室管膜细胞呈单层排列，细胞形态呈梭形，细胞表面光滑，细胞核大小不等，呈椭圆形或圆形。SFO内的细胞分布并不均匀，在大血管周围，SFO的外周区以及第三脑室的室管膜层，以上部位的细胞为大细胞，胞体较丰满，染色比较均匀，但突起并不明显，细胞核呈椭圆形或圆形。其余部位的细胞一般较小，主要分布于SFO中心区的小血管四周。在SFO中心区分散了一些体积较大的细胞。血管间隙内可见胞浆内含有微小气泡的神经内分泌样细胞，此种细胞胞体较丰满，突起较少，且长度较短。②在SFO的冠状面上可以看到SOX2免疫阳性细胞排列紧密，胞核为中等大小，呈圆形或椭圆形，中间部较两侧边缘部SOX2阳性细胞多，SFO内血管周围的SOX2免疫阳性细胞较少，室管膜处可见单层排列的SOX2免疫阳性细胞，而与SFO相连的海马腹侧联合内，只有少量的阳性细胞，侧脑室室管膜的阳性细胞呈单层紧密排列。脉络丛未见阳性表达。SFO两侧部SOX2免疫阳性细胞的平均光密度值为0.3783±0.0251，中间部SOX2免疫阳性细胞的平均光密度值为0.5177±0.0352。海马腹侧联合SOX2免疫阳性细胞的平均光密度值为0.2185±0.0473。SFO两侧部与中间部比较结果显示有显著性差异(P<0.05)，SFO与海马腹侧联合比较结果显示有显著性差异(P<0.05)。③SFO内Nestin阳性细胞呈不均匀分布，主要分布于大血管周围，SFO的外周区以及第三脑室的室管膜层，血管周围可见围绕血管的阳性表达。侧脑室的室管膜内可见单层紧密排列的阳性细胞。脉络丛内也可见阳性表达。SFO相连的海马腹侧联合内，未见阳性细胞。SFO两侧部比中间部阳性细胞多。SFO两侧部Nestin免疫阳性细胞的平均光密度值为0.3745±0.0553，中间部Nestin免疫阳性细胞的平均光密度值为0.2145±0.0241。SFO两侧部与中间部比较结果显示有显著性差异(P<0.05)。④冠状切面上SFO内可见散在的BrdU免疫阳性细胞，由于数量较少，所有分布位置不恒定。⑤BrdU、SOX2免疫荧光组织化学双标结果观察：SFO内可见SOX2免疫荧光阳性细胞排列紧密，胞核中等大小，呈圆形或椭圆形，SOX2阳性细胞分布广泛，遍布整个SFO，但中间部较两侧边缘部SOX2免疫荧光阳性细胞多，而SFO内血管周围的SOX2免疫阳性细胞较少，室管膜处可见单层排列较整齐的SOX2免疫阳性细胞。BrdU免疫荧光阳性细胞的较少，有少量细胞同时存在两种阳性表达。⑥Nestin、SOX2免疫荧光组织化学双标结果观察：SFO内Nestin免疫荧光阳性细胞分布不均匀，主要分布于大血管周围，SFO的外周区以及第三脑室的室管膜层。SOX2免疫荧光阳性细胞分布广泛，遍布整个SFO，但中间部与两侧边缘部相比，SOX2免疫荧光阳性细胞多，SFO内血管周围的SOX2免疫阳性细胞较少，室

关键词： FK506分子   高糖培养   视网膜Müller细胞   生物学特性   MTT法检测  

摘要： 第一部分:视网膜Müller细胞的培养及FK506半数抑制率研究<br>　　目的:培养、鉴定视网膜Müller细胞，检测FK506对视网膜Müller细胞的IC50，为FK506对Müller细胞的生物学作用研究提供实验基础。<br>　　方法:采用含10％胎牛血清的DMEM培养基(含D-葡萄糖5.5mmol/L)，培养大鼠永生化视网膜Müller细胞。Müller细胞培养12、24、48h倒置显微镜下观察Müller细胞形态并照相记录。以谷氨酰胺合成酶(GS)免疫细胞化学染色鉴定。MTT法检测FK506作用于视网膜Müller细胞的生长抑制率。<br>　　结果:光镜观察见Müller细胞呈典型的多角形，细胞大小均匀，细胞边界清晰，形态无明显差异。Müller细胞GS抗体免疫细胞化学染色(+)，细胞质中和细胞膜上出现棕黄色、棕褐色颗粒状或者网状物质。MTT法检测Müller细胞的生长抑制率，FK506IC50=75pg/ml。<br>　　结论:Müller细胞生长良好，FK506的IC50=75pg/ml。<br>　　第二部分:FK506对高糖培养视网膜Müller细胞VEGF表达的影响<br>　　目的:采用FK506干预大鼠视网膜Müller细胞，观察其对Müller细胞VEGF基因表达的影响，从而探讨FK506对高糖培养的视网膜Müller细胞中VEGF基因表达的调控作用。<br>　　方法:采用常规DMEM培养基(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，配制高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)。分组：正常对照组(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，FK506组(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L+FK50675pg/ml）,高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)，高糖+FK506组（D-葡萄糖浓度50mmol/L+FK50675pg/ml）。ELISA检测FK506对常规和高糖培养条件下的大鼠视网膜Müller细胞上清中VEGF的表达。RT-PCR检测Müller细胞中VEGF基因的表达。<br>　　结果:ELISA检测各组Müller细胞中VEGF浓度：结果表明高糖组比正常对照组细胞上清中VEGF的表达浓度升高（P<0.05）。在高糖+FK506组较单纯高糖组细胞上清中VEGF的表达浓度降低（P<0.05）。<br>　　RT-PCR检测各组的光密度值：高糖组较正常对照组的视网膜Müller细胞VEGF基因mRNA的表达增高（P<0.05）；高糖+FK506组较高糖组VEGF基因mRNA的表达降低（P<0.05）。<br>　　结论:FK506可抑制高糖培养的视网膜Müller细胞VEGF的表达。<br>　　第三部分:FK506对高糖培养视网膜Müller细胞凋亡的影响<br>　　目的:观察FK506对高糖培养视网膜Müller细胞凋亡的影响。<br>　　方法:采用常规DMEM培养基(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，配制高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)。实验分组：正常对照组(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，FK506组(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L+FK50675pg/ml）,高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)，高糖+FK506组（D-葡萄糖浓度50mmol/L+FK50675pg/ml）。流式细胞仪检测视网膜Müller细胞凋亡比例。免疫细胞化学染色检测FK506对常规及高糖培养条件下的大鼠视网膜Müller细胞中的P53、Bcl-2、Fas及caspase-3表达的影响。<br>　　结果:FCM检测各组凋亡比例：提示高糖组较正常对照组的凋亡比例明显上升(P<0.05)；高糖+FK506组比高糖组的视网膜Müller细胞的凋亡比例下降(P<0.05)。<br>　　免疫细胞化学染色检测各组的OD值：a.高糖组视网膜Müller细胞P53、Fas及caspase-3的表达较正常组升高（P<0.05）；FK506+高糖组比高糖组视网膜Müller细胞P53、Fas及caspas的表达明显降低（P<0.05）。b.高糖组视网膜Müller细胞Bcl-2的表达较正常组降低（P<0.05）；FK5

关键词： 胃癌   细胞生物学   miR-29基因   细胞增殖   Mcl-1蛋白表达   化疗敏感性  

摘要： miRNAs是一类大小约22个核苷酸(nts)的内源性非编码小RNAs,通过与mRNA3'UTR完全或不完全互补结合降解靶mRNAs或抑制其翻译,参与细胞增殖、分化、代谢和凋亡等过程。前期研究发现miR-29c在胃癌中的表达量明显下降,并预测抗凋亡基因Mcl-1为miR-29的靶基因之一,其在胃癌组织中高表达并与miR-29e的表达呈反比相关。<br>　　 本研究构建相关载体并应用荧光素酶报告基因技术进一步证实miR-29b/c与Mcl-1靶向作用关系。用Western blot检测10例胃癌组织中Mcl-1蛋白表达情况。通过细胞转染,在胃癌细胞BGC-823中高表达miR-29b/c,用实时定量PCR及Westernblot分别检测Mcl-1 mRNA和Mcl-1蛋白的表达变化,并采用WTT试验,DAPI染色,流式细胞术检测其对细胞增殖、凋亡、细胞周期和药物敏感性的影响。<br>　　 结果发现,胃癌组织中Mcl-1蛋白表达下降,miR-29b/c可以通过直接作用于Mcl-13'UTR,进而影响Mcl-1 mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达水平。过表达miR-29b/c可抑制细胞的增殖,促进BGC-823胃癌细胞凋亡,使细胞周期受阻于S期,同时可以增加胃癌细胞对化疗药物DOC的敏感性,使化疗药物更有效的发挥抑制和杀伤作用。<br>