教学课程资源库 更多>>

关键词： 宫颈癌   淋巴结转移   miR-21   血清肿瘤标志物   SiHa细胞   增殖   迁移   侵袭  

摘要： 目的： 淋巴结转移被公认为是影响宫颈癌预后的主要危险因素之一,伴有淋巴结转移的宫颈癌患者的生存率远远低于无淋巴结转移者。而宫颈癌早期即可发生淋巴结转移,同一分期的病人有无淋巴结转移,预后迥异,且是否有淋巴结转移对于治疗及手术方式和术后放化疗的选择关系密切。研究发现,宫颈癌的发生与miRNA的改变密切相关。宫颈癌病理中大部分是鳞癌,本研究拟通过Real-time RT-PCR检测伴有淋巴结转移的宫颈鳞癌、无淋巴结转移的宫颈鳞癌以及正常宫颈血清中miR-21的表达,并探讨其表达情况与宫颈鳞癌淋巴结转移有无关系。 方法： 选择2011年1月—2011年9月在广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科住院接受治疗的患者为研究对象,其中,宫颈鳞癌伴淋巴结转移者25例,不伴淋巴结转移者40例,正常对照组15例。治疗前留取患者血清,实时荧光定量PCR测定血清miR-21水平,运用Pearson相关分析血清miR-21水平与患者淋巴结转移的关系,绘制受试者工作曲线（ROC）,计算血清miR-21的诊断界值。 结果： 1、宫颈癌伴淋巴结转移患者血.清miR-21水平较不伴淋巴结转移患者和正常对照组明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。 2、血清miR-21水平与宫颈癌淋巴结转移呈正相关（r=0.408,P＜0.001）,血清miR-21在宫颈癌确诊病例中诊断淋巴结转移的ROC曲线下面积为0.770,最大约登指数0.485,相应灵敏度56%,特异度92.5%,对应诊断界值6.65。 结论：血清miR-21在诊断宫颈癌淋巴结转移方面有临床价值和应用空间。 目的： 宫颈癌是女性常见的生殖道恶性肿瘤,主要病理类型有宫颈癌鳞癌和腺癌。高危型人乳头瘤病毒（human papilomavirus, HPV）在宫颈上皮细胞恶性转化中起重要作用,HPV16与宫颈鳞癌有关,HPV18与宫颈腺癌有关,但宫颈癌发生的具体分子机制尚不清楚。本研究利用RNA干扰技术改变来源于人宫颈鳞癌的SiHa细胞（HPV16阳性）中miR-21的表达水平,观察SiHa细胞增殖和迁移、侵袭的变化,探讨miR-21对SiHa细胞的增殖、迁移及侵袭能力等生物学特性的影响,为宫颈鳞癌早期诊断及基因治疗、预后提供实验基础。 方法： 选取人宫颈鳞癌SiHa细胞系,运用人工合成miR-21的模拟物miR-21-mimic和miR-21的抑制物miR-21-Inhibitor,将宫颈癌SiHa细胞分为miR-21-mimic组、miR-21-Inhibitor组及空白转染组,利用脂质体Lipofectamin2000瞬时转染技术将miR-21-mimic和miR-21-Inhibitor转染SiHa细胞后,通过流式检测转染率,转染48小时后实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR-21的相对表达量、MTT法检测转染后各组细胞增殖能力、Transwell小室检测各组细胞的迁移能力及侵袭能力。 结果： 1、实时荧光定量PCR结果显示：三组SiHa细胞均表达了miR-21,而转染了miR-21-mimic后SiHa细胞中的miR-21表达量较对照组增加,转染了miR-21-inhibitor后SiHa细胞中的miR-21表达量则降低;2、MTT增殖结果显示：在转染了miR-21-mimic48h后,SiHa细胞的增殖活性出现明显增强,相反的,转染了miR-21-inhibitor48h后,SiHa细胞增殖活性明显降低,说明了miR-21对宫颈鳞癌SiHa细胞的增殖活性有一定的促进作用。 3、Transwell小室测迁移能力试验结果显示：转染miR-21-mimic后明显促进SiHa细胞的迁移能力,转染miR-21-inhibitor后则抑制了SiHa细胞的迁移能力。 4、Transwell小室侵袭能力结果显示：转染miR-21-mimic后明显促进SiHa细胞的侵袭能力,转染miR-21-inhibitor后则抑制了SiHa细胞的侵袭能力。 结论： 1、miR-21模拟物miR-21-mimic能够有效上调miR-21在SiHa细胞中的表达水平,而miR-21抑制剂miR-21-inhibitor能够有效下调miR-21在SiHa细胞中的表达水平。 2、上调miR-21在SiHa细胞中的表达可以促进细胞的增殖活性,对细胞的迁移,侵袭能力有明显的增强作用;下调miR-21在SiHa细胞中的表达则抑制细胞的增殖,同时减弱细胞的迁移及侵袭能力。 3、miR-21与宫颈癌的发生发展密切相关。

关键词： 脐带间充质干细胞   移植介质   生物学特性   治疗效果   氧化应激   能量缺乏  

摘要： 背景： 间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一类具有自我更新、多向分化、免疫调节等多种生物学特性的多能干细胞，为利用传统疗法治疗效果不佳的难治性肺部疾病(如慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘、急性肺损伤、肺动脉高压等)提供了新的治疗思路与手段。传统MSCs来源于骨髓，骨髓源MSCs在骨髓中含量极少(＜0.01%)，且随年龄的增长增殖与分化能力减弱，并不能满足临床需要。因而，细胞需要量与供应量间的矛盾成为制约MSCs临床应用的首要问题。脐带来源的间充质干细胞(umbilical cordmesenchymal stem cells, UC-MSCs)凭借来源广泛、含量丰富、获取容易、不涉及伦理等优势为这一矛盾的解决带来了新的希望，但传统制备工艺获取UC-MSCs效率偏低，远不能达到脐带中所含UC-MSCs的理论值，造成一定程度上生物资源的浪费。对现行的传统制备工艺进行优化，不仅有效节约资源，为UC-MSCs规模化生产提供可能，也为日益增长的临床需求提供保障。 MSCs治疗已在肺部疾病的研究中广泛开展，但MSCs在临床应用前尚有许多问题需要解决。在MSCs移植治疗中一直存在着一个突出的临床困惑，即应用同一实验室相同细胞源与细胞数量的MSCs进行移植时，不同的临床前处理过程所获得的治疗效果差异很大。据文献报道与我们前期实验研究发现，培养结束后到临床使用前MSCs的制备过程、储存条件等与治疗效果有着密切的关系。移植用的MSCs从实验室培养到临床输注，需要经过标本采集、细胞培养、细胞传代、细胞消化、细胞保存、细胞运输等多个环节，以上各个环节均可能会影响MSCs移植前细胞质量。在众多问题中，移植保存条件(包括移植保存介质、保存时间与保存温度)对细胞质量的影响最为直接与关键，但目前并无相关指南及系统研究。 虽然MSCs细胞进行治疗时，新鲜分离的MSCs即刻进行移植可获得最大的移植效果。但事实上，MSCs在临床应用时并不能实现即刻输注，运输、手术等待等因素均需要将MSCs在美国食品药物管理局(Food and Drug Administration，FDA)批准的，可被直接输注于人体的移植介质中保存一定时间，但目前尚无关于MSCs移植保存介质的相关推荐。各个研究组通常采用0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液、勃脉力A、1%人血白蛋白溶液与5%人血白蛋白溶液作为MSCs移植时的移植保存介质，但关于这些移植保存介质对保存后MSCs生物学特性的影响并无相关报道。而需特别注意的是，上述临床常用的移植保存介质相对于MSCs正常生长环境而言，缺乏必要的生存条件及营养成分，这很可能引起MSCs在保存过程中活性的下降，进而影响MSCs治疗效果。这一点虽应在MSCs移植时引起高度注意，却在临床应用时常常被忽略。因此，评价现行移植保存介质对MSCs生物学特性及临床治疗效果的影响十分必要。 因此，本研究综合以上两个MSCs临床应用前的关键问题，首先对UC-MSCs传统分离工艺进行改良，旨在建立一种高效、快速获取UC-MSCs的方法，为生物资源的有效利用及UC-MSCs规模化生产提供可能。再以UC-MSCs为研究对象，评价现行移植保存介质对细胞保存过程中体外生物学特性及体内治疗效果的影响。在体内治疗效果评价模型选择方面，我们选择了造模时间短且对MSCs治疗效果较为肯定的急性肺损伤(acute lunginjury，ALI)作为研究对象。由于实验结果提示目前常用的移植保存介质对UC-MSCs短期保存即可引起细胞活性的快速下降，不能满足FDA关于细胞移植的最低活性要求。因此，我们对目前临床常用移植保存介质引起UC-MSCs活性下降的机制进行初步探讨，以期一方面可以通过简单改造提高现行移植保存介质对UC-MSCs的保存效果，另一方面为最适移植保存介质的配制提供实验依据。 目的： 1.根据脐带结构特点，选择相应消化酶，对UC-MSCs分离制备工艺进行优化，探寻一套高效、快速、大量获取UC-MSCs的分离方法;2.评价现行移植保存介质对UC-MSCs体外生物学特性的影响;3.建立急性肺损伤模型，观察UC-MSCs对其治疗作用，同时评价现行移植保存介质引起的活性细胞数量下降对UC-MSCs体内治疗效果的影响;4.探讨氧化应激在UC-MSCs保存过程中对其保存效果的影响;5.探讨能量缺乏在UC-MSCs保存过程中对其保存效果的影响。 方法： 1. UC-MSCs分离制备工艺的优化及UC-MSCs的培养与鉴定 根据脐带中束缚UC-MSCs的基质成分，选择胶原酶I、III及透明质酸酶、胰蛋白酶、DNA酶作为改良消化液组分，对改良酶消化法与传统酶消化法(胶原酶II与胰蛋白酶)在不同时间收获的细胞数量、细胞活性、原代贴壁细胞出现时间、首次传代时间方面进行

ISBN: (纸本)9787312029028

关键词： 细胞生物学   医学人文素质教育   方法和途径  

摘要： 细胞生物学是重要的医学基础课程之一,在细胞生物学教学的过程中融入医学人文教育,使医学生从进医学院校开始就接收医学专业知识与医学人文教育的双重润育,帮助医学生树立正确的人文主义世界观、价值观,是符合现代医学发展,培养合格医学人才的举措之一。本文浅谈几点在细胞生物学教学中融入医学人文素质教育的方法和途径。

ISBN: (纸本)9787030335159

关键词： 膀胱癌   microRNA   miR-490-5p   实时定量PCR   c-Fos   TET1   UVRAG   细胞增殖   细胞凋亡   细胞侵袭  

摘要： 膀胱癌是我国泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤,发病率和死亡率均位居泌尿系统肿瘤的首位,严重危害我国人民的生命和健康。临床上对于膀胱癌的治疗策略主要是采用手术切除为主,辅以灌注化疗和免疫治疗的综合治疗,但效果不理想。寻找膀胱癌的发病基因,了解膀胱癌的分子遗传学机制,为膀胱癌的诊疗提供理论基础是目前的研究热点。 MicroRNA (miRNA)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码单链小分子RNA,大小约22个核苷酸,通常在转录后水平调控基因表达。大量研究表明,miRNA参与肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭、转移及凋亡等各个环节。MiRNA具有高度的保守性、时序性和组织特异性等特点,预示它们可能是在一个新发现层次上的基因表达调控方式。miRNA的表达谱可作为肿瘤诊断和预后的指标,对其机制的深入探讨有望为膀胱癌诊疗提供新的思路和靶点。 miR-490-5p是新近发现的一种在肿瘤中异常表达的重要的microRNA。初步研究发现,其在包括膀胱癌在内的多种恶性肿瘤中表达显著下调,我们推测其在膀胱癌中发挥类似抑癌基因的功能。为了探索miR-490-5p与膀胱癌的关系,我们利用实时定量PCR技术检测其在膀胱癌、癌旁非肿瘤组织、膀胱癌细胞及正常膀胱细胞之间的表达,探讨其与患者临床分期及病理分级之间的关系。通过生物信息学预测、筛选miR-490-5p的靶基因,应用Western blot进行靶基因蛋白的验证。上调miR-490-5p的表达水平,研究其对膀胱癌细胞生物学行为的影响。进而探讨miR-490-5p在膀胱癌中可能的分子机制,以期为膀胱癌的早期诊断和治疗提供新的策略。 第一章miR-490-5p在膀胱癌组织和细胞中的表达及与临床分期、病理分级的关系研究 目的：研究miR-490-5p在膀胱癌组织和细胞中的表达及临床意义。 方法：采用实时定量PCR检测20例膀胱癌及其癌旁非肿瘤组织、3株膀胱癌细胞(T24、BIU-87和5637)和膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中miR-490-5p的表达水平,研究其与临床分期、病理分级之间的关系。 结果：与配对的癌旁非肿瘤组织相比,癌组织中miR-490-5p的表达在所有样本中均下调。癌组织中miR-490-5p的相对表达量为1.175士0.643,癌旁非肿瘤组织中为8.539±1.920,两者表达有统计学差异(P<0.05)。20例膀胱癌组织标本中,根据临床分期分组,Ⅱ期miR-490-5p的相对表达量为1.149±0.677,Ⅲ-Ⅳ期为1-214±0.632,两者表达无显著差异(P>0.05)。根据病理分级分组,高分化组中miR-490-5p的相对表达量为1.770±0.452,中-低分化组中为0.688±0.206,两者表达有统计学差异(P<0.05)。正常膀胱细胞系SV-HUC-1中miR-490-5p的表达显著高于三种膀胱癌细胞(T24.5637、 BIU87)(P<0.05),且随着膀胱癌细胞恶性程度的增加,miR-490-5p的表达渐次降低(5637>BIU87>T24)。 结论： 1、膀胱癌组织中miR-490-5p的表达水平显著低于癌旁非肿瘤组织,提示miR-490-5p的表达下调可能与膀胱癌的发病机制有关。 2、膀胱癌组织中miR-490-5p的表达水平与患者临床分期无关。 3、膀胱癌组织中miR-490-5p的表达水平与病理分级相关,随病理分级的增加而降低。 4、miR-490-5p在三种膀胱癌细胞系中表达都显著低于膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1,其表达水平与膀胱癌细胞恶性程度有关,随细胞恶性程度的增高而降低。miR-490-5p在T24细胞中表达最低,据此选择该细胞系进行后续细胞功能实验及机制研究。 第二章膀胱癌组织和细胞中miR-490-5p靶基因筛选以及验证 目的：通过生物信息学检索,预测miR-490-5p的靶基因,并对这些靶基因进行验证 方法：通过***和miRanda三个数据库进行检索,筛选miR-490-5p潜在的靶基因：c-Fos、TET1和UVRAG。从实验一结果中选择miR-490-5p表达最低的6例膀胱癌组织、癌旁非肿瘤组织及4株膀胱细胞,进行Western Blot检测,对这三个靶基因的蛋白表达水平进行验证。 结果：同膀胱癌旁非肿瘤组织相比,c-Fos蛋白的含量在膀胱癌组织中显著上调(P<0.05),UVRAG的含量显著下调(P<0.05),而TET1在两组间无显著差异(P>0.05);同正常膀胱细胞相比,c-Fos蛋白的含量在膀胱癌细胞中显著上调(P<0.05),UVRAG的含量显著下调(P<0.05),而TET1无显著差异(P>0.05)。 结论： 1、miR-490-5p在膀胱癌中发挥着类似“抑癌基因”的作用,

关键词： 胎盘组织   脐带组织   骨髓源性间充质干细胞   生物学性状  

摘要： 目的：比较人胎盘、脐带及骨髓源性间充质干细胞（MSCs）的生物学性状。<br>　　方法：采用组织块贴壁培养法分离培养人胎盘、脐带源性基质细胞（SCs），采用密度梯度离心法分离培养人骨髓源性SC。采用流式细胞仪检测CD29、CD34、CD44、CD133、HLA-DR、vWF的表达及细胞周期。应用MTT法检测并比较三种SCs的增殖情况。应用免疫荧光技术检测并比较MRP1、ABCG2、P75NTR及Nestin在三种SCs的表达情况；在体外诱导三种SCs向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞方向分化，并通过特异性染色鉴定并比较其分化能力。<br>　　结果：采用组织块贴壁法能成功获得贴壁生长的成纤维样人胎盘、脐带源性SCs，采用密度梯度离心法能成功获得贴壁生长的骨髓源性SCs；流式细胞术分析结果示，人胎盘、脐带及骨髓源性SCs高表达CD29、CD44，阴性表达CD34、CD133、HLA-DR及vWF，细胞周期结果示，三种SCs大部分均处于G0/G1期，仅少数处于分裂期，但脐带源性SCs处于G0/G1期细胞最多，而处于S期细胞最少，处于G2M期细胞介于胎盘及骨髓源性SCs之间；免疫荧光示MRP1、ABCG2、P75NTR及Nestin在三种SCs中表达情况相似，即均为阳性表达，且荧光定位在细胞的胞浆；MTT检测结果显示，胎盘与脐带源性SCs增殖较快，两者增殖速率无差异。三种SCs经向脂肪细胞诱导后油红O染色阳性，但脐带源性SCs分化为脂肪细胞的数量多，着色深；向成骨细胞诱导后茜素红染色为阳性，向神经细胞诱导后，NSE表达阳性，但胎盘源性SCs分化为成骨细胞及神经细胞的数量多，着色深。<br>　　结论：（1）人胎盘、脐带组织中富含间充质干细胞。（2）人胎盘、脐带与骨髓源性MSCs均表达MRP1、ABCG2、P75NTR及Nestin，但骨髓源性MSCs中P75NTR的表达较弱。（3）人胎盘及脐带源性MSCs具有更强的增殖能力。（4）人胎盘、脐带及骨髓源性MSCs分化为特定细胞的潜能不同。

关键词： 创新型人才   细胞生物学   课程体系   教学模式  

摘要： 细胞生物学是生物技术重要的专业基础课程,面对建设创新性国家重大需求,细胞生物学课程内容及其教学模式的改革势在必行。形成以"细胞结构和功能-细胞生命活动原理-细胞的分子、遗传改造原理"理论课程体系,构建"细胞结构基础-细胞综合技术-创新研究"递进式、层次化的实验内容体系,是集基本(础)知识、基本技能、实践能力、科学创新思维培植为一体、适合以培养生物技术专业学生综合素质、实践能力和创新能力人才的细胞生物学课程建设所需。

关键词： 肿瘤相关巨噬细胞   缺氧   自噬   细胞因子  

摘要： 目的：通过使用氟波脂（Phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）、重组人白细胞介素4（Recombinant Human Interleukin-4，IL-4）刺激人单核白血病THP-1细胞株，获得M2型巨噬细胞。然后分别在缺氧和常氧条件下，对M2型巨噬细胞和人结肠癌HCT-116细胞进行共培养。观察缺氧对肿瘤相关巨噬细胞自噬及细胞因子表达的影响。 方法：1.用PMA刺激诱导人单核白血病THP-1细胞分化为巨噬细胞，再通过IL-4刺激巨噬细胞分化为M2型巨噬细胞。2.构建transwell非接触共培养体系，分别在常氧和缺氧条件下对M2型巨噬细胞单独培养及与HCT-116细胞进行共培养24h、48h。3.实验分组：将M2型巨噬细胞常氧条件单独培养24h、48h两组作为对照组，再设缺氧单独培养24h、48h，常氧共培养24h、48h及缺氧共培养24h、48h共计六个实验组。4.分别收集不同培养条件和不同培养时间的M2型巨噬细胞，提取蛋白，western-blot检测各组标本中的自噬特异性蛋白beclin-1和微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein1light chain3, LC-3）的表达。收集各组细胞培养上清液，采用酶联免疫吸附试验检测上清液中的白细胞介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素（Interleukin-12，IL-12）、肿瘤坏死因子α(Tumor necrotic factor-α，TNF-α)的表达。 结果：1.成功诱导THP-1细胞分化为M2型巨噬细胞，经流式细胞仪检测细胞CD68分子表达率为86.35%。2.酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunoabsorbentassay，ELISA）检测IL-1β实验各组中常氧共培养组（24h、48h）、缺氧单独培养组（24h、48h）与对照组（24h、48h）差异无统计学意义（P＞0.05），缺氧共培养组24h:0.7900±2.65%，48h：0.7433±4.16%分别与对照组24h:0.8717±5.11%，48h：0.8733±3.21%比较差异有统计学意义（P＜0.05），缺氧共培养组24h、48h IL-1β表达均下调。实验组各组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。IL-12和TNF-α的实验各组与对照组比较差异无统计学意义。IL-12和TNF-α表达在缺氧及共培养作用下无明显变化。 通过测量LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的灰度值比值，常氧各组之间无统计学差异（P＞0.05）。缺氧各组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值:缺氧单独培养24h、48h，缺氧共培养24h、48h分别为0.3714±5.49%、1.0706±8.00%、0.4203±5.07%、1.1377±6.18与对照组24h、48h的比值0.2590±0.78%、0.2617±0.82%比较差异显著，有统计学意义（P＜0.05）并与缺氧时间正相关。Beclin1蛋白表达在常氧各组内参灰度值比值差异无统计学意义（P＞0.05）。缺氧各组Beclin1表达相对值即Beclin1/β-actin的灰度值比值:缺氧单独培养24h、48h，缺氧共培养24h、48h分别为0.4385±2.04%、0.6451±3.96%、0.6871±2.21%、8235±7.70%与对照组24h、48h的灰度值比值0.2876±0.67%、0.2856±1.42%比较差异显著，有统计学意义（P＜0.05），差异与缺氧时间正相关。 结论：1、人单核白血病THP-1细胞株在氟波脂及重组人白细胞介素4诱导下可获得M2型巨噬细胞。2、M2型巨噬细胞在缺氧条件下自噬水平显著上调。3、M2型巨噬细胞在缺氧条件下与结肠癌细胞共培养时其IL-1β分泌显著下调，而IL-12和TNF-α分泌则无明显影响。

关键词： HCN4   Tbx3   慢病毒   生物学活性  

摘要： 目的： 电子起搏器的局限性促使人们在缓慢性心律失常的治疗中寻找新的途径和方法，体外重新构建具有窦房结功能的细胞便是尝试之一。目前主要以HCN4基因转染干细胞，其虽能分化成心肌样细胞，但由于缺乏窦房结标记基因，功能上与窦房结细胞仍有差距。Tbx3基因在胚胎发育成熟晚期存在于窦房结前体细胞中使之保留起搏功能并抑制窦房结前体细胞向心房肌细胞分化。同时Tbx3与肿瘤的发生密切相关，目前已经发现乳腺癌、膀胱癌、肝癌等恶性肿瘤都存在Tbx3基因的过表达。本研究拟构建同时携带有人HCN4基因、Tbx3基因及增强型绿色荧光蛋白基因（eGFP）的慢病毒颗粒，并研究HCN4和Tbx3对小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES）细胞生物学活性的影响，为进一步通过HCN4、Tbx3共表达重建窦房结细胞功能奠定基础。 方法： 1、慢病毒包装及滴度测定 用脂质体Lipofectamine2000分别包裹携带有目的基因的hHCN4-hTbx3-eGFP、hHCN4-eGFP、hTbx3-eGFP、eGFP四种目的质粒和辅助质粒，共转染293FT细胞，分别产生含有表达hHCN4-hTbx3-eGFP、hHCN4-eGFP、hTbx3-eGFP、eGFP基因的四种慢病毒颗粒，计数荧光克隆数目，并计算病毒滴度。 2、干细胞稳定转染和筛选 将获得的四种慢病毒颗粒分别转染小鼠ES细胞，48小时后于荧光显微镜下观察转染效果。将转染成功的细胞进行传代扩增并进行挑克隆纯化，RT-PCR进一步检测目的基因表达情况。 3、ES细胞生物学活性的评价 观察获得的四种转基因小鼠ES细胞的形态、荧光表达强度。MTT法测定各组ES细胞OD值，流式细胞仪分析细胞凋亡率。 结果： 1、hHCN4-hTbx3慢病毒颗粒的构建 四质粒转染293FT细胞后，根据荧光显微镜观察结果表明成功构建hHCN4-hTbx3-eGFP、hHCN4-eGFP、hTbx3-eGFP、eGFP四种慢病毒颗粒。病毒滴度测定结果分别为4.7×10~7TU/ml、5.2×10~7TU/ml、4.5×10~7TU/ml、6.7×10~7TU/ml。 2、转基因ES细胞相关基因的表达检测 四种慢病毒转染后的ES细胞挑克隆纯化后荧光表达正常，RT-PCR示目的基因表达良好。 3、ES细胞形态、凋亡等变化 四种转染小鼠ES细胞中，含hHCN4-eGFP及eGFP细胞形态良好，荧光率较高，含hTbx3-eGFP和hHCN4-hTbx3-eGFP细胞状态相对差，荧光虽然明显，但表达不强，培养上清可见漂浮的死细胞。进一步的MTT和流式细胞仪（AnnexinV-PE）检测示hTbx3-eGFP、 hHCN4-hTbx3两组细胞生长速度明显减慢，凋亡率显著增高（P＜0.05）。 结论： 1.成功构建出HCN4-Tbx3基因的慢病毒颗粒。 2. HCN4及Tbx3基因成功在干细胞中过表达。 3. Tbx3对干细胞增殖无促进作用。