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关键词： 生物材料   纳米薄膜   胶质瘤细胞   细胞生物学  

摘要： 大量的研究证实，许多种族的细胞对周围微环境或植入材料在纳米尺度上形貌的变化具有很强的“感知力”，这种识别能力对细胞的迁移、增殖和生长具有极其重要的作用。我们可以利用细胞的这种“感知力”对至今仍令医学界束手无策的脑胶质瘤细胞进行体外培养和体外研究，来进一步认识脑胶质瘤细胞的生物学行径，进而发现不同细胞种群间对纳米效应感知力的差异性，为将来在临床上治疗胶质母细胞瘤提供一定的理论依据。纳米材料的出现为细胞体外培养支架的研究提供了新的选择。新型TiO2纳米管阵列薄膜具有均匀的孔径，良好的生物相容性和光致双亲效应，被认为是理想的生物医用材料。采用电化学阳极氧化法制备TiO2纳米管阵列薄膜，操作简便、成本低，且能通过调节工艺参数获得不同尺度的薄膜。同时通过阳极氧化法制得的薄膜，其纳米管状结构的孔密度较高（＞1010个/cm2）。本研究中采用两步阳极氧化技术在纯钛表面获得具有管状结构的TiO2纳米管阵列薄膜，再利用一系列生物学技术处理该薄膜，我们以大鼠胶质瘤细胞系C6细胞为研究对象，探究了细胞在薄膜表面培养时对纳米微环境变化的感知力。\n 本研究分为三个部分。首先，采用两步电化学阳极氧化法制备TiO2纳米管阵列薄膜，在氧化过程中通过改变氧化电压和氧化时间，制备出具有不同微观形貌的TiO2纳米管阵列薄膜。并通过在空气氛围中煅烧得到具有混晶结构的TiO2纳米管阵列薄膜。其次，在纳米管阵列薄膜表面培养大鼠胶质瘤细胞系C6细胞，采用免疫荧光染色法对接种于不同管径TiO2纳米管阵列薄膜上的C6细胞进行观察;并通过MTT比色法进行不同管径TiO2纳米管阵列对C6细胞增殖情况影响的检测;再利用流式细胞仪对培养在不同管径TiO2纳米管阵列上C6细胞的凋亡情况进行检测。最后，从TiO2纳米管阵列表面培养的C6细胞中提取RNA，根据文献和专用设计软件设计并进行相应的mRNA引物合成;取细胞RNA进行逆转录和聚合酶链式反应;随后对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，并将电泳结果放在紫外线透射反射分析仪上观察，然后通过凝胶成像系统测算电泳条带的光密度值。\n 本研究表明：纳米管的管径尺寸随着电压的增加而变大;延长氧化时间可以增加纳米管的长度，但这样会降低F-的扩散速率，从而使氧化速率降低，因此在薄膜中会出现沟壑形貌;TiO2纳米管阵列薄膜样品经高温退火处理后，变为锐钛矿和金红石的混晶结构;通过细胞免疫化学分析及MTT实验证明，C6细胞在TiO2纳米管阵列表面的生物学行为具有明显的尺寸依赖性，TiO2纳米管阵列在管径范围介于10-30nm之间时有利于C6细胞的生长;细胞在15nm-TNT的薄膜表面具有最佳活性，当管径超过50nm时，TiO2纳米管阵列能够明显地诱导细胞凋亡;C6胶质瘤细胞在不同样品表面培养24小时后多种炎性介质基因表达水平有差异，且不同炎性介质基因表达水平趋势不同;总之，15nm的管径间距适合作为整合蛋白回馈细胞核的信号通路，并能够最大程度地刺激整合蛋白的活性，从而影响细胞行为，而大于50nm的管径间距会明显地限制细胞的附着和迁移，最终导致细胞凋亡。

关键词： 生物医学   讨论会   东亚   细胞生物学   科学研究院   生物化学   专家学者   医学领域  

摘要： 2011年12月7日～9日，第十八届东亚生物医学讨论会议暨第十届两岸生物医学研讨会于上海召开，此次会议由中科院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所（以下简称：中科院上海生化与细胞所）主办。赛默飞世尔科技（以下简称：赛默飞）赞助了此次会议的欢迎晚宴，与行业内的专家学者进行了积极的交流。此外，赛默飞还在会场设立了展台，向与会嘉宾展示了赛默飞在生物医学领域的先进产品及解决方案。

关键词： 聚ADP-核糖聚合酶-1(PARP-1)   HaCaT细胞   生物学性状  

摘要： [目的]探讨人皮肤表皮细胞(HaCaT)聚-ADP核糖聚合酶-1基因(PARP-1)过表达后的生物学性状变化。[方法]设试验组、空载体对照组、正常HaCaT对照组,运用真核表达载体使PARP-1基因在HaCaT中过表达,在光学显微镜下观察转染重组子的试验组细胞、转染空质粒的对照组细胞及正常对照组细胞的形态学特征。绘制细胞生长曲线,并运用流式细胞技术分析细胞周期。以苯并芘(BaP)恶性转化的细胞作为阳性对照,采用软琼脂克隆形成试验对细胞的恶性程度进行鉴定。[结果]光镜下试验组细胞与空载体组细胞及正常对照组细胞相比,除体积稍有缩小外,其他形态学特征没有明显变化。3组细胞的生长曲线均呈相似的S型,但转染重组子细胞的生长速度加快。试验组、空载体组及正常细胞组的细胞周期分布为G1期(44.3%、78.1%、76.4%)、G2期(3.6%、13.3%、12.2%)和S期(52.1%、8.6%、11.4%)。正常对照细胞和空载体组分布相近,试验组S期明显增多;试验组细胞未见在双层软琼脂糖中生长出细胞集落,而阳性对照组细胞集落明显。[结论]PARP-1基因过表达后可以改变HaCaT细胞的生长速度,但并不影响细胞的恶性程度。

关键词： 诺贝尔医学奖   免疫学   国际   细胞生物学   免疫系统   研究成果  

摘要： 上一期本刊“热点评析”专栏发表了“免疫系统如何被激活和调控？”（见《中国细胞生物学学报》2011，33（12）：1104-6．），介绍了2011年诺贝尔医学奖的研究成果。

关键词： 生物物理学   生物化学   征稿简则   分子生物学   细胞生物学   蛋白质组学   系统生物学   学术期刊  

摘要： （2011年12月修订）1 征稿范围与栏目设置1.1征稿范围本刊为国内外公开发行的全国性学术期刊,月刊,每月20日发行.征稿的学科范围是生物化学、分子生物学、生物物理学、细胞生物学、神经科学、免疫学,以及基因组学、蛋白质组学、系统生物学等相关学科领域 .

关键词： 癌细胞   葡萄糖含量   能量来源   细胞生物学   研究人员  

摘要： 英国帝国理工学院等机构研究人员在新一期《自然·细胞生物学》杂志上报告说，癌细胞通常依靠分解葡萄糖来获取能量，如果体内的葡萄糖含量不足则转向别的能量来源。

关键词： 成纤维细胞   碱性成纤维细胞生长因子   诱导分化   生物学特性   体外培养  

摘要： 目的：初步探索碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)对体外培养的成人包皮成纤维细胞(fibroblast)CD表型、相关蛋白表达及体外分化的影响。\n 方法：运用酶两步消化法由成人包皮中分离成纤维细胞(fibroblast)，对照组细胞用不含bFGF培养液(含体积分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养液、10mg/ml L-谷氨酰胺、10 mg/ml青霉素和链霉素)培养，实验组细胞用含bFGF培养液(含体积分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养液、10mg/ml L-谷氨酰胺、10mg/ml青霉素和链霉素、5ng/ml bFGF)培养。观察两组细胞贴壁及增殖情况；分别选取两组第3代贴壁细胞进行生物学特性鉴定：应用流式细胞技术(FCM)检测两组细胞表面标志CD105、CD14、CD73、CD34、CD44、CD45及CD90的表达；免疫细胞化学法检测两组第3代贴壁细胞CK19、Oct4、Nanog及波形蛋白的表达情况；并对两组第3代贴壁细胞进行成脂、成骨及成软骨细胞多向诱导分化能力的鉴定。\n 结果：实验组和对照组的原代细胞形态无明显差别，多为纺锤形或多角形，均呈放射状集落样生长。体外培养连续多次传代后，实验组细胞形态无明显差别，以梭形为主，细胞排列规则，呈放射状集落样生长；对照组细胞形态以多角形居多，细胞皱缩、胞核大、边缘毛糙，细胞排列较杂乱。细胞生长曲线显示，两组细胞在培养1-2天生长均较缓慢，实验组细胞从第3天细胞生长增快，到第6天生长开始进入平台期；对照组细胞从第4天细胞生长增快，到第8天生长放缓开始进入平台期。流式细胞仪检测：实验组和对照组细胞均高表达CD73、CD105、CD44、CD90等间充质干细胞表面标志，不表达CD14、CD34、CD45等造血干细胞表面标志；免疫细胞化学法检测显示：两组细胞间充质细胞标志物波形蛋白的表达均为阳性，上皮细胞标志物CK19的表达均为阴性；实验组细胞对多能干细胞标志物Oct4和Nanog呈阳性表达，对照组细胞对多能干细胞标志物Oct4和Nanog呈阴性表达。多向诱导分化实验显示实验组和对照组细胞都可以向成骨细胞、软骨细胞和成脂细胞分化，均具有多向分化潜能。\n 结论：碱性成纤维细胞生长因子可以刺激成纤维细胞分裂增殖，并诱导其表达部分多能干细胞标志物。成纤维细胞体外可以诱导为成骨细胞，成软骨细胞和成脂肪细胞。碱性成纤维细胞生长因子对成纤维细胞的CD表型及体外分化无明显影响。

关键词： 细胞生物学   教学改革   设计性实验  

摘要： 在八年制细胞生物学实验课中开展设计性实验,对传统的教学模式进行改革,充分调动学生的主观能动性,培养学生自主学习和团结协作的能力,激发学生的创新和科研思维能力,得到了较好的教学质量和效果。

关键词： 肝癌   RKIP基因   细胞周期   转染  

摘要： 目的:Raf激酶抑制蛋白(RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族的重要成员,近来的一些研究表明RKIP基因的蛋白产物在人类肝癌组织中表达显著下调。本研究旨在探讨RKIP基因对于肝癌细胞增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等恶性表型的影响,以初步阐明其功能意义。方法:将RKIP基因插入载体pcDNA3.1构建PC-RKIP真核表达载体。脂质体转染肝癌细胞系HepG2建立稳定转染细胞系(Hep-RKIP),而后使用生长曲线法、平板克隆形成实验法、流式细胞仪,细胞迁徙实验法等方法分析稳定表达株相关生物学特性变化。同时设立空载体转染组和空白细胞组为对照。结果:与转染pcDNA3.1空载体及空白HepG2肝癌细胞相比,转染PC-RKIP载体的稳定表达细胞株生长有显著减慢,后两组之间亦无显著差异,平板克隆形成实验结果显示PC-RKIP转染组平均克隆形成率显著低于其它两组(P<0.05),细胞周期检测显示PC-RKIP转染组处于G0/G1期的细胞比例显著高于未处理的HepG2细胞和转染pcDNA3.1空载体的HepG2细胞(P<0.05),而处于G2-M期的细胞比例显著均低于其它两组(P<0.05),其它各期细胞比例均无显著差异。流式细胞仪法检测细胞凋亡结果显示PC-RKIP转染组调亡比例为6.4%左右,显著高于对照组(P<0.05)。细胞迁徙实验结果提示PC-RKIP转染组穿膜率与其它两组相比显著降低(P<0.05)。结论:RKIP基因可能具有抑制细胞生长增殖及分裂作用,同时可影响细胞周期及细胞凋亡,对肝癌细胞侵袭转移能力可能有一定抑制作用,对抑制细胞恶性表型有一定意义。

关键词： 乳腺癌   微环境   成纤维细胞   细胞周期  

摘要： 目的比较乳腺导管不典型增生成纤维细胞(atypical intraductal hyperplasia fibroblasts,AFs)与正常乳腺成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)在生物学特征上的差异。方法采用Ⅰ型胶原酶法分离并培养AFs、NFs和CAFs,免疫细胞荧光化学检测其粘连蛋白(fibronectin,FN)表达以鉴定细胞纯度。比较3种细胞的细胞生长曲线、细胞周期和周期蛋白cyclin D1、p21waf1及p53的变化。结果获得并鉴定了NFs、AFs、CAFs;其生长速度依次增加(P<0.05),细胞周期S期百分比(8.24±2.47)、(16.94±4.77)、(33.31±7.90)依次增大(P<0.05);与NFs相比,AFs周期蛋白cyclin D1表达增加(P<0.05),p21waf1和p53蛋白表达降低(P<0.05);与CAFs相比,AFs的周期蛋白cyclin D1没有升高(P<0.05),p21waf1蛋白和p53蛋白表达更强(P<0.05)。结论 AFs相对于NFs和CAFs,细胞生长增殖具有特异性,这种变化提示乳腺肿瘤的癌前病变阶段AFs可能是NFs逐步向CAFs转变的过渡阶段。