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关键词： microRNA   HeLa细胞   凋亡   周期   增殖  

摘要： 目的:探讨miR-181a和miR-181b表达改变对HeLa细胞生物学特性的影响。方法:收集18例宫颈癌手术标本及18例正常宫颈组织标本,提取总RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181a和miR-181b的表达情况。选取人宫颈癌细胞系HeLa细胞为研究对象,转染miR-181a和miR-181b成熟体。应用实时定量PCR技术检测转染后HeLa细胞中miR-181a和miR-181b的表达情况;流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化情况;CCK-8实验及细胞生长曲线检测细胞增殖能力。结果:miR-181a和miR-181b在宫颈癌组织中低表达。转染microRNA成熟体使细胞中miR-181a和miR-181b表达增高;HeLa细胞凋亡增加,细胞增殖能力下降,周期阻滞。结论:上调miR-181a和miR-181b的表达能够促进HeLa细胞凋亡,抑制细胞增殖,导致细胞G0/G1期阻滞。miR-181a和miR-181b可能为宫颈癌临床靶向治疗的靶点选择和药物开发提供理论基础。

关键词： CHD5   基因   miR-shRNA   RNAi   技术  

摘要： 目的:研究人类肿瘤相关基因CHD5基因miR-shRNA慢病毒对结直肠癌Lovo细胞的影响。方法:利用软件设计对CHD5基因干扰有效的序列,合成靶序列,退火形成双链DNA,酶切后与载体相连接。将重组慢病毒载体pPRIME-TET-GFP-CHD5与慢病毒包装质粒pCMV-VSV-G,pRSV-Rev,pMDLg-pRRE共转染293FT细胞,将包装重组慢病毒感染人类结直肠癌Lovo细胞。通过荧光定量PCR和Western blot验证CHD5基因在细胞中的表达情况,应用MTT检测CHD5低表达对Lovo细胞增殖的影响。结果:成功构建pPRIME-TET-GFP-CHD5重组质粒,经酶切及序列测定正确,包装的病毒滴度为3.1×106TU/ml。用制备的病毒上清感染Lovo细胞后,荧光定量PCR和Western blot分析结果显示该慢病毒可分别在转录和蛋白质水平上抑制Lovo细胞CHD5基因的表达,并使得Lovo细胞增殖失控。结论:成功构建CHD5慢病毒表达载体,表达的慢病毒可有效的感染Lovo细胞,提高Lovo细胞的增殖能力。

关键词： 骨髓间充质干细胞   慢病毒   细胞增殖   细胞分化  

摘要： 目的探讨慢病毒介导胶质源性神经营养因子(GDNF)对食蟹猴骨髓间充质干细胞(cMSCs)生物学特性的影响。方法无菌条件下取食蟹猴骨髓,梯度密度离心法分离培养cMSCs,以含有GDNF基因的慢病毒感染cMSCs。利用ELISA、Real-time PCR、流式细胞术(FCM)、BrdU掺入法等实验方法,观察慢病毒感染后GDNF基因的表达,以及慢病毒感染前后的cMSCs的表面抗原表达、体外增殖和分化能力。结果感染慢病毒后,体外培养的cMSCs高表达GDNF。慢病毒感染后cMSCs的细胞形态无明显改变,细胞表面标志CD34、CD90和Stro-1阳性细胞比例增高。BrdU掺入结果显示,与对照组(0.61±0.11)比较,GDNF慢病毒感染组(0.50±0.13)明显降低(P<0.05)。但GDNF慢病毒感染并没有影响cMSCs体外脂肪诱导分化能力。结论慢病毒感染影响cMSCs的表面抗原表达和体外增殖能力,但对cMSCs体外脂肪分化能力无影响。

关键词： 急性肺损伤   内皮祖细胞   骨髓   生物学功能  

摘要： 目的观察急性肺损伤患者骨髓内皮祖细胞(EPCs)生物学功能的变化。方法选择急性肺损伤患者和正常对照各20例,采用密度梯度离心法从骨髓获取单个核细胞,接种在细胞培养板内,培养7d后对贴壁细胞进行细胞鉴定和部分生物学功能检测。倒置相差显微镜下观察生长情况,采用噻唑蓝比色试验(MTT法)检测EPCs增殖能力,观察EPCs黏附能力、迁移能力和体外血管生成能力。结果急性肺损伤患者骨髓EPCs黏附细胞数增多(P<0.05),EPCs增殖能力、迁移能力、体外血管生成能力均较正常对照组增强(P<0.05)。结论急性肺损伤患者骨髓EPCs的增殖、黏附、迁移和体外血管生成能力增强。骨髓EPCs参与了急性肺损伤发生、发展,其生物学功能可作为一个生物学标志。

关键词： poly(I:C)   BGC-823细胞   TLR3   NK细胞  

摘要： 目的:poly(I:C)是双链RNA(dsRNA)的结构类似物,可被模式识别受体TLR3、RLRs识别,具有抗肿瘤作用。本文旨在研究poly(I:C)对胃癌BGC-823细胞生物学特征的影响并进行机制探讨。方法:以胃腺癌细胞系BGC-823细胞为模型,采用半定量RT-PCR检测TLR1-TLR10 mRNA基础表达水平,然后用MTT法、CCK-8法、EdU掺入法检测poly(I:C)对BGC-823细胞的增殖能力的影响;MTT法、CFSE-7-AAD法评价NK细胞对poly(I:C)处理后的BGC-823细胞杀伤能力的影响;实时定量PCR法检测细胞因子mRNA水平的变化;流式细胞术分析BGC-823细胞中TLR3、Cyclin D1表达水平以及NKL细胞中CD107a、Perforin和TNF-α的表达水平。结果:TLR3在BGC-823细胞有明显表达。poly(I:C)可抑制BGC-823细胞的增殖,这一过程的主要分子特征是DNA合成减弱、Cyclin D1的表达水平降低、炎症因子的mRNA表达水平下降;同时NK细胞对于poly(I:C)处理后的BGC-823细胞的杀伤功能增强,NK细胞表达CD107a、Perforin、TNF-α的能力提高。结论:poly(I:C)可直接抑制肿瘤的生长并提高BGC-823细胞对NK细胞杀伤的敏感性,为设计和利用基于TLR的抗肿瘤治疗药物提供有益的启示。

关键词： 三阴性乳腺癌   Notch-1   核因子-KB   RNA干扰  

摘要： 目的观察Notch-1信号通路在三阴性乳腺癌（TNBC）细胞MDA—MB-231增殖中的作用，并探讨其分子机制。方法运用小干扰RNA（siRNA）转染技术，下调MDA-MB-231细胞中Notch-1mRNA表达，应用噻唑蓝（MTr）比色法检测干扰后5d的细胞增殖，并用流式细胞术检测干扰48h后细胞增殖、凋亡及细胞周期的变化。另外应用实时定量聚合酶链反应（PCR）和Westernblot法检测siRNA转染前后Notch-1、细胞周期素D1（CyclinD1）、B细胞淋巴瘤／白血病-2基因（bcl-2）、bcl-XLmRNA变化及细胞核中核因子（NF）-KB蛋白的变化。结果Notch-1siRNA可有效降低细胞中Notch-1mRNA表达；转染后细胞增殖能力明显受到抑制，第5天的抑制率达到44．7％，细胞凋亡率由3．67％增加到13．25％，细胞周期G’期由6．27％增加到14．28％。进一步研究结果显示siRNA介导的Notch-1下调，可使细胞核内NF—KB蛋白表达降低，细胞中CyclinD1、bcl-2、bcl—XLmRNA表达下调。结论Notch-1信号通路在TNBC中发挥重要作用，siRNA下调Notch-1可有效抑制MDA-MB-231细胞增殖，Notch-1是TNBC潜在的新治疗靶点。

关键词： 菌物学   征稿简则   学报   系统分类学   中国科学院   细胞生物学   区系地理学   学术期刊  

摘要： 1刊物简介 《菌物学报》（曾用名《真菌学报》、《菌物系统》）1982年创刊，是中国科学院主管的菌物学学术期刊，报道菌物（真菌、粘菌、卵菌等）学研究领域最新成果。主要刊登菌物系统分类学、菌物分子与细胞生物学、菌物区系地理学、

关键词： 鼻咽肿瘤   耐药性   黏附   Ki-67   PECAM-1  

摘要： 目的:分别以照射前的人鼻咽鳞癌CNE-1细胞和高剂量X射线(50Gy)照射后的CNE-1细胞为研究对象,探讨高剂量X射线照射后的CNE-1细胞的某些生物学特性的变化。方法:采用细胞毒实验(SRB法)检测两组细胞在化疗药物作用下的IC50值,RT-PCR测两组细胞MDR-1基因,共聚焦显微镜测P-gp蛋白,对比两组细胞的耐药性;MTT法测定两组细胞生长曲线,共聚焦显微镜检测Ki-67蛋白,比较两组细胞的生长增殖能力;采用细胞黏附实验比较两组细胞的黏附性,RT-PCR检测两组细胞PECAM-1基因的表达,探讨PECAM-1和细胞黏附的相关性。结果:照射后CNE-1细胞在多柔比星作用下的IC50值是照射前细胞的1.8倍(P=0.004),在紫杉醇作用下的IC50值是照射前细胞的5.3倍(P=0.003),两组细胞MDR-1基因半定量值分别为0.17±0.01和0.34±0.04(P=0.002),照射后细胞P-gp蛋白高表达于照射前细胞;在对数生长期时,照射后细胞生长快于照射前细胞,且其Ki-67蛋白表达高于照射前细胞;照射后细胞在各时间点的黏附率都明显高于照射前细胞,两组数值比较差异有统计学意义,P<0.05;照射前后两组细胞PECAM-1基因的半定量值分别为0.40±0.02和0.51±0.01,P=0.002。结论:高剂量X射线照射后的CNE-1细胞产生耐药性;生长增殖能力及黏附特性高于照射前细胞,PECAM-1基因也高表达,Ki-67及PECAM-1均可能参与耐药。

关键词： MACHADO-JOSEPH-DISEASE   POLYGLUTAMINE-INDUCED NEURODEGENERATION   NEURONAL INTRANUCLEAR INCLUSIONS   TRANSGENIC MOUSE MODEL   TATA-BINDING PROTEIN   NUCLEAR-LOCALIZATION   CALCIUM-CHANNEL   ANDROGEN RECEPTOR   MEDIATES NEURODEGENERATION   CAENORHABDITIS-ELEGANS  

摘要： Ataxia is a neurological disorder characterized by loss of control of body movements. Spinocerebellar ataxia (SCA), previously known as autosomal dominant cerebellar ataxia, is a biologically robust group of close to 30 progressive neurodegenerative diseases. Six SCAs, including the more prevalent SCA1, SCA2, SCA3, and SCA6 along with SCA7 and SCA17 are caused by expansion of a CAG repeat that encodes a polyglutamine tract in the affected protein. How the mutated proteins in these polyglutamine SCAs cause disease is highly debated. Recent work suggests that the mutated protein contributes to pathogenesis within the context of its "normal" cellular function. Thus, understanding the cellular function of these proteins could aid in the development of therapeutics.