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关键词： 普萘洛尔   食管鳞癌   细胞培养   增殖   迁移   周期   凋亡   自噬   裸鼠  

摘要： 目的:探索普萘洛尔对食管鳞癌细胞皮下成瘤和食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、迁移、周期、凋亡、自噬的影响及其可能的分子机制。方法:MTT(噻唑蓝)检测细胞增殖:常规培养食管鳞癌Eca109、KYSE-450、TE-1细胞,设置PBS组(不加Propranolol),加药组(40、60、80、100μmol/L),每组5个复孔,分别处理0、24、48、72 h后,每孔加入MTT 10μl(5 mg/ml),490 nm处测定吸光度值。Transwell检测迁移:常规培养食管鳞癌Eca109、KYSE-450、TE-1细胞,设置PBS组(不加Propranolol),加药组(40、60μmol/L),每组2个复孔,40 h后拍照,实验重复三次后统计学分析。流式细胞术检测细胞周期及凋亡:常规培养食管鳞癌Eca109、KYSE-450、TE-1细胞,设置PBS组(不加Propranolol),加药组(80μmol/L),固定、染色,检测488 nm处荧光。Western blot检测蛋白表达:常规培养食管鳞癌Eca109、KYSE-450细胞,设置PBS组(不加Propranolol),加药组(60、80μmol/L),凝胶电泳,湿法转膜,ECL显影,实验重复三次后统计学分析。裸鼠皮下成瘤实验:10只裸鼠,设置PBS组(不加Propranolol)和Propranolol组(加药组),每组5只,均接种Eca109细胞5×10^(6)cells/100μl于右侧腋下,加药组隔日灌胃,每次0.4 ml(6 mg/kg),期间隔日测量肿瘤大小,持续3周。20 d后处死裸鼠取瘤体组织。结果:结果显示Propranolol可抑制Eca109、KYSE-450、TE-1细胞增殖,48h IC_(50)均为70μmol/L;抑制Eca109、KYSE-450、TE-1细胞迁移,且具浓度依赖性(P<0.05);阻滞Eca109细胞周期于G2/M期,阻滞KYSE-450细胞和TE-1细胞周期于G0/G1期,并促进三种细胞凋亡(P均<0.05);细胞免疫荧光结果显示Propranolol处理TE-1细胞12 h、24 h、36 h后LC3荧光强度增加(P均<0.05);Western blot结果显示与PBS组比较,加药组p-mTOR、p-Akt、cyclin D1蛋白表达量下调、cleaved caspase 9蛋白水平上调(均P<0.05);裸鼠皮下成瘤结果显示对照组瘤重(0.91±0.05)g,实验组瘤重(0.65±0.12)g,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:普萘洛尔抑制ESCC细胞增殖、迁移、周期,促进其凋亡和自噬,并抑制裸鼠皮下肿瘤生长,其机制可能与其抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

关键词： 细胞生物学   流式细胞术   实验教学   教学改革  

摘要： 流式细胞术是目前生命科学、医药研究以及临床诊断中最常用的技术手段之一。为了让实验教学紧跟科学研究及临床诊断的实际需求,同时增加学生在实验教学过程中的思考性和参与度,课题组将流式细胞术分析小鼠脾脏原代分离的淋巴细胞引入细胞生物学实验教学,实验中设置大量开放性思考问题,涵盖分离细胞的方法、抗体的选择、实验结果的分析等,尽量在各个环节给予学生独立思考的空间。经过教学检验,学生的知识得到了强化,技能得到了提升,科研兴趣得以调动。后续实习证明,实验教学对实际应用有极大帮助。

关键词： 分子免疫学   DNA双螺旋结构   生化遗传学   细胞生物学   生命科学   分子生物学   分子遗传学   卡文迪许实验室  

摘要： 作为20世纪的伟大发现之一,DNA双螺旋结构的确立成为了分子生物学诞生的标志。从此之后,分子免疫学、分子遗传学、细胞生物学等分支学科如雨后春笋般诞生,从而加速了生命科学的发展步伐。在当时,研究分子生物学主要分为三个学派:结构学派、信息学派和生化遗传学派。

关键词： 肿瘤流行病学   肿瘤病理学   顾绥岳   细胞生物学   杂志简介   胆胰   免疫学   《肿瘤》  

摘要： 《肿瘤》创刊于1981年,由我国肿瘤病理学泰斗顾绥岳教授发起创办,并担任第一任主编。此后,我国著名的免疫学与细胞生物学专家余新生教授、国际著名的肿瘤流行病学专家高玉堂教授,先后担任杂志主编。2021年12月起,由我国著名的胆胰外科专家刘颖斌教授担任杂志主编。

关键词： 血清/糖皮质激素调节激酶1   SU-DHL-4细胞株   基因敲除   凋亡   增殖   细胞周期   迁移  

摘要： 目的构建血清/糖皮质激素调节激酶1(SGK1)基因敲除的人弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)SU-DHL-4/SGK1-Ko细胞株,分析SGK1基因敲除对SU-DHL-4细胞增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。方法采用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)SU-DHL-4细胞株,作为SGK1-Ko组,另外设置阴性对照组(sgRNA-NC组),经嘌呤霉素筛选出稳定敲除株,经测序证实,通过RT-PCR及蛋白质印迹法检测基因敲除株的SGK1表达;细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力。2组独立数据在不同时间点的比较采用2因素方差分析,2组间差异比较采用t检验。结果在荧光显微镜下可观察到SGK1-Ko组GFP稳定表达。SGK1-Ko组RT-PCR产物电泳显示无条带。蛋白质印迹法结果显示,SGK1-Ko组细胞无SGK1蛋白表达。CCK8法结果显示,在细胞培养24、48、72和96h后,sgRNA-NC组细胞光密度D值分别为0.256±0.002、0.566±0.005、1.246±0.016和1.348±0.021,SGK1-Ko组分别为0.180±0.003、0.321±0.004、0.847±0.056和1.043±0.010,SGK1-Ko组细胞增殖能力低于sgRNA-NC组,F时间=4404.099,P时间<0.001;F组别=439.184,P组别<0.001;F组别×时间=316.874,P组别×时间=0.003。流式细胞术检测结果显示,SGK1-Ko组凋亡率为(10.057±0.350)%,高于sgRNA-NC组的(4.310±0.235)%,t=19.272,P<0.001。SGK1-Ko组处于G0/G1期的细胞比例为(87.020±4.405)%,高于sgRNA-NC组的(70.810±2.707)%,t=4.434,P=0.011;SGK1-Ko组处于S期的细胞比例为(9.343±2.083)%,低于sgRNA-NC组的(27.127±1.343)%,t=10.146,P=0.001。Transwell迁移实验结果显示,SGK1-Ko组细胞24、48h迁移水平分别为0.117±0.037和0.138±0.046,sgRNA-NC组为0.121±0.033和0.127±0.045,t值分别为0.107、0.238,P值分别为0.920、0.823。结论成功构建稳定敲除SGK1基因的SU-DHL-4/SGK1-Ko细胞株,SGK1敲除可抑制SU-DHL-4细胞增殖、诱导凋亡和阻滞细胞周期,对细胞迁移无影响。

关键词： 细胞生物学   阴阳理论   细胞代谢  

摘要： 细胞生物学(cell biology)旧称细胞学(cytology),是研究细胞的形态结构、生理机能、细胞周期、细胞分裂、细胞自噬、细胞凋亡,以及各种胞器及讯息传递路径的学科。中医的“阴阳”是一门哲学术语,是一种方法论。中医能治好病决非偶然,中医治病的科学性,就在于通过中药的“四气五味”“升降浮沉”“活血化瘀”来净化人体的血液,让人体的组织细胞浸浴在一个良好的生态环境中,与周边进行物质和能量的交换,吸收营养,排出废物,从而让组织细胞逐步地调整和修复自身的功能及时空代谢,使疾病渐渐消失。中医“阴阳”的核心理论是细胞代谢这一命题成立,那么中医就具有了一个完整的理论体系。

关键词： 结肠肿瘤   生长停滞敏感基因5   miR-21   上皮间质转化   肿瘤干细胞  

摘要： 目的探讨抑制长链非编码RNA生长停滞敏感基因5(GAS5)对结肠癌细胞生物学特性的影响及其机制。方法取结肠癌HCT116细胞,分为空白对照组(加入磷酸盐缓冲液)、阴性对照组(转染si-GAS5NC)、si-GAS5组(转染si-GAS5)和si-GAS5+miR-21抑制剂组(转染si-GAS5联合miR-21抑制剂反义寡核苷酸has-miR-21-5p)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染48 h后各组细胞中GAS5和miR-21的表达水平,荧光素酶基因报告实验验证GAS5与miRNA-21的结合位点,细胞计数试剂盒8法检测各组细胞的增殖情况,克隆形成实验观察细胞的克隆形成能力,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白(Snail、N-cadherin、vimentin、E-cadherin)、干细胞相关因子(Sox2、CD44、Oct2)和磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)/Akt信号通路相关蛋白的表达情况。结果转染后48 h,空白对照组、阴性对照组和si-GAS5组HCT-116细胞miR-21表达水平分别为1.00±0.10、1.00±0.10和1.80±0.20,吸光度分别为0.51±0.02、0.50±0.01和0.65±0.01,细胞克隆形成数分别为(90±4)个、(91±5)个和(200±8)个,侵袭细胞数分别为(118±3)个、(119±3)个和(150±4)个,迁移细胞数分别为(110±2)个、(108±2)个和(127±2)个,G1期细胞比例分别为(49.3±2.1)%、(50.1±2.0)%和(42.2±1.1)%,S期细胞比例分别为(19.2±1.2)%、(20.2±1.1)%和(28.3±2.2)%,细胞凋亡率分别为(14.4±2.2)%、(14.5±2.1)%和(7.2±1.3)%,表明GAS5下调后HCT-116细胞miR-21表达水平升高,增殖、侵袭和迁移能力增强,G1期细胞减少,S期细胞增加,细胞凋亡率降低(均P<0.05)。GAS5下调后,HCT-116细胞中Snail、N-cadherin、vimentin、Sox2、CD44、Oct2和p-Akt的表达水平升高(均P<0.05),E-cadherin和PTEN的表达水平降低(均P<0.05)。抑制miR-21后,可以逆转GAS5下调引起的PTEN/Akt信号通路相关蛋白表达水平的变化(均P<0.05)。结论GAS5可作为miR-21的竞争内源性RNA,下调GAS5可通过激活miR-21/PTEN/Akt信号通路,促进EMT和肿瘤细胞干性的获得,从而促进结肠癌的发生发展。

关键词： 一流课程   课程改革   细胞生物学   铸魂育人  

摘要： 商洛学院生物技术省级一流专业所开设的细胞生物学课程作为陕西省线下一流本科课程,一直是学院重点建设的课程。一流本科课程建设对新时代高校课程建设提出了更高的要求,在一流课程建设背景下,全面推荐铸魂育人协同体系的构建需要将专业教育和德育教育有机融合,提高课程实效,做到育人与育才相统一,为我校一流专业与一流课程的建设提供新思路。

关键词： 细胞生物学   半开放半设计性实验   实验教学   教学模式  

摘要： 细胞生物学实验是实践性教学环节之一,是教学实验课程,在培养生物科学专业人才中具有重要的地位和作用。为激发学生对实验课的学习热情,培养学生善于动脑的思维能力和勇于创新的创造力,我们开展了“半开放性实验”探索。本文对“半开放性实验”在广东海洋大学水产学院生物科学专业细胞生物学实验教学中的实施过程及效果进行了阐述,为细胞生物学实验教学改革提供重要参考。

关键词： 农产品有效供给   战略性资源   作物品质   生物基因   农作物种质资源   国家粮食安全   细胞生物学   微生物资源  

摘要： 粮安天下,种铸基石。种质资源是农业的“芯片”,是保障国家粮食安全和重要农产品有效供给的战略性资源。广东省农业科学院农业生物基因研究中心(简称“基因中心”)一直致力于开展农作物种质资源(种子)安全保存机理及关键技术、作物品质形成机理与调控、多组学与基因编辑技术、微生物资源挖掘与创新利用、病害防控技术基础等方面研究,并对外提供仪器共享使用、多组学与细胞生物学技术服务,提供系统的动植物、农作物种质种子和微生物的鉴评与基因检测分析等服务。