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关键词： 视网膜母细胞瘤   长链非编码RNA   核富集转录体1   细胞增殖   细胞生物学特性  

摘要： 目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)核富集转录体1(nuclera-enriched autosomaltranscript,NEAT1)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)患儿血清中表达,以及下调Rb细胞Y79中NEAT1对细胞生物学功能的影响。方法以2015年3月~2021年3月鄂东医疗集团黄石市中心医院诊疗的83例Rb患儿为研究对象,同期,在儿童保健中心选取健康儿童50例(对照组),实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测血清中NEAT1表达,分析Rb患儿和对照组血清NEAT1表达差异,以及不同临床指标Rb患者血清中NEAT1表达差异。培养Y79细胞并分为si-NEAT1组(转染NEAT1的干扰序列)、si-NC组(转染对照序列)和Ctl组(仅加入转染试剂),分别使用qRT-PCR,MTT,流式细胞术和Transwell检测NEAT1表达、细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况。结果Rb患儿血清中NEAT1表达量(1.43±0.28)高于对照组(1.01±0.21),差异具有统计学意义(t=9.116,P<0.001);国际视网膜母细胞瘤分期(Intraocular International Retinoblastoma classificaton,IIRC)CDE期、低分化、视神经浸润和淋巴结转移的Rb患儿血清中NEAT1表达量明显高于AB期、中高分化、未发生视神经浸润和淋巴结转移的Rb患儿,差异具有统计学意义(t=2.190~3.693,均P<0.05);血清中NEAT1表达诊断Rb曲线下面积为0.882(95%CI:0.826~0.937),当NEAT1表达量取1.20时,灵敏度和特异度分别为80.00%和79.52%;相比于si-NC组(1.03±0.09)和Ctl组(1.02±0.15),si-NEAT1组细胞中NEAT1表达(0.35±0.06)明显降低,差异具有统计学意义(t=14.829,9.994,均P<0.001);si-NEAT1组24,48,72和96 h时吸光度(A值)明显低于si-NC组和Ctl组(tsi-NC=2.796~4.362,tCtl=2.641~5.555,均P<0.05),而细胞凋亡率相比于si-NC组和Ctl组明显升高,差异具有统计学意义(t=4.999,3.915,均P<0.05);与si-NC组和Ctl组比较,si-NEAT1组迁移细胞数(116.50±9.35 vs 132.00±7.32,134.00±7.95)和侵袭细胞数(96.33±8.94 vs 117.67±12.39,119.17±10.05)均降低,差异具有统计学意义(tsi-NC=3.196,3.421,tCtl=3.492,4.159,均P<0.05)。结论Rb患儿血清中NEAT1表达量升高,对Rb患儿具有一定的诊断价值,沉默Y79细胞中NEAT1表达可减少Rb细胞增殖、加速细胞凋亡,同时抑制细胞迁移和侵袭。

关键词： 卵巢肿瘤   细胞增殖   促红细胞生成素产生肝细胞受体A2   细胞迁移侵袭  

摘要： 目的探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EphA2)基因沉默对人卵巢癌HeyA8-MDR细胞生长、迁移和侵袭的影响。方法利用质粒和脂质体介导转染法,经稳定筛选后,采用Western blot检测细胞EphA2蛋白表达情况,应用CCK-8和Transwell小室侵袭实验,观察EphA2基因沉默对卵巢癌HeyA8-MDR细胞生物学性状的影响。采用SPSS21.0软件进行统计分析。结果与HeyA8-MDR(阴性对照组)、HeyA8-MDR+空白对照组进行比较,HeyA8-MDR+实验组EphA2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),细胞增殖能力、迁移和侵袭能力均受到抑制(P<0.05)。结论EphA2基因沉默可抑制卵巢癌HeyA8-MDR细胞生长、迁移和侵袭,为卵巢癌的治疗提供了新思路。

关键词： 依托咪酯   结直肠癌   LncRNA FEZF1-AS1   miR-363-3p   凋亡  

摘要： 目的探讨不同浓度依托咪酯对结直肠癌细胞生物学功能的影响,并分析其潜在机制。方法使用0、4、16、64μmol/L依托咪酯分别处理结直肠癌细胞(LS513细胞)48 h,测定细胞存活率、凋亡率、迁移侵袭能力,并检测Bcl-2、BAX、Cleaved caspase-3及LncRNA FEZF1-AS1和miR-363-3p的表达水平。培养LS513细胞,分为三组:空白组、依托咪酯64μmol/L组、pcDNA-FEZF1-AS1组。比较三组细胞生物学功能。结果4、16、64μmol/L依托咪酯处理LS513细胞后,细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数均降低,凋亡率增加,且凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.05);过表达LncRNA FEZF1-AS1后,LS513细胞LncRNA FEZF1-AS1表达升高,miR-363-3p表达降低,且过表达LncRNA FEZF1-AS1后LS513细胞存活率、迁移细胞数及侵袭细胞数升高,凋亡率降低(P<0.05)。结论依托咪酯可抑制结直肠癌细胞迁移、侵袭,并促进其凋亡,且可能通过调控LncRNA FEZF1-AS1/miR-363-3p信号轴发挥作用。

关键词： 膜片钳技术   中医药文化   仪器管理   玻璃微电极   公共平台   生物物理化学   神经科学   细胞生物学  

摘要： 中医药是中华文明的瑰宝,是世界人民的宝贵财富,传承和发扬中医药文化是每位中医药人的光荣使命。近年来中医药基础研究越来越得到重视,膜片钳技术作为新兴工具出现了。1976年,德国马普生物物理化学研究所Erwin Neher和Bert Sakmann合作发明了膜片钳技术,推动了神经科学、生理学、细胞生物学等学科的发展。膜片钳技术是利用玻璃微电极与细胞膜表面形成紧密接触,经过放大器等系统记录电压或者电流信号的实验方法[1],其本质是研究细胞膜上离子通道的工具。

关键词： 流式细胞仪   大型仪器设备   细胞生物学   本科实验教学  

摘要： 在流式细胞术检测细胞凋亡实验中,借助流式细胞仪平台,从教学模式、实验内容、仪器准备、教学素材等方面对细胞生物学实验课进行改革,取得了较好的教学效果。这种仪器平台与教学团队共同探索教学改革的模式,充分发挥大型仪器设备在人才培养方面的潜能,可为其他高校仪器平台建设提供参考。

关键词： 丹酚酸B   巨噬细胞   衰老   小鼠   PI3K/AKT/mTOR信号通路   炎症因子  

摘要： 目的:分析丹酚酸B通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/苏氨酸蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶标(mTOR)信号通路对衰老巨噬细胞生物学功能的影响。方法:以小鼠骨髓巨噬细胞为研究对象,利用3%过氧化氢溶液建立巨噬细胞衰老模型。实验分为对照组、衰老组和丹酚酸B组,对照组为未衰老的巨噬细胞,衰老组为衰老的巨噬细胞,丹酚酸B组为经丹酚酸B处理衰老的巨噬细胞,干预浓度分别为10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活性,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测炎症因子表达,免疫双荧光法检测衰老巨噬细胞向M1和M2型极化情况,蛋白质印迹法(WB)检测PI3K、AKT、mTOR表达。结果:从0 h至72 h,各组检测到的吸光度(OD)值逐渐增加。在72 h时,衰老组巨噬细胞增殖活力低于对照组(P<0.05)。与衰老组比较,10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L丹酚酸B组巨噬细胞增殖活力均更高(P<0.05)。100μmol/L、50μmol/L丹酚酸B组巨噬细胞增殖活力均高于10μmol/L丹酚酸B组(P<0.05)。100μmol/L丹酚酸B组巨噬细胞增殖活力虽低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,衰老组和100μmol/L丹酚酸B组白细胞介素(IL)-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)相对表达量均上升(P<0.05),IL-4、IL-10、精细氨酸1(Arg1)相对表达量均下降(P<0.05)。与衰老组比较,100μmol/L丹酚酸B组IL-1β、iNOS、TNF-α相对表达量均下降(P<0.05),IL-4、IL-10、Arg1相对表达量均上升(P<0.05)。与衰老组比较,100μmol/L丹酚酸B组CD206表达上调,CD86表达下调。与对照组比较,衰老组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达量均上升(P<0.05)。与衰老组比较,100μmol/L丹酚酸B组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达量均下降(P<0.05)。100μmol/L丹酚酸B组中p-PI3K表达量高于对照组(P<0.05),而p-AKT、p-mTOR表达量与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:丹酚酸B可通过PI3K/AKT/mTOR信号通路增强衰老巨噬细胞增殖活力并促进其向M2型极化。

关键词： 科研思维   细胞生物学实验   教学改革  

摘要： 细胞生物学实验是生命科学、医学相关专业的重要实验课程。当前,课程存在内容陈旧、教学模式单一等问题,不利于学生批判精神和创新思维的培养。我们以培养学生科研思维为导向,从实验设计、教学过程、课程思政等方面进行教学改革,帮助学生掌握分析问题、设计实验、归纳总结的科研方法,树立团队协作、务实诚信的科研精神。

关键词： 自噬   自噬流   细胞生物学   综合实验  

摘要： 将国际前沿理论和技术拆解和提炼及时补充到实验教学中,是提高实验教学水平和人才培养质量的重要途径之一。该研究以科研成果为基础设计了“自噬流的诱导和检测”综合性实验,包含细胞传代培养、细胞转染、自噬诱导与观察3个部分,形成系统性、综合性和探究性的模块化实验教学内容,通过细胞培养、转染技术在细胞中表达双荧光标记自噬体标志蛋白,经饥饿诱导细胞,在荧光显微镜下观察自噬体和自噬流变化。在本科生实验教学中的实践结果表明,该实验有助于培养学生科研思维和创新意识、提升学生分析问题和解决问题的能力。

关键词： 科学技术协会   组织胚胎学   人体解剖学   个案报告   研究论著   神经生物学   医学影像   细胞生物学  

摘要： 《四川解剖学杂志》(季刊)创刊于1980年,由四川省科学技术协会主管,四川省解剖学会主办,全国公开发行.本刊登载人体解剖学、组织胚胎学、人类学、神经生物学、细胞生物学、分子生物学、医学影像以及与基础医学相关的临床医学各学科的研究论著,并辟有"教学研究""技术与方法""综述""解剖变异""个案报告"等栏目.欢迎全国各地基础医学和临床医学工作者踊跃投稿.

关键词： Wnt/β-catenin信号通路   β-catenin   胰腺癌原代细胞   胰腺癌干细胞  

摘要： 目的分析β-catenin蛋白在胰腺癌干细胞恶性生物学特性维持过程中的作用及其机制。方法分离培养原代胰腺癌细胞,将胰腺癌细胞分为NC组和ADβ-catenin组,NC组细胞转染阴性空载病毒,ADβ-catenin组细胞转染β-catenin过表达慢病毒载体。采用流式细胞仪分析细胞株肿瘤干细胞表面标志物CD24、CD44及ESA的表达情况;分选出CD24^(+)CD44^(+)ESA^(+)细胞并扩大培养,通过检测分选出细胞的成球能力、克隆形成能力、增殖能力、侵袭迁移能力、细胞周期及凋亡情况;分析β-catenin过表达对胰腺癌干细胞生物学特性的影响。结果ADβ-catenin组细胞中β-catenin mRNA和蛋白的相对表达量显著高于NC组(P=0.016,P=0.015)。流式细胞仪分析结果显示,ADβ-catenin组细胞中CD24^(+)及CD24^(+)CD44^(+)ESA^(+)的细胞率显著高于NC组(P<0.05)。与NC组比较,ADβ-catenin组胰腺癌干细胞克隆形成能力、成球能力、侵袭与迁移细胞数均显著增加(P<0.05)。ADβ-catenin组细胞在24 h、48 h及72 h的光密度(OD)值均显著高于NC组(P<0.05)。与NC组相比,ADβ-catenin组G_(0)/G_(1)期细胞比例显著减少(P<0.05),S期细胞比例增高(P<0.05)。ADβ-catenin组的细胞凋亡率显著低于NC组(P<0.05)。结论β-catenin通过提高胰腺癌原代细胞中CD24^(+)CD44^(+)ESA^(+)的细胞率,促进胰腺癌干细胞成球能力,增强细胞增殖、侵袭与迁移能力,抑制细胞的凋亡,从而维持胰腺癌干细胞的恶性生物学特性。