关键词:
脂肪干细胞
高尔基磷蛋白3
成脂分化
细胞增殖
摘要:
目的探讨高尔基磷蛋白3(GOLPH3)对人脂肪来源间充质干细胞(ADSC)增殖、迁移及成脂分化的影响。方法分离培养人原代ADSC细胞。采用慢病毒载体在ADSC中过表达GOLPH3(GOLPH3过表达组,GPLPH3-over),以空载体慢病毒作为对照(NC-over)。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、Transwell细胞迁移实验分别检测两组细胞的增殖和迁移能力,并经14 d成脂分化诱导后行油红O染色,观察脂滴数目。蛋白质印迹法(Western blot)检测两组细胞中特定成脂标志物过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)和增强子结合蛋白α(C/EBPα)蛋白水平的表达。组间比较采用t检验。结果成功获得稳定过表达GOPLH3的ADSC。CCK-8结果显示,GOLPH3-over组增殖能力强于NC-over组(0.579±0.142比0.466±0.081,t=3.127,P<0.05)。Transwell细胞迁移实验显示,GOLPH3-over组迁移能力强于NC-over组(39.000±2.646比25.000±3.000,t=5.563,P<0.05)。油红O染色结果表明,GOLPH3-over组脂滴多于NC-over组(136919±12748比67837±2665,t=9.187,P<0.05)。Western blot结果表明,GOLPH3-over组PPAR-γ(1.061±0.175比0.521±0.082,t=4.904,P<0.05)和C/EBPα(3.120±0.171比2.196±0.174,t=6.548,P<0.05)蛋白表达水平高于NC-over组高,差异均有统计学意义。结论过表达GOLPH3可以促进体外ADSC的增殖、迁移及其向脂肪细胞的分化。