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关键词： 重点实验室   科技创新平台   胰腺疾病   上海市科委   细胞生物学   实验动物   组织形态学   肠道微生物  

摘要： 实验室概况。上海市胰腺疾病重点实验室于2005年12月成立,并于2007年12月通过专家验收,是上海市科委确立的市级重点实验室及公共开放科技创新平台,依托于上海市第一人民医院临床转化研究院及上海交通大学医学院胰腺疾病研究所。上海市胰腺疾病重点实验室现有建筑面积1000m^(2),依托单位已先后投入2000余万元进行基础设备设施建设,现建有分子生物学、细胞生物学、肠道微生物学、组织形态学、生物样本库、实验动物等基础研究平台,可常规开展胰腺疾病的各项转化医学研究。

关键词： 长链非编码RNA ARAP1-AS1   胰腺癌   细胞生物学  

摘要： 目的检测长链非编码RNA(LncRNA)ARAP1-AS1在胰腺癌中的表达,并初步探讨其对胰腺癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭生物学行为的影响。方法收集25例胰腺癌组织标本及相应癌旁组织标本,qPCR法检测ARAP1-AS1表达。体外培养人胰腺癌细胞系PANC-1,分为对照组、siRNA-对照组(转染siRNA对照序列)、敲除组(转染ARAP1-AS1 siRNA)、pcDNA3.1-对照组(转染pcDNA3.1)和过表达组(转染pcDNA3.1-ARAP1-AS1)。qPCR法检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,蛋白印迹(WB)法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达。结果胰腺癌组织中ARAP1-AS1表达水平较癌旁组织(2.26±0.13 vs 1.00±0.00)显著升高(P<0.05)。与siRNA-对照组相比,敲除组PANC-1细胞中ARAP1-AS1水平(1.01±0.02 vs 0.29±0.03)及PCNA、Bcl-2、MMP-9蛋白水平、细胞OD值(0.57±0.05 vs 0.23±0.03)、划痕愈合率(78.53±7.02 vs 48.60±5.26)、侵袭数(229.63±22.59 vs 104.25±15.04)显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平及细胞凋亡率(4.52±0.42 vs 32.40±1.84)显著升高(P<0.05)。与pcDNA3.1-对照组相比,过表达组PANC-1细胞中ARAP1-AS1水平(1.02±0.03 vs 2.06±0.08)及PCNA、Bcl-2、MMP-9蛋白水平、细胞OD值(0.57±0.05 vs 0.90±0.08)、划痕愈合率(77.65±6.67 vs 91.22±7.34)、侵袭数(225.34±19.65 vs 327.50±25.40)显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平及细胞凋亡率(4.58±0.48 vs 2.29±0.24)显著降低(P<0.05)。结论 LncRNA ARAP1-AS1在胰腺癌中高表达,其能促进胰腺癌细胞PANC-1增殖、迁移及侵袭,减少细胞凋亡。

关键词： Citespace   CNKI   细胞生物学   可视化分析   教学模式  

摘要： 利用Citespace软件对CNKI数据库中1985年至2023年的细胞生物学教学相关文献进行了可视化分析,包括发文趋势、研究作者和机构的合作关系以及关键词的聚类和突现分析等。结果表明,自2000年以来,国内细胞生物学教学研究呈现明显上升趋势。尽管核心作者之间存在广泛的合作,但相关研究机构之间缺乏密切的联系。此外,细胞生物学教学研究领域的研究热点和未来趋势主要关注于细胞生物学教学模式的转变。

关键词： 浙江大学医学院   谷胱甘肽过氧化酶   酸代谢   生长因子受体   细胞生物学   团队合作   肌酸激酶   吕志  

摘要： 2023年5月8日,浙江大学转化医学研究院/浙江大学医学院附属第一医院/国家基础科学中心许大千研究员和吕志民教授团队合作在《自然·细胞生物学》(Nature·Cell Biology)杂志上发表了题为“Creatine kinase B suppresses ferroptosis by phosphorylating GPX4 through a moonlighting function”的研究论文(DOI:10.1038/s41556-023-01133-9)。该研究揭示了生长因子受体激活可以诱导能量代谢的核心酶肌酸激酶B(CKB)发挥蛋白激酶功能,通过磷酸化谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)抑制肿瘤细胞铁死亡。

关键词： 甲状腺乳头状癌   二氢卟吩e6   光动力疗法   细胞周期  

摘要： 目的研究二氢卟吩e6光动力疗法(Ce6-PDT)对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞生物学功能的影响,为阐明Ce6-PDT治疗甲状腺乳头状癌提供理论依据。方法激光共聚焦显微镜观察Ce6在TPC-1细胞中的定位。不同浓度Ce6-PDT处理TPC-1细胞后,CCK8检测法检测对细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测对细胞周期的变化。结果Ce6主要定位在TPC-1细胞的胞质内。Ce6-PDT可抑制TPC-1细胞的增殖活性,且呈浓度依赖性。Ce6-PDT能引起TPC-1细胞出现G0/G1期阻滞。结论Ce6-PDT可通过诱导细胞周期阻滞抑制TPC-1细胞增殖。

关键词： 细胞生物学   混合式教学   教学方法   教学评价  

摘要： 随着信息化建设的快速发展和网络资源在教学中的广泛应用,教师的教学模式和学生的学习方式也发生了巨大的变化,混合式教学成为课堂教学改革发展的重要态势。该文以细胞生物学课程为例,从教学设计、教学实施和教学反馈方面对混合式教学进行探索与实践;目的是为优化教学模式、提高教学质量和促进课程教学改革提供一定的实践经验。教学反馈显示该教学模式有利于促进学生深度学习,培养学生的实践创新能力并提高教学质量。

关键词： 人脐带间充质干细胞   非小细胞肺癌   外泌体  

摘要： 目的:初步探究人脐带间充质干细胞来源的外泌体(Exosomes of human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSC-EXO)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的影响以及其作用机制。方法:以A549细胞为研究模型构建荷瘤鼠,给予脐带间充质干细胞来源的hUCMSC-EXO治疗,并分别分为模型对照组、外泌体低剂量组、外泌体中剂量组、外泌体高剂量组和化疗组。分别从组织水平以肿瘤组织块的大小、组织形态、CD9的表达评价和细胞水平以细胞形态、增殖、分化进行评价,综合分析脐带间充质干细胞外泌体(hUCMSC-EXO)对NSCLC影响。结果:荷瘤鼠第8周用脊椎脱臼法处死,去掉皮肤剥离取出肿瘤组织测量其大小,统计分析各实验组的差异,结果显示模型对照组与外泌体低剂量组、中剂量组、高剂量组的差异具有统计学意义(P 0.05)。结论:通过本研究证实:非小细胞肺癌A549细胞对hUCMSC-EXO反应具有剂量依赖性,高浓度的hUCMSC-EXO明显抑制肿瘤组织的生长和细胞迁移。

关键词： 硬皮病   局限性   纤维化   脂肪干细胞   外泌体  

摘要： 目的:探索来源于健康人脂肪干细胞(ADSC)的外泌体对局限性硬皮病成纤维细胞(LSFs)纤维化的体外调控作用。方法:取2021年1月至2022年1月中国医学科学院北京协和医院整形外科10例健康人吸脂手术剩余脂肪组织,体外分离培养ADSC,以超速离心法收集其外泌体(ADSC-Exo);取同期15例局限性硬皮病患者患处皮肤组织,体外分离培养成纤维细胞。采用不同方向的诱导分化染色、纳米粒子追踪分析、透射电子显微镜、PKH26染色和蛋白质印迹法对ADSC及ADSC-Exo进行鉴定。通过细胞外囊泡分泌抑制实验检验ADSC是否通过其外泌体影响LSFs纤维化标志物[Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]的表达。取被ADSC-Exo干预的LSFs,通过CCK-8法、划痕实验检测LSFs的增殖和迁移能力。采用实时荧光定量PCR、免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、转化生长因子β(TGF-β)和p-Smad2/3的表达情况。两组比较采用独立样本t检验;多组比较采用方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果:成功于体外分离并培养ADSC和LSFs,并提取ADSC-Exo,且证明ADSC-Exo可以内化到LSFs中发挥作用。细胞外囊泡分泌抑制实验证明,ADSC可通过分泌细胞外囊泡降低LSFs的纤维化标志物表达;CCK-8法、划痕实验结果显示,ADSC-Exo干预后LSFs的增殖和迁移能力降低;实时荧光定量PCR、免疫荧光染色和蛋白质印迹结果显示,相较于对照组,ADSC-Exo干预组的Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β和p-Smad 2/3表达显著降低。结论:在体外,ADSC-Exo可以通过抑制TGF-β/Smad通路来影响LSFs的生物学功能和降低纤维化标志物的表达。

关键词： 紫草素   银屑病细胞   Janus激酶/信号传导及转录激活因子(JAK/STAT)信号通路   生物学活性  

摘要： 目的探讨中药单体紫草素介导Janus激酶/信号传导及转录激活因子(JAK/STAT)信号通路对银屑病细胞生物学活性的作用机制。方法用人类永生化表皮细胞(Hacat)建立银屑病细胞模型,分为:银屑病组(PSO组,未加入紫草素)、紫草素低浓度组(SLC组,紫草素浓度为0.125 mmol/L)、紫草素高浓度组(SHC组,紫草素浓度为0.5 mmol/L)。模型建立成功后,培养24 h后用光学显微镜观察细胞形态,采用噻唑蓝(MTT)检测紫草素对各组Hacat OD值,流式细胞仪检测各组Hacat凋亡率,PCR和Western印迹检测JAK2、STAT1、STAT3表达水平。结果倒置显微镜下观察:银屑病细胞形态镶嵌贴壁生长,呈现铺路石样外观,排列整齐;细胞形态为多角形,扁平,界清;经过紫草素干预24 h以后,SLC组细胞为黏附性降低,部分细胞脱落、漂浮;SHC组细胞数目逐渐减少,细胞形态发生改变,细胞黏附性变差,有较多细胞从瓶壁脱落,24、48、72 h后,与PSO组对比,SLC组与SHC组OD值均明显降低(P<0.05),与SLC组相比,SHC组OD值显著降低(P<0.05);PSO组凋亡率显著低于SLC组(P<0.05);SLC组凋亡率显著低于SHC组(P<0.05);与PSO组相比,SLC组STAT3、STAT1、JAK2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),与SLC组比较,SHC组STAT3、STAT1、JAK2 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05);与SHC组相比,WP1066组STAT3蛋白的表达明显降低,AG490组JAK2蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论中药单体紫草素可以通过抑制JAK/STAT通路上STAT3、STAT1、JAK2蛋白的表达,进而抑制银屑病细胞的增殖,促进其凋亡。

关键词： 结肠癌   KRAS突变   肿瘤浸润淋巴细胞   mTORC1抑制剂  

摘要： 目的研究mTORC1抑制剂通过肿瘤浸润T淋巴细胞生物学活性影响KRAS基因突变型结肠癌的进展。方法建立KRAS突变型结肠癌小鼠模型,将小鼠随机分为4组:对照组,KRAS突变组,mTORC1抑制剂组和KRAS突变+mTORC1抑制剂组;流式细胞术检测肿瘤组织中肿瘤浸润淋巴T细胞的数量;ELISA法检测小鼠血清中IL-2、IL-10、IFN-γ、TGF-β的表达情况;另外构建KRAS突变型结肠癌细胞系HT29,将细胞分为4组:HT-29组,KRAS突变组,mTORC1抑制剂组和KRAS突变+mTORC1抑制剂组;CCK-8法检测结肠癌细胞的增殖情况;流式细胞术检测其凋亡情况;Western blot法检测p53、Bcl-2、Bax、cleaved caspase3蛋白的表达水平。结果与KRAS突变组结肠癌小鼠相比较,KRAS突变+mTORC1抑制剂组小鼠肿瘤组织中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞数量增加(P<0.01,P<0.001),Foxp3^(+)Treg细胞的数量减少(P<0.0001),小鼠血清中IL-2、IFN-γ的水平升高(P<0.0001,P<0.001),IL-10、TGF-β的水平降低(均P<0.001);另外,与KRAS突变型HT29组细胞相比,KRAS突变+mTORC1抑制剂组细胞的增殖能力减弱(P<0.05),并且凋亡情况显著提高(P<0.0001),并且Bcl-2蛋白水平降低(P<0.001),Bax、cleaved caspase3、p53蛋白水平显著升高(P<0.01,P<0.001,P<0.001)。结论mTORC1抑制剂通过影响肿瘤浸润淋巴细胞的分布情况以及通过p53/caspase相关通路抑制KRAS基因突变型结肠癌的进展。