关键词:
吴茱萸碱
血管增生
糖酵解
缺氧诱导因子
血管内皮生长因子受体
摘要:
目的探讨吴茱萸碱对肿瘤血管增生的抑制作用及其机制。方法以不同浓度的吴茱萸碱、二氯化钴(CoCl_(2))单独或联合处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)或人肝癌细胞(HepG2)24 h。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖水平变化;Annexin V/PI双染流式细胞术检测吴茱萸碱对HUVECs凋亡的影响;采用CoCl_(2)化学诱导法建立HUVECs体外模拟缺氧模型;免疫印迹法(Western blotting)检测HUVECs的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、代谢酶(PFKFB3)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)蛋白表达水平。结果MTT检测结果显示,吴茱萸碱对HUVECs、HepG2细胞增殖均有显著的抑制作用(P<0.05或P<0.01),半数抑制浓度分别为1.15、1.07μmol·L^(-1)。流式细胞术结果表明,吴茱萸碱可以诱导HUVECs凋亡(P<0.01)。在常氧条件下,吴茱萸碱对HUVECs的HIF-1α、PFKFB3蛋白抑制不明显,但能显著下调VEGFR2蛋白表达水平(P<0.01)。5~50μmol·L^(-1) CoCl_(2)可使HUVECs的HIF-1α和PFKFB3蛋白表达水平显著升高(P<0.01),且呈浓度依赖性,而细胞增殖水平未见明显变化,但100~400μmol·L^(-1) CoCl_(2)时细胞生存率明显升高;800μmol·L^(-1) CoCl_(2)时细胞生存率明显降低(P<0.01)。CoCl_(2)诱导HIF-1α高表达条件下,吴茱萸碱(0.4μmol·L^(-1))能显著下调HIF-1α、PFKFB3和VEGFR2的蛋白表达水平和细胞生存率(P<0.01);与吴茱萸碱组比较,联合(吴茱萸碱+CoCl_(2))组HIF-1α、PFKFB3蛋白水平及细胞生存率均上调(P<0.05),而VEGFR2不上调。结论吴茱萸碱对HUVECs和HepG2细胞增殖均有显著的抑制作用,且诱导HUVECs凋亡;在CoCl_(2)模拟缺氧条件下,吴茱萸碱可显著下调HUVECs的糖酵解(Warburg效应),其机制可能与独立下调HIF和VEGFR两条信号通路有关。