关键词:
吴茱萸碱
肺肿瘤
细胞增殖
细胞周期
细胞凋亡
坏死性凋亡
摘要:
目的探讨吴茱萸碱(EVO)在人肺癌NCI-H1299细胞中的抗肿瘤作用及其可能机制。方法应用CCK-8法检测EVO(1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μmol/L)处理24、48、72 h对NCI-H1299细胞活力的影响,采用PI单染流式法和Annexin V-FITC+PI双染流式法分别检测EVO对NCI-H1299细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blot法检测相关蛋白表达。结果与二甲基亚砜(DMSO)对照组相比,EVO能显著抑制NCI-H1299细胞的增殖活性,细胞增殖活力随着EVO浓度增加呈下降趋势,不同给药浓度组间比较差异有显著性(F=5091.83,P<0.01),不同时间点间比较差异有显著性(F=1241.80,P<0.01),且细胞增殖活力变化呈浓度和时间依赖性。12.5μmol/L EVO处理细胞24 h后,与DMSO对照组相比,NCI-H1299被阻滞于G 2/M期,NCI-H1299细胞凋亡率显著上升(t=35.52,P<0.001),细胞周期相关蛋白Cdc2磷酸化水平及P53、CyclinB1、Cdc25C(间期)蛋白水平明显上升(F=13.55~69.14,P<0.05),细胞凋亡相关蛋白胱天蛋白酶-3(caspase-3)、胱天蛋白酶-9(caspase-9)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)表达增高(F=21.62~196.54,P<0.05),B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)/Bcl-2相关X蛋白(Bax)比值明显降低(F=3.86,P<0.05),受体相互作用蛋白1(RIP1)、受体相互作用蛋白3(RIP3)和混合系激酶区域样蛋白(MLKL)磷酸化水平明显上升,差异均有统计学意义(F=71.69~118.33,P<0.05)。结论EVO可在NCI-H1299细胞中诱导细胞增殖抑制、G 2/M细胞周期阻滞、内源性凋亡和程序性坏死,从而发挥抗肿瘤作用。