关键词:
甲状腺肿瘤
circ_BACH2
miR-370-3p
GIT1
摘要:
目的探讨circ_BACH2对甲状腺乳头状癌恶性生物学行为的影响及分子机制。方法收集天津市第四中心医院2017—2019年51例甲状腺乳头状癌患者的癌组织和癌旁正常组织。实时荧光定量PCR法检测癌组织、癌旁正常组织和细胞中circ_BACH2、miR-370-3p和GIT1 mRNA的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况和细胞周期变化,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数,细胞计数试剂盒8检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测circ_BACH2、miR-370-3p和GIT1之间的靶向关系,裸鼠成瘤实验检测抑制circ_BACH2的表达对小鼠体内肿瘤的影响。结果甲状腺乳头状癌组织中circ_BACH2、GIT1 mRNA和蛋白表达水平高于癌旁正常组织,miR-370-3p表达水平低于癌旁正常组织,甲状腺癌细胞TPC-1、SW579中circ_BACH2、GIT1 mRNA和蛋白表达水高于人甲状腺正常细胞Nthy-ori3-1,miR-370-3p表达水平低于Nthy-ori3-1细胞(均P<0.05)。GIT1 mRNA表达水平与miR-370-3p表达水平呈负相关(r=-0.634),circ_BACH2表达水平与GIT1 mRNA表达水平呈正相关(r=0.635),circ_BACH2表达水平与miR-370-3p表达水平呈负相关(r=-0.394,均P<0.05)。circ_BACH2与miR-370-3p具有结合位点,GIT1的3'UTR与miR-370-3p具有结合位点。si-circ_BACH2组TPC-1、SW579细胞G0/G1期细胞比例高于si-NC组,S期细胞比例、细胞吸光度值低于si-NC组,细胞克隆形成数[分别为(43±5)个和(54±8)个]低于si-NC组[分别为(100±6)个和(100±9)个],细胞凋亡率[分别为(19.60±2.40)%和(18.10±2.10)%]高于si-NC组[分别为(4.30±0.20)%和(5.10±0.23)%],细胞迁移数[分别为(61±7)个和(58±6)个]、细胞侵袭数[分别为(45±6)个和(47±4)个]均低于si-NC组[分别为(134±15)个、(112±11)个、(113±11)个和(92±9)个,均P<0.001]。si-circ_BACH2组细胞中Snail、Twist1表达水平低于si-NC组,E-cadherin表达水平高于si-NC组(均P<0.001)。抑制miR-370-3p的表达逆转敲减circ_BACH2对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,过表达GIT1逆转过表达miR-370-3p对甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。注射稳定转染sh-circ_BACH2的TPC-1细胞的裸鼠在培养35 d后肿瘤体积缩小[(535±91)mm^(3)和(857±114)mm^(3)],肿瘤重量减少[(0.62±0.13)mg和(1.06±0.15)mg,均P<0.05]。裸鼠肿瘤组织中circ_BACH2、GIT1 mRNA表达水平降低,miR-370-3p mRNA表达水平升高(均P<0.05)。结论抑制circ_BACH2可能通过靶向调控miR-370-3p/GIT1从而抑制体外甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,并抑制体内肿瘤的生长。