关键词： 昼夜节律   Per1   DEX   ALP   OC   MMP-2   正畸加力   牙齿移动   动物模型  

摘要： 第一部分昼夜节律基因Per1对成骨相关基因表达影响的体外研究目的研究体外成骨细胞中,昼夜节律基因Per1对成骨相关基因表达的影响。方法体外培养小鼠成骨细胞系MC3T3-E1,加入地塞米松(dexamethasone,DEX)干预按时间节点0h、2h、4h、8h、12h、16h、20h、24h收集细胞,使用荧光定量PCR检测Per1(Period1)和成骨细胞相关基因ALP、OC和MMP-2的表达。结果使用DEX干预后,Per1基因表达在8h达到峰值,约为初始表达量的9倍。成骨细胞相关基因ALP表达在8h出现峰值;成骨细胞相关基因OC在12h达到峰值,为初始表达量的20余倍;成骨细胞相关基因MMP2表达量明显降低,4h出现低值后缓慢增加,12h达到与原始值持平。结论使用DEX干预MC3TE-E1细胞后,成骨细胞相关基因ALP、OC、MMP2的表达量会随Per1基因表达量发生相应的改变。第二部分正畸牙移动模型的建立及昼夜节律基因Per1对牙周组织中相关基因表达的影响目的建立正畸牙移动模型并研究正畸加力组织中昼夜节律基因Per1表达的规律性。方法选取8周龄的雄性SD大鼠,按照照明和黑暗时间相等的条件下饲养1周后,每只鼠在上颌前牙与右侧上颌第一磨牙间安装正畸加力装置。矫正2周,Micro-CT测量牙齿水平移动距离。2周后将9组SD鼠分别在24小时内的9个等距时间节点处死,取正畸加力组织分别行组织学分析和昼夜节律基因Per1、成骨相关基因ALP、OC、MMP-2,破骨相关基因TRAP、DC-STAMP的定量检测。结果矫正2周后,牙齿平均移动距离是0.45毫米。形态学分析显示第一磨牙近中牙槽骨吸收。远中出现新形成骨。实时荧光定量PCR结果提示Per1基因24小时内有两个峰值出现在ZT3和ZT15。ZT15大概是ZT0的8倍。成骨细胞相关基因ALP表达在ZT3和ZT15为峰值。成骨细胞相关基因OC在ZT6和ZT18达现峰值,ZT18为初始表达量的10余倍。成骨细胞相关基因MMP2表达量明显降低,ZT3出现低值后开始增加,ZT9达到与峰值,破骨细胞相关基因TRAP在ZT3和ZT15出现峰值,ZT15约为初始值7倍。破骨细胞相关基因DC-STAMP在ZT18出现峰值。约为初始值5倍。结论使用正畸加力装置矫正的牙周组织中存在昼夜节律基因per1的表达并有昼夜节律性,成骨相关基因ALP、OC、MMP-2及破骨相关基因TRAP、DC-STAMP会随着Per1基因表达量发生变化。

关键词： 昼夜节律   per1   正畸加力   牙齿移动   余弦分析   动物模型  

摘要： 目的:建立正畸牙移动模型并研究正畸加力组织中昼夜节律基因per1表达的规律性。方法:选取8周龄雄性SD大鼠,按照照明和黑暗时间相等的条件下饲养1周后,每只鼠在上颌前牙与右侧上颌第一磨牙间安装正畸加力装置。矫正2周,micro-CT测量牙齿水平移动距离。2周后将9组SD鼠分别在24h内的9个等距时间节点处死,处死后取正畸加力组织分别行组织学分析和昼夜节律基因per1的定量检测。结果:矫正2周后,牙齿的平均移动距离0.45 mm。形态学分析显示第一磨牙近中牙槽骨吸收,远中有新形成骨。实时荧光定量PCR结果提示昼夜节律基因per1在24 h内的变化呈余弦函数曲线。结论:使用正畸加力装置矫正的牙周组织中存在昼夜节律基因per1的表达并有昼夜节律性。

关键词： 昆明种小鼠   肝脏   胆酸合成基因   胆酸转运体   昼夜节律   性别差异  

摘要： 目的观察昆明种小鼠肝脏胆酸合成基因及转运体表达的昼夜节律变化。方法成年昆明种小鼠48只,适应性饲养1周后,随机分为6组(每组8只,雌雄各半),分别于06∶00、10∶00、14∶00、18∶00、22∶00、02∶00不同时间点收集动物肝脏,提取肝脏总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR法检测肝脏胆酸代谢途径相关基因的mRNA表达。结果小鼠胆酸合成限速酶Cyp7a1,Cyp27a1mRNA最高表达在18∶00,且雌性表达高于雄性;而Cyp8b1和Cyp7b1表达最高则在10∶00,其中Cyp7b1表现为雄性高于雌性;肝脏核受体FXR在18∶00表达最高;且雌性表达高于雄性,SHP雌性表达最高在18∶00,而雄性最高表达则出现在10∶00;转运体Ntcp的最高表达在18∶00,Bsep最高表达则在14∶00,且雌性表达高于雄性。结论小鼠肝脏胆酸代谢基因表达存在昼夜节律性,且存在性别差异。

关键词： 钟基因Per2   钟控基因   昼夜节律   口腔   肿瘤  

摘要： 目的探讨钟基因Per2和钟控基因血管内皮生长因子(VEGF)、Ki67、c-Myc和P53在颊黏膜癌变不同阶段的昼夜节律变化规律以及与癌变发生发展的关系。方法 90只叙利亚金黄地鼠置于12 h光照和12 h黑暗交替环境中饲养,用二甲基苯并蒽(DMBA)涂抹颊黏膜建立金黄地鼠颊癌模型,分别在DMBA涂抹前,涂抹6周和14周后的24 h内的6个不同时间点处死动物,获取正常颊黏膜、癌前病变和癌症3个不同阶段昼夜6个不同时间的组织。经病理学检查确认后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各时间点Per2、VEGF、Ki67、c-Myc和P53 m RNA的相对表达量,并行余弦分析,以中值、振幅和峰值位相时为指标反映各基因表达的昼夜节律特征。结果 Per2、VEGF、P53和c-Myc m RNA在癌变3个阶段的表达均具有昼夜节律性(P<0.05),而Ki67 m RNA仅在正常黏膜和癌前病变阶段的表达具有昼夜节律性(P<0.05)。Per2和P53 m RNA表达的中值随着癌症的发展而降低(P<0.05),VEGF、c-Myc和Ki67 m RNA表达的中值随着癌症的发展而上升(P<0.05);P53 m RNA的振幅随着癌症的发展而降低(P<0.05),Per2、VEGF、Ki67和c-Myc m RNA的振幅在癌前病变和癌症阶段均高于正常组(P<0.05);在癌前病变阶段,Per2、VEGF和c-Myc m RNA的峰值位相时较正常组提前,而Ki67和P53 m RNA的峰值位相时较正常组滞后。结论随着癌症的发生和发展,钟基因Per2和肿瘤相关钟控基因VEGF、Ki67、c-Myc、P53表达的昼夜节律特征发生明显改变。

关键词： 原发性高血压   动态血压监测   动脉粥样硬化性脑梗死   颈动脉粥样硬化斑块   相关性  

摘要： 目的探讨原发性高血压患者血压昼夜节律变化与动脉粥样硬化性脑梗死及颈动脉粥样硬化斑块的相关性。方法回顾性分析2013年1—12月入院治疗的67例原发性高血压合并动脉粥样性脑梗死患者,比较病例组与对照组患者血压昼夜动态变化情况,同时比较不同血压昼夜变化类型的病例组患者,其颈动脉粥样硬化斑块的检查情况。结果与对照组相比,病例组的24 h平均收缩压、白天收缩压、夜间收缩压均显著高于对照组,夜间收缩压下降率、夜间舒张压下降率均显著低于对照组,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。对照组血压昼夜变化呈杓型的例数均显著高于病例组四种类型的脑梗死患者,差异具有统计学意义(P<0.05);病例组四种类型的脑梗死患者中,血压昼夜变化呈非杓型的患者数均显著高于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。病例组中非杓型和反杓型患者检查到2级以上颈动脉粥样硬化斑块的情况明显高于dipper组和extreme-dipper组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。在杓型组和超杓型组患者中,均未检查到3级颈动脉粥样硬化斑块。结论原发性高血压患者的昼夜节律变化异常与动脉粥样硬化性脑梗死以及颈动脉粥样硬化斑块密切相关。

关键词： 基因表达   口腔肿瘤   癌,鳞状细胞   昼夜节律   细胞周期蛋白类  

摘要： 目的 探讨生物钟基因Perl和细胞周期基因p53、细胞周期蛋白（Cyclin）D1、B1、周期蛋白依赖性激酶（cyclin-dependent kinases,CDK）在口腔颊黏膜癌变不同阶段的昼夜节律表达变化及与癌变发生的关系.方法 90只金黄地鼠置于光照和黑暗交替环境中饲养,用二甲基苯并蒽涂抹颊黏膜建立金黄地鼠颊黏膜鳞状细胞癌模型,分别在涂抹二甲基苯并蒽前、6周和14周后的24 h开灯后时间（hour after lights onset,HALO）的4、8、12、16、20和24 HALO的6个时间点处死动物,每个时间点5只,分别获取正常颊黏膜、癌前病变和鳞状细胞癌3个癌变阶段各昼夜6个时间的组织.常规切片在HE染色下观察组织癌变情况;用实时定量荧光PC R（real time PCR,RT-PCR）检测各时间点组织中Perl、p53、CyclinD1及B1、CDK1 mRNA的表达;行余弦分析,以中值、振幅和峰值位相时为指标分析各基因的表达在癌变不同阶段的昼夜节律变化特征.结果 Perl、p53、CDK1和CyclinD1 mRNA分别在癌变3个阶段中的表达均具有昼夜节律性（P＜0.05）;CyclinB1 mRNA仅在正常颊黏膜和鳞状细胞癌阶段中的表达具有昼夜节律性（P＜0.05）,而在癌前病变阶段表现为昼夜节律紊乱（P＞0.05）;Per1和p53mRNA表达的中值随着鳞状细胞癌的发展而显著降低（P＜0.05）,CyclinD1、B1、CDKlmRNA表达的中值随着鳞状细胞癌的发展而显著上升（P＜0.05）;Per1、p53和CyclinD1 mRNA表达的振幅随着鳞状细胞癌的发展显著降低（P＜0.05）,CDK1mRNA的振幅随着鳞状细胞癌的发展显著增加（P＜0.05）,而CyclinB1 mRNA的振幅无显著性改变（P＞0.05）;在癌前病变阶段Per1和CDK1 mRNA峰值出现时间（即峰值位相时）较正常阶段明显提前,而p53和CyclinD1 mRNA峰值表现为明显滞后;在鳞状细胞癌阶段CDK1和CyclinB1 mRNA的峰值位相时较正常阶段明显滞后,而Per1、p53和CyclinD1 mRNA无明显变化.结论 随着鳞状细胞癌的发生和发展,生物钟基因Per1和细胞周期基因p53、CyclinB1、D1、CDK1、Cyclin表达的昼夜节律特征明显改变.

关键词： extreme obesity   genetic variation   hypothalamus   signaling   circadian rhythm   GENOME-WIDE ASSOCIATION   EARLY-ONSET   LEPTIN   PER1   POLYMORPHISM   VARIANTS   GHRELIN   WEIGHT   COMMON   CLOCK  

摘要： The hypothalamus is important for regulation of energy intake. Mutations in genes involved in the function of the hypothalamus can lead to early-onset severe obesity. To look further into this, we have followed a strategy that allowed us to identify rare and common gene variants as candidates for the background of extreme obesity from a relatively small cohort. For that we focused on subjects with a well-selected phenotype and on a defined gene set and used a rich source of genetic data with stringent cut-off values. A list of 166 genes functionally related to the hypothalamus was generated. In those genes complete exome sequence data from 30 extreme obese subjects (60 genomes) were screened for novel rare indel, nonsense, and missense variants with a predicted negative impact on protein function. In addition, (moderately) common variants in those genes were analyzed for allelic association using the general population as reference (false discovery rate < 0.05). Six novel rare deleterious missense variants were found in the genes for BAIAP3, NBEA, PRRC2A, RYR1, SIM1, and TRH, and a novel indel variant in LEPR. Common variants in the six genes for MBOAT4, NPC1, NPW, NUCB2, PER1, and PRRC2A showed significant allelic association with extreme obesity. Our findings underscore the complexity of the genetic background of extreme obesity involving rare and common variants of genes from defined metabolic and physiologic processes, in particular regulation of the circadian rhythm of food intake and hypothalamic signaling.

关键词： hypoxia   hypoxia-inducible factor-1 alpha   hypoxia-inducible factor-2 alpha   hepatocellular carcinoma   circadian clock   CLOCK GENE   BREAST-CANCER   RISK   HIF-1   WORK  

摘要： Disturbance in the expression of circadian rhythm genes is a common feature in certain types of cancer, however the mechanisms mediating this disturbance remain to be elucidated. The present study aimed to investigate the effect of hypoxia on the expression of circadian rhythm genes in liver cancer cells and to identify the mechanisms underlying this effect in hepatocellular carcinoma (HCC). The HCC cell line, PLC/PRF/5. was treated With either a vehicle control or CoCl2 at 50, 100 or 200 mu M for 24 h. Following treatment, the protein expression levels of hypoxia-inducible factor (HIF)-1 alpha and HIF-2 alpha were detected by western blotting and the mRNA expression levels of circadian rhythm genes, including circadian locomotor output cycles kaput (Clock), brain and muscle Arnt-like 1 (Bmall), period (Per)1, Per2, Per3, cryptochrome (Cry)1, Cry2 and casein kinase l epsilon (CKI epsilon), were detected by reverse transcription quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR). Expression plasmids containing HIF-1 alpha or HIF-2 alpha were transfected into the PLC/PRF/5 cells using liposomes and RT-qPCR was used to determine the effects of the transfections on the expression levels of circadian rhythm genes. Following treatment with CoCl2, the protein expression levels of HIF-1 alpha and HIF-2 alpha were upregulated in a CoCl2 concentration-dependent manner. The mRNA expression levels of Clock, Bmall and Cry2 were increased, and the mRNA expression levels of Per1, Per2, Per3, Cry1 and CKI epsilon were decreased following CoCl2 treatment (P<0.05). In the PLC/PRF/5 cells transfected with the plasmid containing HIF-1 alpha, the mRNA expression levels of Clock, Bmall and Cry2 were increased, and the mRNA expression levels of Per1, Per2, Per3, Cry1 and CKI epsilon were decreased. In the PLC/PRF/5 cells transfected with the plasmid containing HIF-2 alpha, the mRNA expression levels of Clock, Bmall, Per1, Cry1, Cry2 and CKI epsilon were upregulated, and the mRNA expression

关键词： 血压变异性   血压昼夜节律   原发性高血压   动脉粥样硬化  

摘要： 目的:探讨原发性高血压患者的血压昼夜节律、血压变异性与动脉粥样硬化的关系。方法:入选原发性高血压患者120例,行24 h动态血压监测,根据血压昼夜节律分为杓型组(n=22)、非杓型组(n=36)和反杓型组(n=62)。分析比较3组的血压变异性、冠心病发生率及颈动脉斑块检出率。结果:反杓型组的24 h收缩压标准差(24hSSD)、24 h舒张压标准差(24hDSD)、白昼收缩压标准差(dSSD)、白昼舒张压标准差(dDSD)、24 h收缩压变异系数(24hSBP-CV)、夜间收缩压变异系数(nSBP-CV)均低于杓型组;反杓型组的24hDSD、dDSD、24hDBP-CV低于非勺型组;反杓型组冠心病发生率及颈动脉斑块检出率较杓型组明显升高(P均<0.05)。结论:原发性高血压患者血压昼夜节律异常对动脉粥样硬化进展可能有促进作用。

关键词： β-细辛醚   抑郁症   昼夜节律周期基因Per1  

摘要： 目的:探讨β-细辛醚对抑郁模型大鼠昼夜节律周期基因Per1(period1)表达的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阿戈美拉汀组(40 mg·kg-1·d-1)、β-细辛醚低剂量组(12.5 mg·kg-1·d-1)、β-细辛醚高剂量组(25 mg·kg-1·d-1)共5组,每组20只。通过28 d慢性不可预见性应激刺激复制大鼠抑郁模型,于给药前及造模后对大鼠进行敞箱实验与糖水偏爱度行为学评估,应用实时定量PCR和Western blot检测各组大鼠脑中昼夜节律基因Per的表达。结果:行为学检测结果显示,与空白对照组相比,模型组的水平活动次数和糖水偏爱度均显著减少;与模型组相比,3个给药组的水平活动次数和糖水偏爱度均显著增加。PCR和Western blot检测检测结果显示,与空白对照组比较,模型组昼夜节律基因Per1的mRNA与蛋白表达均明显增高(P<0.05),而与模型组相比,阿戈美拉汀组和β-细辛醚高低剂量组昼夜节律基因Per1的mRNA与蛋白表达水平明显低于模型组(P<0.05)。结论:β-细辛醚可能通过影响抑郁大鼠昼夜节律基因Per1的脑表达进而改善大鼠的抑郁状态。