关键词： 原发性胆汁性胆管炎   调节性B细胞   PD-1+CD8+T细胞   单细胞RNA测序   细胞焦亡  

摘要： 原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种由免疫系统异常攻击自身肝内小胆管而产生的慢性胆汁淤积性肝脏自身免疫性疾病。T细胞与B细胞被认为在PBC中发挥着尤为关键的作用。然而,关于T细胞与B细胞参与PBC发生发展的具体机制尚不清楚。目前PBC的治疗方式主要依赖于熊去氧胆酸(UDCA),但该药只能缓解疾病进程,并不能治愈PBC。因此,进一步探究PBC的免疫学发病机制,寻找潜在的治疗靶点具有重要意义。本研究重点关注调节性B(regulatory B,Breg)细胞和CD8T细胞在PBC中的作用,取得的研究成果主要包括:1.调节性B细胞的异质性及其在原发性胆汁性胆管炎中的变化B细胞在PBC中的作用存在争议:一方面B细胞产生与疾病相关的自身抗线粒体抗体与Ig M,另一方面PBC中存在具有免疫抑制作用的Breg细胞。然而,由于缺乏清晰的细胞表面标志物以及Breg细胞特异性的转录因子,使得目前关于Breg细胞的研究受到了很大的阻碍。另外,虽然Breg细胞在小鼠的多种脏器中均有发现,其在不同脏器中表型与功能的异质性仍需进一步阐明。因此,我们首先通过单细胞RNA测序技术对生理条件下Breg细胞的特性及其脏器特异性进行了系统的研究,并进一步探究了Breg细胞在PBC中的变化情况并讨论了其在PBC发生过程中的潜在作用。根据数据库中免疫抑制功能相关基因及文献中IL10B10细胞特征基因的表达情况,我们对Breg细胞进行了鉴定,并发现Fcrl5与Atf3可能作为Breg细胞的特异性分子标志物。随后,我们对不同Breg细胞亚群的表型和功能以及在不同脏器中的分布进行了详细分析,并通过BCR(B cell receptor)分析确定了不同脏器间Breg细胞的克隆扩增关系。此外,根据基因表达和功能通路的差异,我们发现非B10的Breg细胞表现出更加活化的TGF-β信号通路,提示非B10的Breg细胞具有不同于传统B10细胞的免疫抑制特性。我们的这部分工作为Breg细胞的定义提供了新的见解,并阐明了在生理条件下不同脏器Breg细胞的转录表达谱和BCR克隆扩增情况,为探究Breg细胞在PBC中的作用提供了必要的前期基础。随后,我们利用了一种系统性免疫耐受打破引起PBC症状的dn TGFβRII Aire小鼠模型进行了后续研究。根据Breg细胞的定义,我们通过单细胞RNA测序进一步探究了PBC模型小鼠肝脏中Breg细胞的变化,与对照小鼠相比,PBC模型小鼠肝脏B细胞中Breg细胞的比例明显增加,***,***1与Cd74等基因的表达水平显著升高,提示其可能具有更强的抗原递呈功能。这为我们探究Breg细胞对PBC的作用提供了基础,进一步加深了我们对PBC发病机制的理解。***-1CD8T细胞诱导肝实质细胞焦亡并促进肝脏炎症自身反应性T细胞尤其是CD8T细胞在PBC中发挥着关键的致病作用,但自身反应性CD8T细胞的具体致病机制及是否存在特定的关键致病性CD8T细胞亚群尚不清楚。我们发现dn TGFβRII Aire模型小鼠中肝脏CD8T细胞显著增加,而清除CD8T细胞后,肝脏中淋巴细胞浸润减少,且小鼠生存状态明显改善,这说明CD8T细胞是该模型小鼠主要的致病细胞。进一步分析CD8T细胞的亚群发现,肝脏中一群PD-1CD8T细胞出现大量扩增,并且产生高水平的γ干扰素(IFN-γ)与颗粒酶Β(granzyme B),与PD-1CD8T细胞相比,PD-1CD8T细胞具有更高的增殖能力和更强的杀伤性。另外,我们对小鼠肝脏RNA测序结果分析发现,与对照小鼠相比,模型小鼠肝脏中焦亡相关基因的表达水平显著上调。因此,我们猜测PD-1CD8T细胞可能介导肝脏细胞发生焦亡,诱发肝脏中的炎症反应,从而在PBC的发病过程中发挥重要作用。在体外PD-1CD8T细胞和肝实质细胞的共培养实验中,表明PD-1CD8T细胞能够诱导肝实质细胞发生焦亡。此外,焦亡抑制剂DSF治疗后的模型小鼠生存期明显延长,且肝脏疾病情况得到明显改善,进一步说明PD-1CD8T可通过诱导肝实质细胞焦亡促进PBC进展。本研究中,我们利用PBC小鼠模型探究CD8T细胞在疾病发展过程中的关键功能亚群的变化及其具体致病机制,发现PD-1CD8T细胞表现出很强的功能活性与细胞毒性并且能够诱导肝实质细胞发生焦亡,从而为深入理解免疫耐受打破引起的PBC发病机制以及针对性的临床治疗提供了理论依据。

关键词： 非肥胖糖尿病   调节性B细胞   1型糖尿病  

摘要： 目的探讨非肥胖糖尿病(NOD)小鼠调节性B细胞(Breg细胞)与其他免疫细胞的关系。方法45只NOD小鼠均分为A组(4周龄)、B组(8周龄)和C组(1型糖尿病小鼠)三组。HE染色观察小鼠胰腺组织形态。流式细胞术检测三组小鼠脾脏调节性T细胞(Treg细胞)(CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+))、Th1细胞(CD4^(+)IFN-γ^(+))、Th17细胞(CD4^(+)IL-17^(+)),B10细胞(CD19^(+)CD5^(+)CD1d^(hi)B)和IL-10^(+)B细胞(CD19^(+)IL-10^(+))数量。结果与A组比较,B组Th1细胞、Th17细胞、B10细胞和IL-10^(+)B细胞增多,而C组Treg细胞减少,Th1细胞、Th17细胞、B10细胞IL-10^(+)B细胞、Th1/B10比例和Th17/B10比例增多(P<0.05);与B组比较,C组Th1细胞、Th17细胞、Th1/B10比例和Th17/B10比例增多,而Treg细胞、B10细胞和IL-10^(+)B细胞减少(P<0.05)。C组小鼠B10细胞数量与Th1细胞和Th17细胞数量呈负相关(r=-0.394.-0.472,P<0.05),而与Treg细胞和IL-10^(+)B细胞数量呈正相关(r=0.459、0.786,P<0.05)。结论NOD小鼠存在Breg细胞与其他免疫细胞的免疫失衡,参与1型糖尿病的发生。

关键词： 类风湿关节炎   调节性B细胞   髓系树突状细胞   辅助性T细胞   病情程度   关节活动度  

摘要： 类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是临床常见的自身免疫性疾病,多发于中老年人群,主要临床表现为慢性关节滑膜炎症[1]。目前临床上以药物治疗和手术治疗为主,可一定程度缓解炎症反应和改善关节功能,但RA病情反复,治愈难度较大,早诊断、早治疗可有效提高治疗效果、缓解疼痛、提高生活质量[2-3]。T、B细胞等免疫细胞的水平、功能异常在RA的病理生理机制中发挥重要作用,调节性B细胞(regulatory B cells,Breg)通过产生白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子而负性调节免疫功能.

关键词： 调节性B细胞   肿瘤治疗   免疫抑制   癌症   白细胞介素-10   白细胞介素-35   转化生长因子-β  

摘要： 调节性B细胞(Breg)是近年来新发现的B细胞功能型亚群,其通过分泌白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-35(IL-35)和转化生长因子-β(TGF-β)等负向调节因子抑制机体免疫应答,在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用,影响肿瘤的发展、侵袭和转移。在肝癌、胃癌、乳腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、肺癌等多种常见癌中均发现存在具有促癌效应的Breg。Breg和肿瘤的临床分期、治疗、预后存在一定的相关性。靶向Breg可能成为未来肿瘤免疫治疗的一个新方向。

关键词： 艾拉莫德   调节性B细胞   细胞因子  

摘要： 目的观察胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠经艾拉莫德治疗后调节性B细胞及相关细胞因子的变化趋势,了解艾拉莫德的作用机制。方法将6~8周龄Wistar雌性大鼠随机分为空白组、CIA模型组、艾拉莫德组,每组20只。观察CIA大鼠体质量变化、关节滑膜病理改变,ELISA法检测血清中IL-10、TGF-β含量,实时荧光定量PCR法检测关节滑膜中IL-10mRNA、TGF-βmRNA及脾脏中Bcl-6mRNA的表达水平。结果治疗第57天,艾拉莫德组大鼠体质量大于治疗前和CIA模型组,但低于空白组(P<0.05)。空白组大鼠关节滑膜有4层细胞层且未见炎性细胞浸润;CIA模型组关节滑膜有10层细胞层,可见大量炎性细胞浸润;艾拉莫德组有4层细胞层,未见明显炎性细胞浸润。与空白组比较,CIA模型组和艾拉莫德组血清中IL-10、TGF-β的表达、关节滑膜中IL-10mRNA、TGF-βmRNA及脾脏中Bcl-6mRNA的表达下降(P<0.05);与模型组比较,艾拉莫德组血清中IL-10、TGF-β的表达、关节滑膜中IL-10mRNA、TGF-βmRNA及脾脏中Bcl-6mRNA的表达均无明显变化(P> 0.05)。结论艾拉莫德可减轻胶原诱导性关节炎肿胀,但对血清及关节滑膜中的细胞因子IL-10、TGF-β及脾脏中Bcl-6的表达未见明显影响。

关键词： 调节性B细胞   儿童哮喘急性发作   硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂   吸入用布地奈德混悬液   生长发育  

摘要： 目的探讨吸入布地奈德混悬液用于儿童哮喘治疗中的效果及其用药后1~2年对生长发育的影响。方法选择于2016年10月至2017年1月收诊的68例儿童哮喘患者,均为急性发作并持续用药,分为两组:34例应用硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂治疗的患者为对照组,34例应用吸入布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂治疗的患者为观察组。比较两组儿童哮喘急性发作期患者的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏-C反应蛋白(hs-CRP)、最大呼吸流量、IS最大呼气量、调节性B细胞比例、喘憋消失时间、气促缓解时间、湿啰音消失时间、咳嗽消失时间,并对比随访2年后的生长发育指标。结果用药结束,观察组的IL-6、TNF-α、hs-CRP、调节性B细胞比例、喘憋消失时间、气促缓解时间、湿啰音消失时间、咳嗽消失时间均低于对照组(P<0.05);观察组的最大呼吸流量、IS最大呼气量高于对照组(P<0.05)。观察组患儿随访结束后的生长激素水平、身高和体重均低于对照组(P<0.05)。结论吸入用布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂雾化吸入疗法可缓解患儿的炎症反应,改善患儿的肺功能及免疫功能,加快临床症状的消失,但一定程度上会影响患儿的生长发育。

关键词： 调节性B细胞   自身免疫性皮肤病   应用  

摘要： 临床常见的参与免疫调节的免疫细胞有T淋巴细胞、B淋巴细胞,不仅具有正向免疫功能,同时又有负向免疫功能。而调节性T细胞的负向调节功能是临床研究热点,对于调节性B细胞的相关研究较少。本文则对调节性B细胞在系统性红斑狼疮、银屑病、天疱疮、系统性硬化症、类风湿性关节炎中的应用现状及进展进行简要综述,以望对后期的相关研究提供参考借鉴。

关键词： 急性脑梗死   调节性B细胞   预后  

摘要： 目的:探讨急性脑梗死患者外周血中调节性B细胞(Breg)的变化及其与预后的关系。方法:收集128例急性脑梗死患者及100例健康对照的临床资料与实验室数据。急性脑梗死患者随访90 d用modified Rankin Scale评分评价预后,并分析Breg与预后之间的关系。结果:急性脑梗死患者外周血中Breg,血清IL-10、TGF-β及IL-35水平均较健康对照组上调(P<0.001)且患者外周血Breg与IL-10水平呈正相关。急性脑梗死患者外周血Breg是预后的独立影响因素(OR:3.382;95%CI:1.978~5.782)。Breg预测患者获得较好预后的ROC曲线下面积是0.818(0.735~0.900),截断值是7.95%,敏感度和特异度分别为83.3%和74.0%。结论:Breg在急性脑卒中患者外周血中增加,并与患者的预后相关。

关键词： 免疫性血小板减少症   B淋巴细胞,调节性   淋巴细胞亚群   儿童  

摘要： 目的探讨原发性免疫性血小板减少症(ITP)患儿的调节性B细胞(Bregs)及淋巴细胞亚群的改变,并分析其与ITP持续时间和缓解时间的关系。方法流式细胞术检测88例ITP患儿治疗前和其中84例治疗1个月后和45例正常对照者外周血淋巴细胞亚群及Bregs的比例。采用包括糖皮质激素和静脉注射IgG作为一线药物治疗ITP患儿。对比治疗后不同缓解时间ITP患儿淋巴细胞亚群的改变。结果与对照组相比,所有ITP患儿的Th、NK、Breg细胞计数和Th/Tc比值均明显降低(P<0.05),而Tc以及CD19+B细胞增高(P<0.05)。持续性和慢性ITP组Breg细胞计数较新诊断ITP组明显降低(P<0.05)。共84例ITP患儿治疗后缓解,58例(69.1%)获得长期缓解,26例(30.9%)短期缓解,短期缓解组治疗后Breg和淋巴细胞亚群与治疗前无明显差异(P>0.05),而与对照组仍有明显差异(P<0.05);长期缓解ITP组治疗后Breg和淋巴细胞亚群与对照组无明显差异(P>0.05),而与治疗前比较,除Tc之外,其他细胞亚群均明显增高(P<0.05);长期缓解ITP组NK细胞和Breg细胞明显高于短期缓解ITP组(P<0.05)。结论长病程ITP患儿外周血Bregs明显降低,治疗后获得长期缓解ITP患儿的外周血Bregs显著增加,表明恢复Bregs的免疫机制可能与儿童ITP的长期缓解有关。

关键词： 硬皮病   系统性   白细胞介素35   调节性T细胞   辅助性T细胞17   调节性B细胞  

摘要： SSc是一种以皮肤和器官纤维化、血管病变为特征的结缔组织疾病。IL-35是IL-12家族的新成员,促进调节性T细胞(Treg)的增殖并增强Treg细胞的抑制功能,抑制辅助性T细胞(Th)17的分化及IL-17的分泌,还诱导产生调节性B细胞(Breg),促进其向分泌IL-35、IL-10的Breg细胞转化,发挥免疫抑制作用。目前SSc的发病机制尚未完全明确,IL-35在SSc发病中的作用仍存有争议。本文就IL-35的生物学特征及其在SSc中的调节机制作一综述,从而为疾病的诊疗提供新的思路。