关键词： 地塞米松   B细胞活化因子   调节性T细胞   紫癜,血小板减少性  

摘要： 目的研究大剂量地塞米松治疗前后特发性血小板减少性紫瘕（ITP）患者B细胞活化因子（BAFF）和调节性T（Treg）细胞的变化，以及BAFF对Treg细胞的作用。方法用ELISA方法检测21例慢性活动性ITP患者治疗前后血浆BAFF水平；用流式细胞术检测患者治疗前后及外周血单个核细胞培养体系中Treg细胞的比例。结果治疗前ITP患者的BAFF水平[（599．70±199．40）pg／m1]较正常对照[（454．50±132．50）pg／m1]明显升高（P〈0．05），Treg细胞比例明显降低[（1．56±6．73）％]（P〈0．01）；大剂量地塞米松治疗后，ITP患者的BAFF水平[（296．9±119．7）pg／ml]较治疗前明显下降（P〈0．01），且低于正常对照组（P〈0．01）；Treg细胞比例明显升高[（5．94±2．22）％]（P〈0．01），且高于正常对照[（4．08±1．08）％]（P〈0．01）。ITP患者BAFF水平和Treg比例与血小板计数无相关性（P〉0．05）。体外实验显示，rhBAFF0组和rhBAFF20组Treg数量无明显改变（P〉0．05）。结论慢性ITP患者的BAFF水平增高，Treg细胞数量减少。大剂量地塞米松可降低患者的BAFF水平，增加Treg细胞的数量。BAFF对Treg细胞无明显影响。

关键词： 烧伤   T淋巴细胞,调节性   白细胞介素2   免疫   高迁移率族蛋白B1   细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4  

摘要： 目的 探讨严重烫伤大鼠延迟复苏后脾脏高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达对调节性T淋巴细胞（Treg）表型及其介导T淋巴细胞免疫功能的影响.方法 将104只Wistar大鼠按随机对照表法分为正常对照组8只、假烫组32只、烫伤组32只、丙酮酸乙酯（EP）治疗组32只.后2组大鼠造成30%TBSAⅢ度烫伤,伤后6 h腹腔注射林格液或EP液延迟抗休克,伤后12 h起每隔12 h给予4 mL林格液或EP液至伤后48 h;假烫组除于37℃模拟烫伤外其余处理同烫伤组.于伤后1、3、5、7 d处死各致伤组大鼠,另处死正常对照组大鼠,免疫磁珠法分离大鼠脾脏CD4~＋CD25~＋Treg,ELISA法检测脾脏HMGBI含量及T淋巴细胞上清液中IL-2水平,采用流式细胞仪检测Treg表面分子细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）表达,同时检测T淋巴细胞增殖活性（数据以吸光度值表示）.对数据进行多组间方差分析和2组独立样本间的t检验.结果 （1）烫伤组大鼠脾脏HMGBI含量伤后1～7 d显著高于假烫组,其中第1天达峰值[（46.7±8.3）ng/mg蛋白];EP治疗组大鼠脾脏HMGBI含量伤后1～7 d明显低于烫伤组.（2）与假烫组比较,烫伤组大鼠伤后1～5 d CTLA-4表达明显增强（t值分别为10.459、12.051、4.029,P〈0.05或P〈0.01）;EP治疗组伤后1～7 d CTLA-4表达较烫伤组显著降低（t值分别为2.796、9.913、9.581、10.022,P〈0.05或P〈0.01）.（3）与假烫组比较,烫伤组大鼠伤后1～7 d脾脏T淋巴细胞增殖活性明显受抑,其中伤后1 d达低谷（0.167±0.059）;IL-2水平伤后1～7 d显著下降,其中伤后5 d达低谷（44±24）pg/mL.与烫伤组比较,EP治疗组伤后各时相点脾脏T淋巴细胞增殖受抑状态明显缓解,且IL-2水平明显上升.结论 严重烫伤后HMGB1产生可诱导Treg向成熟发展,从而介导T淋巴细胞增殖反应低下,免疫功能抑制.EP通过抑制HMGB1的合成与释放,改善烫伤延迟复苏大鼠的细胞免疫功能紊乱.

关键词： 调节性T细胞   高迁移率族蛋白B1   Toll样受体4   白细胞介素-10  

摘要： 目的 探讨腹腔注射高迁移率族蛋白B1（HMGB1）后不同基因型小鼠天然调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）免疫功能的改变及其受体作用机制.方法 分别给C3H/HeN和C3H/HeJ[分别为Toll样受体4（TLR4）野生型（TLR4^＋/＋）和天然突变型（TLR4^-/-]小鼠腹腔注射不同剂量HMGB1（0、10、20μg/只）,饲养48 h后采用免疫磁珠法分离小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg.体外培养12 h后采用流式细胞仪检测CD4^＋CD25^＋Treg表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）表达强度,并应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测CD4^＋CD25^＋Treg生成白细胞介素（IL）-10量.结果 与对照组比较,20 μg HMGB1攻击后C3H/HeN小鼠CD4^＋CD25^＋Treg表达CTLA-4水平显著下降（78.70±11.42与60.76±7.64,P〈0.01）,同时细胞牛成IL-10量也明显降低[（96.89±6.25）ng/L与（47.11±4.25）ng/L,P〈0.01];但不同剂量HMGB1攻击可引起C3H/HeJ小鼠CD4^＋CD25^＋Treg表达CTLA-4明显上调和生成IL-10量不同程度地增加（P〈0.01）.结论 HMGB1攻击可显著影响CD4^＋CD25^＋Treg介导的免疫状态,TLR4在HMGB1诱导CD4^＋CD25^＋Treg免疫活性过程中发挥了重要负向调控作用.

关键词： B淋巴细胞   调节性   抑制性细胞因子   T淋巴细胞   免疫调节作用   免疫应答   免疫系统   免疫耐受  

摘要： 免疫系统依赖于一系列的调节机制来控制免疫应答的强度，包括调节性T淋巴细胞、抑制性细胞因子和抑制性膜分子等。近年研究发现，在某些条件下，B淋巴细胞同样可以发挥一定的免疫调节作用。同调节性T淋巴细胞相似，调节性B淋巴细胞介导的免疫抑制对维持免疫耐受有重要作用。调节性B淋巴细胞通过直接同T淋巴细胞接触或者分泌抑制性的细胞因子来抑制有害的免疫应答。目前调节性B淋巴细胞的研究引起了各国研究者的广泛关注，近年已经有许多研究论文和综述发表，现概要介绍其现状和发展近况。

关键词： 炎症性肠病   2,4,6-三硝基苯磺酸   日本血吸虫卵   调节性T细胞   调节性B细胞   IL-10   TGF-β  

摘要： 目的：研究日本血吸虫卵对2,4,6—三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzesulfonic acid, TNBS)诱导小鼠结肠炎模型脾脏调节性T细胞(regulatory T cells, Treg)、调节性B细胞(regulatory B cells, Breg)表达水平影响并探讨其机制。 方法：BALB/c小鼠(n=60)随机分成四组：正常对照组(ctrl组,n=10)、血吸虫卵组(TNBS-OVA+组,n=10)、TNBS组(TNBS+OVA-组,n=20)、TNBS+血吸虫卵组(TNBS+OVA+组,n=20)。TNBS-OVA+组及TNBS+OVA+组小鼠在实验开始的第2、9天分别给予腹腔注射冰冻灭活日本血吸虫卵15000个(1ml冰生理盐水混悬液),ctrl组及TNBS+OVA-组同时给予相同体积的冰生理盐水腹腔注射。在实验开始第11天TNBS+OVA-组及TNBS+OVA+组小鼠予TNBS溶液3mg/只灌肠建立结肠炎模型,期间观察四组小鼠的活动状况。建立结肠炎模型后6天(即实验开始第17天)处死存活小鼠,观察四组小鼠结肠的大体形态、同时用流式细胞仪测定小鼠脾脏中的CD4+CD25+细胞(Treg)、CD19+IL-10+细胞(IL-10+的Breg细胞)和CD19+TGF-β+细胞(TGF-β+的Breg细胞)的表达水平。 结果：(1)与TNBS+OVA-组死亡率35%相比,TNBS+OVA+组小鼠死亡率为15%,死亡率明显下降(P<0.05)。与TNBS+OVA-组相比,TNBS+OVA+组小鼠结肠肉眼炎症程度明显减轻。(2)经血吸虫卵作用后,TNBS-OVA+组小鼠脾脏组织中Treg细胞比例较ctrl组显著增加(7.24±0.14% vs 5.53±2.29%,P<0.05),TNBS+OVA+组小鼠脾脏组织中Treg细胞比例较TNBS+OVA-组显著增加(6.56±3.79% vs 4.91±0.94%,P<0.05)。(3)经血吸虫卵作用后,TNBS-OVA+组小鼠脾脏组织中IL-10+细胞比例较ctrl组显著降低(21.07±5.86% vs 73.64±7.40%,P＜0.05);TNBS+OVA+组小鼠脾脏组织中IL-10+细胞比例较TNBS+OVA-组显著降低(9.21±1.47% vs 74.19±9.87%,P<0.05)。另,TNBS'OVA+组小鼠脾脏组织中IL-10+Breg细胞比例较ctrl组显著降低(21.03±5.45% vs 44.16±3.48%,P<0.05);TNBS+OVA+组小鼠脾脏组织中IL-10+Breg细胞比例较TNBS+OVA-组显著降低(8.69±1.54% vs 40.55±4.07%,P<0.05)。(4)经血吸虫卵作用后,TNBS-OVA+组小鼠脾脏组织中TGF-p+细胞比例较ctrl组显著降低(60.71±12.64%vs96.95±1.34%, P＜0.05);TNBS+OVA+组小鼠脾脏组织中TGF-β+细胞比例较TNBS+OVA-组显著降低(68.59±9.90% vs 97.57±0.97%,P<0.05)。另,TNBS-OVA+组小鼠脾脏组织中TGF-β+Breg细胞比例较ctrl组显著降低(16.81±3.28% vs43.68±2.83%, P＜0.05);TNBS+OVA+组小鼠脾脏组织中TGF-β+Breg细胞比例较TNBS+OVA-组显著降低(7.24±5.0% vs 48.41±3.98%,P<0.05)。 结论： (1)日本血吸虫卵能促进Treg细胞的表达,从而改善炎症性肠病的严重程度。 (2)本实验暂无法证实日本血吸虫卵可直接促进脾脏IL-10+Breg细胞及TGF-β+Breg细胞生成而改善小鼠实验性结肠炎的严重程度。

关键词： 补肾固表方   反复呼吸道感染   调节性T细胞   toll样受体4   核因子κB  

摘要： 1目的<br>　　 探讨补肾固表方对氢化可的松琥珀酸钠诱导免疫低下(肾阳虚)小鼠行为学、肺TLR4、/NF-κB信号通路和血浆CD4+CD25+foxp3+Treg的影响及其量效关系,进一步探讨补肾固表方对小儿反复呼吸道感染天然免疫和获得性免疫的调节机制。<br>　　 2方法<br>　　 利用氢化可的松琥珀酸钠连续腹腔注射BALB/c小鼠14天,诱导免疫低下(肾阳虚)模型,模拟反复呼吸道感染体质。随机分补肾固表方(BGR)大、小剂量组、核酪组、模型组,分别灌胃BGR大、小浓度煎剂、核酪口服液和蒸馏水,正常组灌胃蒸馏水。4周后评价小鼠行为,观察肺组织病理,免疫组化SABC法和Westernblot法检测肺组织TLR4和NF-κB(p65)表达,荧光定量PCR检测肺TLR4mRNA表达,流式细胞术检测血CD4+CD25+foxp3+Treg细胞含量。<br>　　 3结果<br>　　 3.1建立反复呼吸道感染(肾阳虚)模型小鼠<br>　　 小鼠反应迟钝、皮毛乏光、活动少、扎堆明显、食量下降、体重增加缓慢、阴囊皱缩等,符合肾阳虚标准,作为反复呼吸道感染模型。经BGR大、小剂量组和核酪灌胃4周后,各组小鼠皮毛转光泽、活动增多、扎堆减少、食量和体重增加,肾阳虚症状改善。<br>　　 3.2补肾固表方对反复呼吸道感染(肾阳虚)模型小鼠TLR4/NF-κB(p65)信号通路影响<br>　　 正常组支气管上皮和肺泡间隔细胞胞浆TLR4轻度表达,模型组表达明显下降(P＜0.05),BGR大剂量组表达增加(P＜0.05),小剂量组、核酪组未见明显变化(P＞0.05):Westem blot结果与免疫组化结果一致。模型组TLR4 mRNA明显减少(P＜0.05);BGR大、小剂量组表达增加(P＜0.05)。正常组肺泡上皮细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞胞浆和胞核均有少量NF-κB(p65)表达,模型组胞核内表达明显下降,低于正常组(P＜0.05),BGR大剂量组核内表达量增加,与模型组比较有差异(P＜0.05),大、小剂量组间未见差异,核酪组未见增强。Western blot结果与免疫组化结果一致。<br>　　 3.3补肾固表方对反复呼吸道感染(肾阳虚)模型小鼠血CD4+CD25+foxp3+Treg影响<br>　　 造模后CD4+CD25+foxp3+Treg明显上升至(9.55±1.32)％,与正常组有显著性差异(P＜0.05),BGR组含量下降(6.18±1.09)％,(P＜0.05);核酪口服液含量下降(6.32±1.13)％,与模型组比较均差异显著(P＜0.05)。<br>　　 4结论<br>　　 4.1利用氢化可的松琥珀酸钠建立免疫低下小鼠模型,肺组织天然免疫受体TLR4表达下降,CD4+CD25+foxp3+Treg抑制活性增强,符合小儿反复呼吸道感染肾阳虚证和免疫学变化特征,为客观评价补肾固表方疗效和药理机制奠定扎实的实验基础。<br>　　 4.2补肾固表方增强肾阳虚小鼠肺组织TLR4表达,提高小鼠气道天然免疫功能;增强肺组织NF-κB(p65)的表达,增强气道对病原体的炎症反应能力。<br>　　 4.3补肾固表方降低肾阳虚小鼠CD4+CD25+foxp3+Treg水平,减轻免疫抑制活性,影响Th1/Th2平衡,抑制Th2优势介导的呼吸道炎症反应,有利于激活Th1型免疫反应,降低病情程度。<br>　　 4.4从中医理论和现代免疫学角度分析,推测“正邪相争”与“免疫反应”,“肾藏精-精生髓-髓生免疫”,“补肾”与“调节免疫”,“卫气”与“天然免疫”,“肺主肃降”与‘TLR/NF-κB信号通路,“和解少阳”与调节性T细胞之间有着某种内在联系,创新了中医药理论。

关键词： 鼻息肉   调节性T细胞   金黄色葡萄球菌肠毒素B  

摘要： 目的： 1,探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcus enterotoxin B, SEB)在鼻息肉的发生,形成中的作用。 2,探讨SEB对鼻息肉的发生和形成与调节性T细胞的关系。方法： 选择患有鼻息肉组病人30例和对照组(肥厚性鼻炎及其他)病人25例,且在入院前明确无抗生素使用史取上述每一位患者后鼻孔分泌物进行细菌培养;同时采集各患者血清进行血清ELISA法测定其SEB抗体值;最后在鼻内镜手术过程中严格无菌操作取上述各患者病变组织及鼻粘膜,采用免疫组织化学法对其进行染色检测Foxp3的表达水平;最后进行统计学分析。 结果： 1,鼻息肉组金黄色葡萄球菌检出率明显高于对照组,差异有统计学意义。 2,鼻息肉组和对照组所测SEB抗体平均值存在差异,且差异有统计学意义。 3,鼻息肉组和对照组Foxp3阳性细胞的平均水平存在差异,且差异有统计学意义。 结论： 1,金葡菌肠毒素B在鼻息肉的形成中可能起作用。 2,鼻息肉患者较对照组的Foxp3细胞数目少,可能与SEB的下调作用有关。 3,鼻息肉的发病,可能与金葡菌感染后产生的SEB对调节性T细胞(Foxp3为其标志性细胞)的下调或抑制有关。为临床预防和治疗鼻息肉的发病提供一条新思路。

关键词： 日本血吸虫   CD4+CD25+ T细胞   树突状细胞   Sepharose4B  

摘要： 血吸虫病（schistosomiasis）是一种世界分布的人兽共患寄生虫病,目前该病仍是重要的公共卫生问题。血吸虫感染免疫是血吸虫病研究的前沿性领域和研究热点。目前,有关血吸虫抗原诱导宿主免疫应答机制和保护性免疫机制上已有一定的认识。已有动物实验表明,抗原诱导的免疫与抗原性质和免疫途径密切相关。近几年,CD4CD25调节性T细胞诱导的抑制性免疫应答被逐渐认识。CD4CD25T调节性细胞可来源于胸腺,也可由CD4CD25的前体细胞经抗原反复刺激转化而来,以及受IL-10和TGF-β诱导产生。本实验室前期实验确立了日本血吸虫感染慢性期免疫抑制状态与CD4CD25T细胞亚群间的关联,表明在自然感染中,CD4CD25T细胞的诱导产生是重要的免疫抑制因素。但至今为止,有关血吸虫感染中虫体、虫卵本身作为一个大的免疫原对免疫状态的影响并无报道。本课题结合上述资料,设计本研究,用Sepharose4B偶联rSj22.6/ 26GST抗原模拟童虫及其表面的Sj22.6膜蛋白,探讨Sepharose4B偶联抗原对树突状细胞和CD4CD25调节性T细胞的影响,为进一步研究童虫诱导的免疫应答特征提供实验证据。 首先建立Sepharose4B偶联rSj22.6/26GST抗原分子免疫小鼠模型,并设立对照组。以流式细胞术检测不同实验组小鼠脾脏组织中CD4CD25调节性T细胞相对比例的变化。运用免疫磁珠分离纯化获得各实验组小鼠脾脏组织的CD4CD25调节性T细胞,在抗CD3刺激下,采用同位素H-TdR掺入细胞增殖实验分析CD4CD25调节性T细胞对CD4CD25 T细胞增殖的抑制作用,ELISA法分析CD4CD25调节性T细胞对CD4CD25 T细胞分泌细胞因子的抑制作用。为进一步深入了解Sepharose4B偶联抗原对CD4CD25调节性T细胞的影响,采用流式细胞术检测Sepharose4B偶联抗原对树突状细胞（DCs）表型的影响,采用同位素H-TdR掺入细胞增殖实验分析Sepharose4B偶联抗原对DCs功能的影响。最后,用流式细胞术检测Sepharose4B偶联抗原负载DCs对CD4CD25调节性T细胞的影响。 本研究获得如下主要结果: 1. Sepharose4B偶联rSj22.6/26GST抗原免疫小鼠对CD4CD25调节性T细胞数量的影响。流式检测结果显示,与福氏佐剂乳化rSj22.6/26GST抗原组[（3.9±1.4）%]相比,Sepharose 4B偶联rSj22.6/26GST抗原免疫组[（5.0±0.8）%]CD4CD25 Foxp3 T细胞占脾细胞的比例明显增高（p<0.05）。本实验结果提示,Sepharose4B偶联抗原较福氏佐剂乳化抗原更易诱导CD4CD25调节性T细胞的数量增加。 2. Sepharose4B偶联rSj22.6/26GST抗原免疫小鼠对CD4CD25调节性T细胞抑制CD4CD25 T细胞增殖的影响。H-TdR掺入法检测结果显示,各实验组分离的CD4CD25调节性T细胞对正常小鼠分离的CD4CD25-T细胞均有抑制作用,在抗CD3的刺激下, Sepharose4B偶联抗原免疫组CD4CD25调节性T细胞抑制作用最强。本实验结果提示,来源于Sepharose4B偶联抗原免疫组的CD4CD25调节性T细胞与福氏佐剂乳化抗原免疫组相比,抑制CD4CD25 T细胞增殖能力更强。 3. Sepharose4B偶联rSj22.6/26GST抗原免疫小鼠对CD4CD25调节性T细胞抑制CD4CD25 T细胞分泌细胞因子的影响。ELISA检测培养上清中细胞因子结果显示,与单纯CD4CD25 T细胞组相比较,CD4CD25T细胞与CD4CD25 T细胞混合培养组在抗CD3刺激后,IFN-γ细胞因子分泌受到抑制,而IL-4的分泌水平无统计学差异。其中来源于Sepharose4B偶联抗原组的CD4CD25 T细胞抑制CD4CD25 T细胞分泌IFN-γ水平强于福氏佐剂乳化抗原组（p<0.05）。 4. Sepharose4B偶联rSj22.6/26GST抗原对DCs成熟的影响。体外抗原刺激DCs,流式检测DCs表型,结果显示,DCs经Sepharose4B偶联抗原刺激后,表面共刺激分子CD40、CD80、CD86表达率均低于单纯抗原组（p<0.05）,MHCⅡ表达率各组无统计学差异（p>0.05）;体内抗原免疫小鼠,引流腹股沟淋巴结,检测DCs数量,结果显示,Sepharose 4B偶联抗原组免疫小鼠,腹股沟淋巴结内DCs数量低于福氏佐剂乳化抗原组（p<0.05）。结果提示,Sepharose 4B偶联rSj22.6/26GST抗原组免疫小鼠不能有效地刺激DCs成熟。 5.

关键词： IMMUNOLOGICAL SELF-TOLERANCE   DIFFERENTIAL REQUIREMENT   RECEPTOR   INTERLEUKIN-2   ACTIVATION   INDUCTION   SELECTION   SURVIVAL   ANTIGEN   CARMA1  

摘要： Naturally derived regulatory T (Treg) cells are characterized by stable expression of the transcription factor Foxp3 and characteristic epigenetic imprinting at the Foxp3 gene locus. Here, we found that enhancing nuclear factor (NF)-kappa B activity via a constitutive active inhibitor of kappa B kinase beta (IKK beta) transgene in T cells led to increased number of Foxp3(+) cells in the thymus and can rescue Foxp3 expression in thymocytes deficient in other pleiotropic signaling molecules. Enhancing the signal strength of the NF-kappa B pathway also induced Foxp3 expression in otherwise conventionally selected T cells. NF-kappa B directly promoted the transcription of Foxp3, and upon T cell receptor (TCR) stimulation, c-Rel, a NF-kappa B family member, bound to Foxp3 enhancer region, which is specifically demethylated in natural Treg cells. Hence, NF-kappa B signaling pathway is a key regulator of Foxp3 expression during natural Treg cell development.

关键词： 调节性B细胞   炎症性肠病   白细胞介素10  

摘要： B细胞能够针对自身抗原产生相应的抗体,在自身免疫性疾病的发生和发展中发挥重要的作用。近年来的研究发现部分B细胞具有调节功能,这部分B细胞被命名为调节性B细胞,调节性B细胞可以分泌白细胞介素-10、转移生长因子-β1等细胞因子,中和病理性T细胞,或是直接与其它免疫细胞结合,抑制免疫应答。此综述初步探讨调节性B细胞在炎症性肠病中的作用及其可能机制。