关键词： 吸烟   晚期肺癌   肿瘤标志物   诊断   预后   化疗   调节性T淋巴细胞   调节性B淋巴细胞  

摘要： 第一部分：晚期肺癌患者的临床病理特征与预后分析目的为了更好地区分不同肺癌患者亚群,促进肺癌个体治疗的发展,本研究分析晚期肺癌患者的临床病理特征及影响晚期肺癌患者预后的因素。方法招募研究对象,包括接受一线化疗的晚期肺癌患者和健康志愿者对照、肺癌高危人群对照和AECOPD患者对照,采集肺癌患者的临床病理特征,记录血清肿瘤标志物变化,第1次疗效评估结果和定期电话随访肺癌患者生存信息。结果共招募到晚期肺癌患者36例,健康志愿者12例,肺癌高危人群和AECOPD患者各6例。男性肺癌患者50%以上有吸烟史,本研究中所有鳞癌和SCLC均为男性。本研究中7例女性肺癌患者均无主动吸烟史,且病理类型均为腺癌。晚期肺癌患者的首发症状无特征性,50%的患者以咳嗽为首发症状,4例患者体检发现肺癌;从出现首发症状到病理确诊为肺癌的中位间隔时间为1.8个月（0.5个月-60个月）。同时应用多种血清肿瘤标志物筛查比仅用一种血清肿瘤标志物检出的敏感性更高（88.6% vs 65.6%）。经过2个周期化疗后,第1次CT检查评估化疗疗效结果显示80.5%的肺癌患者（29/36）评估为有效（SD或PR）。化疗无效组（PD或死亡）的患者第1周期化疗后血清肿瘤标志均升高,而大部分化疗有效组的患者血清肿瘤标志物下降。接受一线化疗的晚期肺癌患者的中位生存时间为17个月。非吸烟患者、NSCLC患者以及第1次CT评估结果为SD或PR的晚期肺癌患者预后相对较好。结论吸烟仍是肺癌主要的危险因素。不同性别的肺癌患者存在差异。定期体检或可提高早期诊断。化疗前后血清肿瘤标志物变化可预测一线化疗疗效。非吸烟患者、NSCLC患者以及第1次CT评估结果为SD或PR的晚期肺癌患者预后相对较好。第二部分：晚期肺癌化疗前后调节性T、B淋巴细胞的动态变化目的分析晚期肺癌患者外周血CD4 （+） CD25 （+） CD127 （low） Tregs和CD 19 （+） IL-10 （+） Bregs特征和化疗前后Tregs和Bregs的动态变化及其与肺癌患者预后的关系,以为化疗联合免疫治疗提供依据。方法招募研究对象,包括接受一线化疗的晚期肺癌患者和健康志愿者对照、肺癌高危人群对照和AECOPD患者对照。分别采集晚期肺癌患者第1周期化疗前、第2周期化疗前和第3周期化疗前的外周血4m1,同时一次性抽取对照组外周血4ml;用红细胞裂解液分离获得PBMC;再用流式细胞仪检测Tregs和Bregs水平,分别以Tregs占CD4（+）T淋巴的百分比和Bregs占CD19（+）B淋巴细胞的百分比表示。晚期肺癌患者的临床资料同第一部分。结果共招募到晚期肺癌患者36例,健康志愿者12例,肺癌高危人群和AECOPD患者各6例。晚期肺癌患者外周血Tregs比例较肺癌高危组升高（3.37% vs 2.30%）,晚期肺癌患者外周血Tregs比例与健康对照组及AECOPD组之间无明显差别。肺癌患者外周血Bregs比例显著高于健康对照组（1.22% vs 0.05%）,但显著低于肺癌高危组（1.22% vs 3.46%）。经过第1周期化疗后,肺癌患者外周血Tregs比例显著下降（3.37% vs 2.42%）;再经过第2周期化疗后,外周血Tregs比例略有升高（2.82%）,但仍低于化疗前水平。化疗前后Bregs动态变化不明显。生存时间长的肺癌患者组化疗前外周血Tregs和Bregs比例低于生存时间短的肺癌患者组。Kaplan-Meier生存分析结果显示第1周期化疗后外周血Tregs比例下降组比第1周期化疗后外周血Tregs比例升高组预后更好。结论晚期肺癌患者外周血Bregs升高。化疗后外周血Tregs较化疗前明显下降。化疗前后Tregs的动态变化与晚期肺癌化疗疗效存在一定关系。

关键词： 拉喹莫德   实验性自身免疫性脑脊髓炎   Th细胞   调节性B细胞   细胞因子  

摘要： 目的：研究拉喹莫德（LQ）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的防治作用，探讨LQ对EAE防治作用的免疫学机制。方法：将75只雌性Wistar大鼠随机分成5组：正常对照组、EAE对照组、LQ低剂量组、LQ中剂量组、LQ高剂量组，每组动物均15只。在造模开始的前三天，即对LQ低、中、高剂量组进行干预，分别予以LQ0.03mg/kg·d、0.06mg/kg·d、0.12mg/kg·d灌胃，正常对照组及EAE对照组予以生理盐水2ml/d灌胃。后使用粗制髓鞘碱性蛋白（MBP）加完全弗式佐剂皮下注射制作EAE模型，正常对照组皮下注射等量完全福氏佐剂。在造模后继续对LQ各剂量组进行治疗，连续一周。每天对各组Wistar大鼠进行神经功能障碍评分及记录，以神经功能障碍评分连续三天无加重、四肢瘫痪或濒临死亡时作为发病高峰期。同时记录Wistar大鼠的发病潜伏期和进展期。在发病高峰期处死动物，未发病和正常对照组在造模4周后处死。留取大鼠脑脊髓组织、眶静脉血和脾脏组织。大鼠脑脊髓组织作HE染色后行光镜观察，通过酶联免疫吸附法（ELISA）测定外周血单个核细胞（PBMC）分泌白细胞介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-17（IL-17）能力，通过流式细胞仪测定脾脏组织调节性B细胞（Bregs）的比例，通过ELISA测定脾脏细胞培养上清液中白细胞介素-10（IL-10）、转化生长因子-β（TGF-β）含量。结果：（1）各组实验大鼠发病情况：正常对照组均无大鼠发病;EAE对照组大鼠全部发病，发病率为100%;LQ低、中、高剂量防治组发病率分别为80%、66.67%、60%。EAE对照组发病的潜伏期为10.27±1.67天，LQ低、中、高剂量组大鼠的发病潜伏期均有不同程度的延长，分别为15.67±1.95天、17.27±1.49天、20.73±1.58天，与EAE对照组比较，差异具有统计学意义（P<0.01），且呈剂量依赖关系。EAE对照组发病进展期为6.47±1.19天，LQ低、中、高剂量组的发病进展期分别为5.40±1.12天、4.20±1.15天、3.00±0.93天，较EAE对照组时间缩短（P<0.01或P<0.05），呈剂量依赖关系。EAE对照组发病高峰期时神经功能障碍评分为3.73±1.39，LQ低、中、高剂量组发病高峰期时神经功能障碍评分较EAE对照组低，分别为2.40±1.72、1.60±1.60、1.07±1.22，LQ高、中剂量组与EAE对照组相比差异具有统计学意义（P<0.01），LQ低剂量组发病高峰期神经功能障碍评分较EAE对照组低，但差异不具有统计学意义（P>0.05）;高剂量组与低剂量组相比差异具有统计学意义（P<0.05），LQ高剂量组发病高峰期神经功能障碍评分与LQ中剂量组相比差异不具有统计学意义（P>0.05）;同时中剂量组与低剂量相比差异也不具有统计学意义（P>0.05）。（2）各组实验大鼠脑脊髓组织病理学变化：正常对照组大鼠脑脊髓组织无病理学改变;EAE对照组和LQ低、中、高剂量组大鼠脑脊髓组织都出现了不同程度的白质脱髓鞘改变，大量炎性细胞聚集在脑和脊髓实质内的血管周围，典型者形成“袖套”样改变，伴有血管充血。聚集细胞以淋巴细胞为主，伴少量单核细胞。LQ各剂量组的白质脱髓鞘和炎性细胞侵润程度较EAE对照组减轻，且高剂量组减轻效果更明显。（3）各组实验大鼠发病高峰期外周血PBMC分泌IL-4、IL-17、INF-γ能力和IL-4/INF-γ值：EAE对照组PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值较正常对照组明显减低（P<0.01），分泌IL-17、INF-γ能力较正常对照组升高（P<0.01）;LQ低、中、高剂量组PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值较EAE对照组升高（P<0.01），分泌IL-17、INF-γ能力较EAE对照组减低（P<0.01或P<0.05）;LQ高、中剂量组PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值较LQ低剂量组升高（P<0.01），分泌IL-17、INF-γ能力较LQ低剂量组减低（P<0.01或P<0.05）;LQ高剂量组PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值较LQ中剂量组升高（P<0.01），分泌IL-17、INF-γ能力较LQ中剂量组减低（P<0.01或P<0.05）。（4）各组实验大鼠发病高峰期脾脏组织中Bregs的比例及培养上清液中IL-10、TGF-β的含量：EAE对照组脾脏组织中的IL-10+Bregs、TGF-β+Bregs比例和脾脏培养上清液中IL-10、TGF-β含量较正常对照组减少（P<0.01）;LQ低、中、高剂量组脾脏组织中IL-10+Bregs、TGF-β+Bregs比例和脾脏培养上清液中IL-10、TGF-β含量较

关键词： 调节性T细胞   Toll样受体4   NF-κB途径淋巴细胞   脂多糖   抑制功能  

摘要： 目的:天然调节性T细胞(nTregs,即CD4+CD25+Tregs)是具有显著免疫抑制功能的T细胞,不同种类的TLR活化后对其具有不同的作用。为此,体外研究nTregs上膜型TLR4与不同配体结合后分泌细胞因子的变化及其对该细胞抑制功能的影响,初步探讨在不同微环境中TLR4影响nTregs功能的机制。<br>　　方法:(1)采用磁珠分选出健康人外周血的CD4+CD25+Tregs,并用流式细胞术检测分选的纯度。(2)实验分为两组,正常CD4+CD25+Tregs(即Non anti-TLR4组)和经抗TLR4单抗封闭的CD4+CD25+Tregs(即anti-TLR4组),两组细胞分别加入高、中、低不同浓度的LPS(10、1、0.1μg/ml)、HMGB1(1、0.1、0.01μg/ml)刺激培养,同时分别设不加LPS或HMGB1作为对照。采用实时定量PCR检测各组中IL-1β、IL-10、IFN-γ、TGF-β四种细胞因子的RNA表达水平,同时用ELISA检测细胞培养上清中上述四种细胞因子的含量。(3)流式细胞术检测经过1μg/ml及10μg/ml LPS、0.1μg/ml及1μg/ml HMGB1不同处理的两组CD4+CD25+Tregs与CD4+T效应细胞混合培养后CD4+T细胞的增殖水平。(4)Western-blotting检测经过1μg/ml LPS及1μg/ml HMGB1刺激后两组CD4+CD25+Tregs的胞浆及胞核蛋白中NF-κB的表达水平。<br>　　结果:(1)流式细胞术检测分选得到的CD4+CD25+Tregs纯度>82％(84.52±2.10%)(2)HMGB1刺激的CD4+CD25+Tregs在Non anti-TLR4组中IL-1β、IL-10及TGF-β的RNA水平及蛋白含量均较无HMGB1刺激的对照组明显降低(P<0.05),而anti-TLR4组中较相应对照组显著增高(P<0.05);IFN-γ的RNA水平及蛋白含量变化趋势与之相反,在Non anti-TLR4组中较对照组增加(P<0.05),而在anti-TLR4组中明显低于相应对照组(P<0.05)。LPS刺激的CD4+CD25+Tregs在Non anti-TLR4组中IL-1β及IL-10的RNA表达水平和蛋白含量均较无LPS刺激的对照组显著增加(P<0.05),而在anti-TLR4组中明显低于相应对照组(P<0.05);IFN-γ及TGF-β在Non anti-TLR4组中RNA表达水平和蛋白含量均较对照组显著降低(P<0.05),而在anti-TLR4组中仅IFN-γ的RNA水平与TGF-β明显高于相应对照组(P<0.05),IFN-γ的蛋白含量仍低于对照组(P<0.05)。(3)CD4+CD25+Tregs显著抑制CD4+T细胞的增殖,与CD3/CD28抗体活化的阳性对照组相比有差异(P<0.05)。经HMGB1刺激的Non anti-TLR4组中,CD4+T细胞增殖指数较无HMGB1刺激的对照组略微增高(P<0.05);anti-TLR4组中,CD4+T细胞增殖指数较无HMGB1刺激的相应对照组明显降低(P<0.05)。然而,经LPS刺激的Non anti-TLR4组中,CD4+T细胞增殖指数较无LPS刺激的对照组明显降低(P<0.05);anti-TLR4组中,CD4+T细胞增殖指数较相应对照组显著增加(P<0.05),较阳性对照组亦明显增加(P<0.05)。(4)Western-blotting结果显示:用1μg/ml HMGB1和LPS分别刺激两组CD4+CD25+Tregs后,Non anti-TLR4组胞浆蛋白中NF-κBp65的含量较无刺激对照组降低,而胞核中则相应增加;anti-TLR4组则无明显改变。<br>　　结论:在不同微环境中,CD4+CD25+Tregs表面的膜型TLR4具有不同的作用,继而对CD4+CD25+Tregs的抑制功能进行调节。当经TLR4的内源性配体HMGB1活化时, CD4+CD25+Tregs以分泌促炎性细胞因子IFN-γ为主,其抑制功能减弱;当与外源性配体LPS相互作用时,IL-1β和IL-10的含量同时增多,其抑制功能增强;二者均与NF-κB信号分子的活化相关。综上诉述,TLR4通过活化NF-κB途径对调节性T细胞的抑制功能起作用。

关键词： CD4(+) T-CELLS   B10 CELLS   IMMUNE SURVEILLANCE   CD20 IMMUNOTHERAPY   LYMPHOMA DEPLETION   MICE   AUTOIMMUNITY   METASTASIS   EXPRESSION   INDUCTION  

摘要： Regulatory B cells (Bregs), a newly described subset of B cells, have been proved to play a suppressive role in immune system. Bregs can inhibit other immune cells through cytokines secretion and antigen presentation, which give them the role in the pathogenesis of autoimmune diseases and cancers. There are no clear criteria to identify Bregs; different markers were used in the different experimental conditions. Massive researches had described the functions of immune cells such as regulatory T cells (Tregs), dendritic cells (DCs), and B cells in the autoimmune disorder diseases and cancers. More and more researches focused on the roles of Bregs and the cytokines such as Interleukin-10 (IL-10) and transforming growth factor beta (TGF-beta) secreted by Bregs. The aim of this review is to summarize the characteristics of Bregs and the roles of Bregs in cancer.

关键词： IN-VITRO PROLIFERATION   ALLOGRAFT-REJECTION   VIRUS   INFECTION   RIBAVIRIN   HCV   EXPRESSION   TOLERANCE   TRANSCRIPTION   COMBINATION  

摘要： The TRANSPEG study was a prospective study to assess the efficacy of antiviral therapy in patients with a recurrent hepatitis C virus (HCV) after liver transplantation. The influence of regulatory T-cells (Tregs) on the response to antiviral therapy was analyzed. Patients were considered as a function of their sustained virological response (SVR) at 18 months after treatment initiation. A transcriptomic analysis was performed to assess Treg markers (Tr1 and FoxP3(+)) in serum, PBMC, and liver biopsies. 100 patients had been included in the TRANSPEG study. Data from 27 of these patients were available. The results showed that the expression of CD49b (a predominant marker of Tr1) before the introduction of antiviral therapy was significantly associated with SVR. Responders displayed lower serum levels of CD49b than nonresponders (P < 0.02). These findings were confirmed in PBMC and liver biopsies even if in a nonsignificant manner for the limited number of samples. The assessment of CD49b levels is thus predictive of the response to antiviral therapy. This data suggests that CD49b may be a marker of the failure of the immune response and antiviral therapy during HCV recurrence. The assessment of CD49b could help to select patients who require earlier and more intensive antiviral therapy.

关键词： 淋巴瘤,大B细胞,弥漫性   调节性T细胞   流式细胞术  

摘要： 目的探讨外周血CD4+CD25highCD127low调节性T细胞（Treg细胞）水平与弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的关系。方法采用流式细胞术检测51例初治DLBCL患者、30例健康成年人外周血Treg细胞水平,分析Treg细胞与DLBCL及预后的关系。结果初诊DLBCL患者外周血Treg细胞水平为（6.9±4.9）%,高于健康对照组的（5.1±2.6）%,差异有统计学意义（P<0.05）;ⅠⅡ期与ⅢⅣ期DLBCL患者组间外周血Treg细胞水平差异无统计学意义（P=0.12）;长期缓解组外周血Treg细胞水平低于预后不良组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 Treg细胞为免疫抑制细胞,DLBCL患者体内存在免疫抑制,Treg细胞水平与DLBCL患者预后相关。

关键词： 免疫性血小板减少症   CD19+CD24hiCD38hiB细胞   转移生长因子-β1   白介素-10  

摘要： 目的免疫性血小板减少症（ITP）是最常见的获得性自身免疫性出血性疾病，约占出血性疾病的30％，其发病受多种因素的影响。了解免疫性血小板减少症患者治疗前后外周血中调节性B细胞（Bregs）的表达率及相关细胞因子白介素-10（IL-10）、转移生长因子-β1（TGF-β1）的表达，探讨调节性B细胞在免疫性血小板减少症发病及临床的意义。 方法研究对象为35名安徽省立医院门诊及住院初次明确诊断的ITP患者，并且无明确的其他疾病。中位年龄为35岁，男15名，女20名，并将ITP患者分为治疗前和治疗后，治疗前血小板数目<30×109/L,治疗后血小板数目>50×109/L。治疗均应用大剂量地塞米松（40mg/d×4d）。对照组为从安徽省立医院预防保健中心随机抽取的与实验组年龄及性别相匹配的20名志愿者，既往无自身免疫性疾病或恶性疾病病史。应用流式细胞术分别检测ITP患者治疗前后及正常对照组外周血的CD19+CD24hiCD38hiB细胞的表达率及RT-PCR方法检测其IL-10mRNA、TGF-β1mRNA细胞因子的表达水平。 结果初诊ITP组外周血CD19+CD24hiCD38hiB细胞的表达率（1.844±0.385）明显低于健康对照组（2.850±0.784），两者差异有统计学意义（P=0.000<0.05）;而经治疗后血小板升高的ITP患者外周血CD19+CD24hiCD38hiB细胞的表达率（2.326±0.449）高于治疗前（1.844±0.385），两者相比有统计学差异（P=0.000<0.05）;但治疗后的ITP患者CD19+CD24hiCD38hiB细胞表达率仍低于健康对照组，且有统计学差异（P=0.004<0.05）;初诊ITP患者外周血IL-10mRNA表达（0.174±0.181）与健康对照组（0.320±0.279）相比明显下降，有统计学差异（P=0.023<0.05），ITP治疗后血小板升高患者外周血IL-10mRNA的表达（0.259±0.149）明显高于治疗前（0.174±0.181），有统计学差异(P=0.036<0.05)，与健康对照组相比，治疗后ITP患者外周血IL-10mRNA的表达仍明显降低，且有统计学差异(P=0.042<0.05);初诊ITP患者外周血TGF-β1mRNA的表达水平（2.026±1.031）明显高于健康对照组（0.948±0.907），有统计学差异（P=0.000<0.05），ITP患者经治疗后TGF-β1mRNA的表达（1.605±0.678）下降，有统计学差异(P=0.048<0.05)，与健康对照组相比治疗后的ITP患者外周血TGF-β1mRNA的表达明显升高，差异有统计学意义(P=0.004<0.05)。CD19+CD24hiCD38hiB细胞的数目与IL-10的表达在ITP患者中呈正性线性关系，有统计学意义(P=0.001<0.05)。 结论本次研究显示ITP患者外周血CD19+CD24hiCD38hiB细胞及相关细胞因子IL-10的表达明显下降，表明调节性B细胞与调节T细胞一样，在ITP发病中发挥负性调节作用，可能是通过体液免疫及反馈作用于T淋巴细胞亚群在ITP的发病中发挥重要作用的。

关键词： 肝炎,乙型,慢性   B淋巴细胞,调节性   T淋巴细胞,调节性   白细胞介素10   抗原,CD19  

摘要： 目的分析慢性乙型肝炎患者外周血中IL-10~+CD19~+调节性B淋巴细胞(Breg)的表达及其免疫调节机制。方法病例对照研究。收集2011年6月—2012年10月常熟市第二人民医院住院患者,急性乙型肝炎(AHB)患者28例,慢性乙型肝炎(CHB)患者31例和健康对照25名。分离外周血单个核细胞(PBMC),经含CpG序列的寡脱氧核苷酸CpG ODN 2006和佛波醇酯(PMA)体外作用后,流式细胞术分析IL-10~+CD19~+Breg、CD4~+CD25调节性T淋巴细胞(Treg)的表达及其相关性,ELISA分析培养上清IL—10水平。Mann—Whitney U检验分析两组间差异,Spearman相关分析两组连续变量间的相关性。结果 CHB组外周血Breg[1.28%(1.05%~2.20%)]高于AHB组[0.87%(0.55%~1.22%)]和HCs组[0.89%(0.51%~1.37%)](P值分别为0.001和0.006),AHB和HCs组间差异无统计学意义(P=0.669)。CpG ODN 2006和PMA作用后CHB组Breg[14.30%(10.70%~16.70%)]较AHB组[10.30%(7.05%~13.30%)]和HCs组[10.40%(6.85%~12.60%)]显著升高(P值分别为0.003和0.001);CHB组Treg[5.80%(4.20%~9.10%)]较AHB组[4.05%(2.53%~5.40%)]和HCs组[4.50%(2.55%~5.50%)]也显著增高(P值分别为<0.001和0.005)。AHB和HCs组间差异均无统计学意义(Breg:P=0.796;Treg:P=0.227)。Spearman相关性分析发现CHB组Breg与Treg存在正相关关系(r=0.50,P=0.004),而AHB和HCs组无此相关性(r=-0.15,P=0.462;r=0.09,P=0.669)。CHB组IL-10表达高于AHB和HCs组(P<0.001)。AHB和HCs组间差异无统计学意义(P=0.341),Spearman相关性分析表明CHB组IL-10与Breg存在正相关关系(r=0.409,P=0.005)。结论 B淋巴细胞Breg和调节性T淋巴细胞在慢性乙型肝炎患者中表达升高,Breg可能通过IL-10的分泌在HBV慢性感染过程中发挥免疫调节作用。

关键词： 重症肌无力   胸腺切除术   胸腺瘤   长期疗效   完全稳定缓解   胸腺   调节性B细胞   调节性T细胞   外周血   CD5+CD1d+CD19+Breg细胞   CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞  

摘要： 第一部分 重症肌无力患者胸腺切除术远期疗效及影响因素分析 目的 分析重症肌无力(MG)患者胸腺切除术的远期疗效及影响疗效的相关因素,并比较不同胸腺病理类型患者的临床特点和预后差别。 方法 回顾性分析1984年1月-2010年12月我院胸腺切除术后规律随访的306例MG患者,以完全稳定缓解(CSR)和广义临床缓解(CSR+PR+MM)为疗效指标,对疗效相关影响因素进行单因素Kaplan-Meier和多因素Cox比例风险回归分析;并对其中174例MG伴胸腺瘤(T-MG)和132例MG不伴胸腺瘤(NT-MG)患者的临床特点和预后进行方差分析或秩检验。 结果 306名患者中女性151名,男性155名,平均起病年龄为31.54岁,术前平均症状持续时间为33.43月,胸腺切除术时平均年龄为34.16岁,术前MGFA分级Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ分别为116(37.91%),117(38.24%),53(17.32%),3(0.98%),17(5.56%),其中274例采用正中劈胸扩大胸腺切除术,32例采用胸腔镜胸腺切除术(VATS)。围手术期死亡率为2.94%(9/306),余297例患者平均随访时间为103月,胸腺切除术总体有效率为81.14%,其中81例达到完全稳定缓解(CSR)(27.27%),172例达到广义临床缓解(CSR+PR+MM)(57.91%),69例症状显著缓解(Improved)(23.23%)。在单因素分析中,胸腺切除术时年龄<40岁(P=0.034),术前MGFA分型I型(P=0.001)和MG不伴胸腺瘤(P=0.019)与CSR正相关;同时术前MGFA分型I型(P=0.004),无伴发疾病(P=0.022)和MG不伴胸腺瘤(P=0.019)与广义临床缓解(CSR+PR+MM)正相关;多因素分析中,MGFA分型全身型(OR:2.088,95%CI:1.339-3.265,P=0.001)和有伴发疾病(OR:1.668,95%CI:1.072-2.549,P=0.023)是胸腺切除术后临床缓解的独立危险因素。NT-MG患者完全稳定缓解率和临床缓解率显著高于T-MG患者(CSR:33.33%vs22.42%,P=0.036;临床缓解率：64.39%vs52.72%,P=0.043),而且,与T-MG患者相比,更多的NT-MG患者从胸腺切除术中获益(86.36%vs76.97%,P=0.04)。此外,T-MG患者临床恶化率和死亡率明显高于NT-MG(临床恶化率：15.76%vs6.06%,P=0.009;死亡率：11.49%vs3.03%,P=0.004)。9例围手术期死亡患者均为T-MG,随访阶段9例T-MG(5.45%)死于MG危象,而NT-MG仅2例(1.52%)。 结论 胸腺切除术是治疗MG患者的有效手段,可获得较高的长期临床缓解率,术前MGFA分型全身型和有伴发疾病是术后临床缓解的独立危险因素。T-MG比NT-MG患者临床症状相对更严重,且长期预后不乐观,因此需要优化对T-MG患者的术前评估和围手术期准备以降低患者围手术期死亡率并提高术后长期生存率。即使患者术后较长时间内达到完全临床缓解,医生仍需严格把握停药指征以防复发。 第二部分 重症肌无力患者胸腺调节性B细胞和T细胞比例和相关分子表达的研究 目的 1.比较CD5+CD1d+CD19+Breg细胞和CD4+CD25+CD127low/Treg细胞在MG不 同胸腺病理类型间的比例差异。 2.比较MG胸腺组织中调节性B细胞和T细胞功能相关分子的表达差异。 方法 1.采用免疫组化法检测10例MG增生胸腺、14例MG伴胸腺瘤、4例MG萎缩胸腺和15例正常对照(7例儿童和8例成人)胸腺组织CD19、CD5、CD25、 Foxp3分子的分布及表达。 2.采用流式细胞术分析6例MG增生胸腺、12例MG伴胸腺瘤、5例MG萎缩胸腺和13例正常对照(7例儿童和6例成人)胸腺CD5+CD1d+CD19+Breg细胞和CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞的比例变化。 3.采用Real time PCR法分析10例MG增生胸腺、16例MG伴胸腺瘤和17例正常对照胸腺组织中调节性B细胞和调节性T细胞功能相关分子转录水平的差异。 结果 1.成人萎缩胸腺CD19少量散在分布于胸腺髓质,而儿童正常胸腺可见大量CD19分布于胸腺髓质。MG增生胸腺内CD19分布范围广泛,表达显著增加,主要表达在淋巴滤泡内,尤其在生发中心和髓质胸腺小体周围呈簇状分布;正常对照胸腺组织中CD5分布范围广泛;MG增生胸腺内CD5分布范围也广泛,特征性出现生发中心明区的阳性表达,淋巴滤泡边缘带也可见CD5阳性表达;MG胸腺瘤组织内CD19和CD5的表达与胸腺瘤分型相关,伴有淋巴滤泡形成的B1型胸腺瘤患者,可见淋

关键词： 慢性特发性血小板减少性紫癜   CD4+   T细胞   调节性B细胞   白细胞介素-10  

摘要： 本研究检测慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)患者治疗前后外周血Breg亚群与CD4+T细胞数量、相关细胞因子的变化及其相关性,探讨它们在CITP发病机制中的作用。选择35例CITP患者,分离外周血单个核细胞(PBMNC),采用流式细胞术检测糖皮质激素治疗前后外周血Th1、Th17、Th22以及Breg细胞亚群的比例变化;运用ELISA法检测治疗前后PBMNC培养液上清中IFN-γ、IL-17、IL-22以及IL-10水平,与同期选择的健康对照组比较。结果表明,CITP患者治疗前外周血中Th1、Th17、Th22细胞亚群的比例均升高(P<0.05),调节性B细胞(Breg)的比例降低,差别均有统计学意义(P<0.05),而治疗后与正常对照组比较,差别均无统计学意义(P>0.05);CITP患者治疗前PBMNC培养液上清中细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-22水平升高,IL-10的水平低于健康对照组,差别均有统计学意义(P<0.05),而治疗后与正常对照组比较,差别均无统计学意义(P>0.05)。患者Breg细胞的比例变化与培养液上清中细胞因子IL-10表达水平呈正相关(r=0.719,P<0.05),Breg细胞与Th1、Th17、Th22细胞亚群的变化呈负相关性,IL-10水平与IFN-γ、IL-17、IL-22水平也呈负相关性。结论:调节性B细胞比例及IL-10的水平下调可能参与CITP患者的CD4+T细胞免疫调节紊乱机制,可为其临床免疫调节治疗提供新的靶点与新思路。