关键词： regulatory T cells   Foxp3   CD72   SYSTEMIC-LUPUS-ERYTHEMATOSUS   T-CELLS   B10 CELLS   MICE   DISEASE   AUTOIMMUNITY   IL-10   ACTIVATION   INTERLEUKIN-35   TOLERANCE  

摘要： This study tested the hypothesis that besides the spleen, LNs, peripheral blood, and thymus contain a regulatory IL-10-producing CD19(+) CD5(+)CD1d(high) B cell subset that may play a critical role in the maintenance of immune homeostasis. Indeed, this population was identified in the murine thymus, and furthermore, when cocultured with CD4(+) T cells, this population of B cells supported the maintenance of CD4(+)Foxp3(+) T-regs in vitro, in part, via the CD5-CD72 interaction. Mice homozygous for Cd19(Cre) (CD19(-/-)) express B cells with impaired signaling and humoral responses. Strikingly, CD19(-/-) mice produce fewer CD4(+)Foxp3(+) T-regs and a greater percentage of CD4(+)CD8(-) and CD4(-)CD8(+) T cells. Consistent with these results, transfer of thymic CD19(+)CD5(+)CD1d(hi) B cells into CD19(-/-) mice resulted in significantly up-regulated numbers of CD4(+)Foxp3(+) T-regs with a concomitant reduction in CD4(+)CD8(-) and CD4(-)CD8(+) T cell populations in the thymus, spleen, and LNs but not in theBMof recipient mice. In addition, thymic CD19(+)CD5(+)CD1d(hi) B cells significantly suppressed autoimmune responses in lupus-likemice via up-regulation of CD4(+)Foxp3(+) T-regs and IL-10-producing B-regs. This study suggests that thymic CD19(+)CD5(+)CD1d(hi)IL-10(+) Bregs play a critical role in the maintenance of immune homeostasis.

关键词： SYSTEMIC-LUPUS-ERYTHEMATOSUS   PRIMARY SJOGRENS-SYNDROME   CLASS-II   SS-B   NUCLEAR AUTOANTIGEN   POSITIVE SELECTION   CLONAL DELETION   IN-VIVO   ANTI-LA   RECEPTOR  

摘要： A human La/Sjogren's syndrome-B (hLa)-specific TCR/hLa neo-self-Ag double-transgenic (Tg) mouse model was developed and used to investigate cellular tolerance and autoimmunity to the ubiquitous RNA-binding La Ag often targeted in systemic lupus erythematosus and Sjogren's syndrome. Extensive thymic clonal deletion of CD4(+) T cells occurred in H-2(k/k) double-Tg mice presenting high levels of the I-E-k-restricted hLa T cell epitope. In contrast, deletion was less extensive in H-2(k/b) double-Tg mice presenting lower levels of the epitope, and some surviving thymocytes were positively selected as thymic regulatory T cells (tTreg). These mice remained serologically tolerant to hLa and healthy. H-2(k/b) double-Tg mice deficient of all endogenous Tcra genes, a deficiency known to impair Treg development and function, produced IgG anti-hLa autoantibodies and displayed defective tTreg development. These autoimmune mice had interstitial lung disease characterized by lymphocytic aggregates containing Tg T cells with an activated, effector memory phenotype. Salivary gland infiltrates were notably absent. Thus, expression of nuclear hLa Ag induces thymic clonal deletion and tTreg selection, and lymphocytic infiltration of the lung is a consequence of La-specific CD4(+) T cell autoimmunity.

关键词： TRANSCRIPTION FACTOR FOXP3   CUTTING EDGE   ACTIVATION THRESHOLD   CD28 COSTIMULATION   INTERLEUKIN-2   AUTOIMMUNITY   DEGRADATION   INDUCTION   COMPLEXES  

摘要： CD28 costimulation is essential for the development of thymic-derived CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) regulatory T cells ("tTregs"). E3 ubiquitin ligase Cbl-b has been shown to regulate CD28 dependence of T cell activation. In this paper, we report that the loss of Cbl-b partially but significantly rescues the defective development of tTregs in Cd28(-/-) mice. This partial rescue is independent of IL-2. Mechanistically, Cbl-b binds to Foxp3 upon TCR stimulation and, together with Stub1, targets Foxp3 for ubiquitination and subsequently degradation in the proteasome. As Cbl-b self-ubiquitination and proteasomal degradation is impaired in Cd28(-/-) T cells, the defective development of tTregs in Cd28(-/-) mice may in part be due to increased Foxp3 ubiquitination and degradation targeted by Stub1 and Cbl-b. Treating Cd28(-/-) mice with a proteasome inhibitor completely rescues defective tTreg development in these mice. Therefore, Cbl-b, together with Stub1, ubiquitinate Foxp3, and regulate tTreg development.

关键词： atherosclerosis   inflammation   leukocytes   RECEPTOR   ACTIVATION   NEOGENESIS   GENERATION  

摘要： Background-The atheromodulating activity of B cells during the development of atherosclerosis is well documented, but the mechanisms by which these cells are regulated have not been investigated. Methods and Results-Here, we analyzed the contribution of Qa-1-restricted CD8(+) regulatory T cells to the control of the T follicular helper-germinal center B-cell axis during atherogenesis. Genetic disruption of CD8(+) regulatory T cell function in atherosclerosis-prone apolipoprotein E knockout mice resulted in overactivation of this axis in secondary lymphoid organs, led to the increased development of tertiary lymphoid organs in the aorta, and enhanced disease development. In contrast, restoring control of the T follicular helper-germinal center B-cell axis by blocking the ICOS-ICOSL pathway reduced the development of atherosclerosis and the formation of tertiary lymphoid organs. Moreover, analyses of human atherosclerotic aneurysmal arteries by flow cytometry, gene expression analysis, and immunofluorescence confirmed the presence of T follicular helper cells within tertiary lymphoid organs. Conclusions-This study is the first to demonstrate that the T follicular helper-germinal center B-cell axis is proatherogenic and that CD8(+) regulatory T cells control the germinal center reaction in both secondary and tertiary lymphoid organs. Therefore, disrupting this axis represents an innovative therapeutic approach.

关键词： 调节性B细胞   B10细胞   自身免疫性疾病   肿瘤   免疫调节  

摘要： B淋巴细胞通过分泌抗体和抗原递呈等在机体免疫应答中一直发挥着重要作用。近来研究发现了一群具有调节功能的B淋巴细胞亚群——调节性B细胞（Breg）。根据Breg分泌细胞因子不同，Breg分为3种不同亚型：分泌IL-10的BIO，分泌TGF—β的Br3和表达FoxP3的FoxP3＋Breg。Breg在多种自身免疫性疾病、寄生虫感染和肿瘤等疾病中发挥着重要的免疫抑制作用。研究Breg的分类、起源与分化发育、分化发育相关的信号通路、表型特征及其在不同种类疾病中的作用可以全面深入地了解Breg的特征和相互作用的机制，因而具有重要意义。

关键词： 调节性B细胞   来源   分化   自身免疫病  

摘要： B细胞的主要功能是分泌抗体和呈递抗原,并以此起始和活化免疫系统发挥正性调节作用。新近研究表明,一类具有负性免疫调节功能的B细胞亚群——调节性B细胞(Gregs)可通过细胞间直接接触和分泌白细胞介素10等方式下调免疫应答。Bregs在许多疾病中发挥着重要的调节作用。Bregs的发现、起源、分化将为全面、深入了解自身免疫病免疫耐受的机制,及寻找更合理的自身免疫病治疗方法提供理论依据和新的研究方向。

关键词： 调节性B细胞   B10细胞   风湿免疫性疾病   系统性红斑狼疮   非肥胖性糖尿病   类风湿性关节炎  

摘要： 人类B淋巴细胞主要通过分泌特异性抗体及细胞因子发挥免疫调节功能。调节性B细胞拥有正向和负向免疫调节作用,通过分泌不同的细胞因子或细胞接触等机制,完成下调免疫反应的作用。调节性B细胞在风湿免疫性疾病发生、发展中起着重要的免疫抑制作用,可能为风湿免疫病的治疗带来新希望。

关键词： 癌症   调节性B细胞   肿瘤免疫  

摘要： B淋巴细胞是人体特异性免疫的重要组成部分,其主要功能是抗原呈递以及分泌抗体。新近研究发现,调节性B细胞(Bregs)通过分泌白细胞介素10和转化生长因子β1等细胞因子作用于免疫系统,在炎症、自身免疫性疾病以及癌症进展、转归和预后中发挥作用。了解Bregs在癌症中的作用机制对临床治疗癌症具有重要意义。该文就Bregs与癌症的关系及其研究进展予以综述。

关键词： 原发性胆汁性肝硬化   胸腺B细胞   调节性T细胞发育   致病机制   动物模型  

摘要： 第一部分胸腺B细胞在Treg发育中的作用及机制研究\n 调节性T细胞(Treg)是一群对于维持机体免疫耐受和免疫稳态至关重要的CD4+T细胞，特异性表达转录因子FoxP3。Treg参与多种疾病的发病，并在其中发挥重要作用，如自身免疫性疾病、感染、过敏和肿瘤等。因为Treg细胞在免疫调节中扮演了重要角色，将Treg细胞作为疾病治疗的靶点极具临床应用前景，而探究Treg细胞的发育机制无疑为Treg细胞用于临床疾病治疗提供重要的基础理论参考。\n 外周免疫系统中的FoxP3+Treg细胞根据其来源的不同可以分为外周诱导产生的Treg细胞(p-Treg)和胸腺来源的Treg细胞(t-Treg)，p-Treg细胞是在外周由经典的非Treg的CD4+T细胞在特定免疫微环境中诱导产生，而t-Treg细胞是在胸腺中由CD4单阳性胸腺细胞发育而来，t-Treg是构成外周FoxP3+Treg细胞的主要成分。\n t-Treg在胸腺中的发育主要分为两个阶段:第一个阶段是从CD4单阳性T细胞在经过TCRβ-MHCⅡ和CD28-CD80/86选择和刺激后生成CD25+ FoxP3-Treg前体细胞;第二个阶段是从Treg前体细胞向成熟Foxp3+Treg细胞的转化，这个过程是细胞因子IL-2所依赖的。在t-Treg的发育过程中，多种抗原递呈细胞，如:树突状细胞，胸腺髓质区上皮细胞促进了t-Treg的发育和分化。胸腺B细胞也是正常存在于胸腺组织的一种抗原递呈细胞，但其在胸腺发育中的作用，特别是在t-Treg发育中的作用仍然不清楚，因此，我们将探究胸腺B细胞在t-Treg发育过程中所行使的功能，从而深刻认识Treg细胞的发育机理。我们已取得的实验结果如下:\n 1.胸腺B细胞参与胸腺Treg的发育\n 通过免疫组化染色我们发现，胸腺B细胞和胸腺Treg细胞均定位于胸腺的髓质区;流式分析B细胞敲除的FoxP3-GFP小鼠胸腺细胞时，发现胸腺中B细胞的缺失不影响CD4单阳性和CD8单阳性胸腺细胞，但胸腺Treg细胞的比例和数目均显著的下降;同时，我们利用体外胸腺B细胞和胸腺CD4单阳性细胞共培养的实验直接证实了胸腺B细胞能够诱导Treg细胞的产生。\n 2.胸腺B细胞通过细胞-细胞间的接触的方式促进胸腺Treg细胞发育\n 通过体外培养实验，我们发现胸腺B细胞促进胸腺Treg细胞的发育是细胞-细胞间的接触所依赖的，而与胸腺B细胞所分泌的细胞因子无关;进一步的实验分析，我们发现胸腺B细胞促进胸腺Treg细胞发育所依赖的细胞-细胞间接触是由胸腺B细胞表面的MHCⅡ分子和CD40，CD80和CD86这些共刺激分子所介导的。\n 3.胸腺B细胞促进CD4单阳性胸腺细胞生成Treg前体细胞\n 在体外胸腺B细胞和胸腺Treg前体细胞共培养的实验中，我们发现胸腺B细胞不具备诱导胸腺Treg前体细胞向成熟Foxp3+Treg细胞转化的能力;相反，在胸腺B细胞和胸腺CD4单阳性细胞共培养的实验中，我们发现胸腺B细胞显著的促进了胸腺CD4单阳性细胞生成Treg前体细胞。\n 4.胸腺B细胞的参与促进胸腺Treg细胞增殖\n 在分析B细胞敲除的FoxP3-GFP小鼠胸腺中Treg细胞时，我们发现胸腺B细胞的缺失导致了处在增殖状态的胸腺Treg细胞比例显著下降;另外在胸腺Treg细胞体外增殖的培养实验中，我们发现胸腺B细胞的加入能够显著的促进胸腺Treg细胞的增殖。\n 5.胸腺B细胞表面的MHCⅡ分子和CD40/CD80/86分子在促进胸腺Treg细胞增殖中扮演不同的角色\n 在胸腺B细胞和胸腺Treg细胞共培养的实验中加入表面分子的特异性阻断抗体，阻断由这些分子所介导的信号传递，我们发现胸腺B细胞所提供的MHCⅡ分子参与到促进胸腺Treg细胞增殖中，但胸腺B细胞来源的CD40、CD80和CD86这些共刺激分子并不参与其中。\n 综上所述，我们发现胸腺B细胞在胸腺Treg细胞发育过程中的作用及其作用机制，阐明了胸腺B细胞主要是通过两种机制来维持胸腺Treg细胞的正常数目，第一个机制是促进胸腺Treg细胞的发育，第二个机制是促进成熟胸腺Treg细胞的增殖，这些发现加深了我们对t-Treg发育的认识。\n 第二部分NK细胞在原发性胆汁性肝硬化致病机制中作用及机制的研究\n 原发性胆汁性肝硬化(PBC)是由于自身免疫系统攻击肝内胆管上皮细胞而引起的慢性胆汁淤积性肝脏疾病，该自身免疫疾病的病理学特征为:肝内中小胆管的破坏，汇管区炎症细胞的浸润。PBC病人肝脏汇管区浸润的淋巴细胞有B细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、树突状细胞和巨噬细胞，同时还包含有NK细胞。至今我们都在密切关注适应性免疫细

关键词： 夏氏疟原虫感染   调节性B细胞   表型特征   免疫应答  

摘要： 疟疾是由疟原虫通过媒介昆虫传播感染引起的严重威胁人类生命的感染性疾病，已成为全球最严重的三大公共卫生问题之一。目前尚未有应用于临床的有效疟疾疫苗。因此，抗疟疾疫苗的研制成为了当今的重点课题，而疟原虫感染宿主机体应答的免疫学、分子生物学等综合研究是其重要前提。　　疟疾与其他大多数感染性疾病一样，需要通过免疫效应机制对其控制和消除。在感染早期，以IFN-γ为主导的Th1型细胞免疫应答遏制原虫的爆发性增殖。随之，有Th2型细胞辅助B细胞产生特异性抗体，能够有效清除疟原虫，防止复发和再燃。适时适度的的Th1/Th2应答具有保护作用，而过度或不恰当的应答可能导致病理性损伤。　　调节性B(Bregs)是能够分泌Th2型细胞因子IL-10的B细胞，有研究发现伯氏疟原虫感染能够诱导小鼠脾脏产生Bregs，能够有效抑制病理性免疫应答导致的脑疟从而延长小鼠存活时间。但调节性B细胞在抗疟疾保护性免疫应答中的作用和地位并不清楚。研究显示，疟疾保护性免疫应答中Th1应答向Th2型应答的转换需要B细胞参与，在重症疟疾贫血患儿体内B细胞数量和表型存在异常。由此推测，疟原虫感染可诱导Bregs活化，在保护性和病理性应答的平衡中发挥重要而独特作用。　　目的：　　C57BL/6小鼠可以产生较强烈的Th1型应答，而BALB/c小鼠则偏向Th2型应答，因此我们建立了不同P.c chabadui AS感染鼠疟模型。本研究利用夏氏疟原虫感染的C57BL/6和BALB/c小鼠模型，通过检测Bregs在不同初次和再次感染中的应答模式、与Th1/Th2极化的关系，以及表型变化，揭示Bregs在疟疾免疫应答中的作用。　　方法：　　1、实验动物和疟原虫　　6～8周雌性C57BL/6与BALB/c小鼠，SPF级，由中国医学科学院实验动物研究所提供（许可证编号:SCXK京200420001）。致死型夏氏疟原虫(Plasmodium chabadudi chabadui AS，P.c chabadui AS)液氮冻存，由BALB/c小鼠周期复苏传代。　　2、实验动物感染　　疟疾感染:C57BL/6与BALB/c每只小鼠经腹腔感染1×106P.c chabadui AS寄生红细胞(pRBC)。***感染后第3天开始，尾静脉采血，制备薄血膜，Giemsa染色，动态监测疟原虫血症水平、生存率。　　3、流式细胞术　　FACS检测小鼠脾细胞中产生IL-10的CD11b、CD19及CD3的水平，并检测分泌IL-10的CD19细胞中CD1d、CD5、IgM、IgD、IgG、B220及CD138等的表达量。　　4、Realtime PCR检测细胞因子　　TRIzo1匀浆提取脾脏组织mRNA，反转录为eDNA后，保存于-20℃作为Realtime PCR的模板，将RPS17作为内参基因，检测IL-I0基因表达水平。　　5、统计学处理　　使用SPSS19.0统计软件对数据进行处理，标本采用独立样本t检验对数据做统计分析。P＜0.05代表差异具有统计学意义。　　结果：　　1、P.c chabadui AS感染小鼠原虫血症水平和生存率　　C57BL/6与BALB/c小鼠经腹腔感染1×106 P.c chabaudi AS寄生的红细胞(pRBC)后，于感染后第4天在外周血可见疟原虫感染的红细胞，随后红细胞感染率迅速上升。在感染后第8天红细胞感染率达到峰值(36％)。随后C57BL/6小鼠的感染率开始迅速下降，并在感染后第13天被基本清除，而BALB/c小鼠的感染率下降缓慢，在感染后第9天开始出现死亡，感染后第11左右基本全部死亡。　　2、P.c chabadui AS感染小鼠脾细胞IL-10的分泌水平及来源　　C57BL/6小鼠脾组织中IL-10 mRNA水平及分泌IL-10细胞的数量在感染后第8天达到峰值，BALB/c小鼠在感染后第5天达到峰值。分泌IL-10细胞的数量约占小鼠脾细胞总数的5％，并随小鼠的原虫血症的升高而升高。　　C57BL/6和BALB/c小鼠脾淋巴细胞中分泌IL-I0的细胞主要为CD3+T细胞和CD19+B细胞。C57BL/6小鼠在感染后第8天CD19+IL-10+B细胞数量达到峰值，占脾淋巴细胞总数的1.9％，在分泌IL-10细胞中的比重为40％。CD3+IL-10+T细胞数量的峰值出现在感染后第5天，占脾淋巴胞总数3％。BALB/c小鼠CD19+IL-10+B细胞和CD3+IL-10+细胞的峰值出现在感染后第5天，分别占脾淋巴细胞总数的3.4％和2.6％，其中CD19+B细胞占分泌IL-10细胞的50％，且在感染初期CD19+IL-10+B细胞数量多于CD3+IL-10+细胞数量。　　3、在P.c chabadui AS感染模型中B10细胞亚群的变化　　B10细胞表型为CD19+