关键词： 强直性脊柱炎   调节性B细胞   分布特征   调节作用  

摘要： 强直性脊柱炎（Ankylosing spondylitis AS）是一种常见的自身免疫性疾病,欧洲人群的发病率大约为0.55%,中国人群为0.23%。主要表现为累及脊柱和骨盆的慢性炎症性关节炎,引起疼痛、关节僵硬并受影响的区域进展性的新骨形成和融合。因为确切的疾病发生和进展的原因尚不清楚,目前针对于强直性脊柱炎治疗只是症状上的缓解而不能完全根治。非甾类抗炎药（NSAID）可以减轻患者疼痛和僵硬感,但未证实其对骨性强直的进展有何影响。柳氮磺吡啶（SSZ）被证实治疗AS有效,主要适用于改善患者的外周关节炎。相当一部分AS患者采用常规的治疗难以控制症状,而且缺乏证据证实这些治疗可以抑制中轴关节病变的进展和改善疾病的预后。早在1973年就发现HLA-B27等位基因是目前已知的强直性脊柱炎（Ankylosing spondylitis AS）的高危因素之一。比较流行的强直性脊柱炎的发病机制过程认为许多细菌携带与内源性的肽段相似的肽段,并能够作为一种交互反应的资源,通过分子模拟激活,在AS患者体内引发基于HLA-B27限制性的T细胞介导的的自身反应。激活的CD8+T细胞攻击关节组织处的自身抗原进一步加重慢性炎症。目前对HLA-B27在AS中的免疫病理作用形成了一些假说,与这一假说相互关联,根据基因分型多种免疫相关基因与强直性脊柱炎的风险的具有相关性。然而,尽管80%的强直性脊柱炎携带患者HLA-B 27,但在所有携带HLA-B 27的人群中只有1-5%的人表现为强直性脊柱炎。此外,多项研究显示突变和免疫调节基因的表达之间的关联,提示免疫调节机制可以防止或加剧疾病的发展。在小鼠模型和人类疾病中研究发现调节性B细胞具有可以控制过度炎症（excessive inflammation）和防止自身免疫性诱导（preventing autoimmune induction）的作用。在小鼠自身免疫模型中过继移植CD1dhiCD5+B大幅度降低T细胞介导的炎症。CD24+CD38+B抑制人体内病毒特异性的T细胞反应。调节性B细胞（1egulatory B cells）产生抑制自身免疫炎症反应的机制虽然目前也认为可能包括免疫抑制抗原呈递等其他机制,但是现在主要认为通过IL-10介导的。调节性B细胞在自身免疫性疾病和炎症性肠病的小鼠模型的作用发挥依赖于CD40信号。CD40在B细胞可以直接参与IL-10的产生。另外一个令人感兴趣的现象是,在其他一些自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosusSLE）和免疫系血小板减少性紫癜（immune thrombocytopenia ITP）相对于他们的正常人群而言,其CD24+CD38+B的调节功能存在缺陷。这些都暗示着在自身免疫性疾病中调节性B细胞功能存在着缺陷。在本篇论文中我们主要研究强直性脊柱炎中B细胞介导的免疫抑制功能。目的：1、调查强直性脊柱炎患者外周血中B细胞各个亚群的分部和比例。2、AS患者中分泌IL-10的主要B细胞亚群3、CD24+CD38+B细胞对CD8+T细胞的调节作用方法：1.病例选取：总共选取30例患者,其中15例强直性脊柱炎患者（10例男性,5例女性）,年龄在27到60岁之间。选择性别和年龄匹配的15名健康成年人作为对照（10例男性,5例女性）,年龄在25到65岁之间。所有强直性脊柱炎的患者诊断都按照修正的纽约标准诊断（modified New York criteria）。所有的强直性脊柱炎和健康对照组人群都是HLA-B27阳性。在强制性脊柱炎标本收集前患者没有使用非甾体类抗炎药（non-steroidal anti-inflammatory drug）和/或者抗风湿类缓解药物（disease-modifying anti-rheumatic drug）的治疗。本研究方案系经通过了山东省千佛山医院伦理委员会的同意后实施的,并且每位受试者在试验始前都被恰当地告知有关本项临床研究的目的、方法、预期效益、潜在危险及可能要承受的不适,自愿地签署知情同意书。外周血的单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells PBMCs）在病人诊断时抽取血液后通过Ficoll离心获得。新鲜细胞直接用于IL-10分泌和B细胞表面标志的检测;对于T细胞和B细胞培养,细胞在-80℃温度冰箱中冷藏至少1月,然后解冻在37℃ 5%CO2条件下过夜后备用。2.流式细胞技术细胞表面染色,PBMCs悬浮在FACS染色Buffer（PBS supplemented with 1% BSA,2nM EDTA and 0.1% sodium azide）中。细胞表面抗体包括抗人CD3、CD8、CD19, CD20, CD21, CD24、CD27、CD38

关键词： 肾病综合征   调节性B细胞   免疫平衡   细胞病理学   儿童患者  

摘要： 本文对调节性B细胞在儿童原发性肾病综合征Th17/Treg免疫失衡中的作用及机制进行了研究。本研究分为两个部分：　　第一部分：调节性B细胞（B10）功能紊乱可通过影响Th17/Treg免疫平衡，参与儿童原发性肾病综合征（PNS）发生、发展及转归。　　目的：探讨调节性B细胞（B10）及其不同亚群在儿童原发肾病综合征（PNS）外周血中的水平及功能，及其对Th17/Treg免疫平衡的影响。　　方法：收集2013年9月到2015年12月重庆医科大学附属儿童医院肾内科住院及门诊随访的PNS患儿共60例，其中急性期单纯性肾病综合征（SNS）25例，肾炎型肾病综合征（NNS）15例，恢复期单纯性肾病综合征（RM-SNS）12例，恢复期肾炎型肾病综合征（RM-SNS）8例;正常体检儿童外周血20例（Control）。分离的外周血单个核细胞（PBMC），一管中加入LPS（终浓度10μg/ml）培养7h，过程中加入PMA（终浓度50ng/ml），离子霉素（终浓度500ng/ml）2h后，BFA（1×）混匀，置于37℃、5％CO2孵箱中，用于Th17、B10以及 B10两个亚类（CD19+CD24hiCD38hiB细胞和CD19+CD24hiCD27+B细胞）IL-10分泌水平的检测;一管中只加入LPS（终浓度10μg/ml），置于37℃、5%CO2孵箱中培养7h，用于Treg细胞的检测。采用流式细胞术检测PBMC中 B10细胞（CD19+IL-10+B细胞）、CD19+CD24 hi CD38 hi B细胞、CD19+CD24hi CD27+B细胞， Th17细胞和 Treg细胞的百分比，以及 CD19+B细胞、CD19+CD24 hi CD38hiB细胞和CD19+CD24hi CD27+B细胞IL-10的表达水平，进一步分析B10及其亚群与Th17细胞和Treg细胞水平的相关性。　　结果：SNS、NNS组血浆 IgG水平显著降低（P＜0.001），而恢复期SNS、NNS组血浆IgG可恢复至正常。与正常组相比，Th17细胞的比例在SNS、NNS组中逐渐升高（P＜0.05）;而Treg细胞的比例则逐渐降低（P＜0.05）;与正常组相比，SNS、NNS组 Th17/Treg的比值显著增高（P＜0.05），而与SNS比较，NNS组Th17/Treg比值进一步增高（P＜0.05）。与正常组比较，急性期 SNS组、NNS组外周血 B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、CD19+CD24hiCD27+B细胞、CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞及 CD19+CD24hiCD27+ IL-10+B细胞水平均明显降低（P＜0.05）;相比急性期SNS组，急性期NNS组外周血B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、CD19+CD24hiCD27+ B细胞、CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞及CD19+CD24hi CD27+IL-10+B细胞水平均进一步降低（P＜0.05）;而分别与急性期 SNS组、NNS比较，恢复期 SNS组、NNS组 B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、CD19+CD24hiCD27+B细胞及CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞水平均明显增高（ P＜0.05）;但恢复期 SNS组、NNS组外周血CD19+CD24hiCD27+IL-10+B细胞水平分别与急性期SNS组、NNS组比较，有增高趋势，但无明显统计学差异（P＞0.05）。与正常组比较，恢复期 SNS组、NNS组 B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、CD19+CD24hiCD27+B细胞、 CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞及CD19+CD24hiCD27+IL-10+B细胞水平均无统计学意义（P＞0.05）。进一步发现儿童PNS（包括SNS组、NNS组）外周血B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、 CD19+CD24hiCD27+B细胞、CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞水平及CD19+CD24hi CD27+IL-10+B细胞与Th17细胞水平、Th17/Treg比值呈明显负相关（P＜0.05），而与Treg水平呈正相关关系（P＜0.05）。儿童PNS24小时尿蛋白定量与Th17细胞水平、Th17/Treg比值呈正相关关系（P＜0.05），而与B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、CD19+CD24hiCD27+ B细胞水平均呈负相关关系（P＜0.05）。　　结论：B10细胞及CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞、CD19+CD24hi CD27+IL-10+B细胞都可能参与了儿童P

关键词： 系统性红斑狼疮   调节性B淋巴细胞   体液免疫  

摘要： 目的:检测CD1d^(high)CD5^+CD19^+调节性B淋巴细胞数量的变化,讨论其对免疫功能的影响及其与SLE活动性指数的关系。方法:以10例健康人群和10例SLE为研究对象,检测CD1d^(high)CD5^+CD19^+B细胞的含量。同时,检测各受试者的IgG和IgM水平。结果:正常对照组CD1d^(high)CD5^+CD19^+B细胞占B淋巴细胞百分比平均为0.20%±0.21%,SLE组CD1d^(high)CD5^+CD19^+B细胞为0.83%±0.28%,前者明显低于后者(P<0.01)。对照组和SLE患者的IgG含量分别为13.27±2.31和10.31±4.79,两者差异无统计学意义(P>0.05)。对照组和SLE患者的IgM含量分别为1.79±0.50和0.80±0.40,两者差异有统计学意义(P<0.05)。进行相关性分析,SLE组患者CD1d^(high)CD5^+CD19^+B细胞数与IgG水平呈负相关(r=-0.634 4,P<0.05),与IgM水平无相关性(r=-0.188 6,P>0.05),与活动性指数无相关性(r=0.242 3,P>0.05)。结论:SLE患者体内表达的CD1d^(high)CD5^+CD19^+B细胞显著高于正常对照组,且其细胞数与其IgG水平呈负相关,提示调节性B淋巴细胞在SLE病程过程中对机体的体液免疫调节可能起到一定作用。

关键词： 系统性红斑狼疮   调节性T细胞   CD45RA   Foxp3   白细胞介素17  

摘要： 目的:采用体外实验观察系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者分泌白细胞介素17(interleukin,IL-17)的调节性T细胞在促进B细胞的存活及抗体分泌中的作用。方法 :采用流式细胞仪分选20例活动期SLE患者及20名健康对照者外周血调节性T细胞的3个功能亚群和B细胞,并分组、分条件共培养,分时段进行细胞功能实验。结果:在活动期SLE患者中,CD45RA-Foxp3low CD25+非抑制性调节性T细胞亚群分泌IL-17明显增加,能够增强CD19+B细胞存活并促进其抗体产生;而加入抗IL-17抗体阻断后,该群细胞的正向促进功能减退(P<0.05)。结论 :SLE患者中增多的不具抑制功能的CD45RA-Foxp3low CD25+调节性T细胞,可能通过分泌大量的IL-17,促进B细胞的存活、增殖,并向浆细胞分化,分泌大量的自身抗体,参与疾病的发生、发展。

关键词： 系统性红斑狼疮患者   调节性T细胞   B细胞表达   外周血单个核细胞   CD19^+   TGFβ   免疫系统异常   类风湿性关节炎  

摘要： 系统性红斑狼疮（SLE）的致病原因尚未完全阐明，可能与遗传、环境因素及免疫系统异常等相关。抗原提呈细胞、T细胞、B细胞、调节性T细胞、调节性B细胞的免疫细胞功能异常也与SLE的发病密切相关。调节性B细胞减少或功能障碍可能导致SLE、类风湿性关节炎及ANCA相关性血管炎等风湿性疾病。

关键词： 系统性红斑狼疮   B细胞   发病机制   特异性自身抗体   调节性   自身免疫疾病   免疫调节作用   分泌细胞因子  

摘要： B细胞通过产生特异性自身抗体在自身免疫疾病发生发展中有着重要作用。近年来研究证实,B细胞在免疫反应中同时具有正向调节和负向调节作用。B细胞通过产生抗体、诱导T细胞活化产生正向调节作用,同时B细胞也可以分泌细胞因子发挥负向免疫调节作用。

关键词： 调节性B细胞   流式细胞术   食管癌   B10   Br3   Breg  

摘要： 目的检测食管癌患者围手术期外周血调节性B细胞的表达水平,分析其与手术疗效的关系。方法收集食管癌患者和体检健康者的外周血标本,用Ficoll试剂提取单个核细胞(PBMC),用流式细胞术(FCM)检测术前、术后1 d、术后7 d的食管癌患者及体检健康者调节性B细胞(包括B10、Br3及Breg)的表达水平。结果食管癌患者CD5+CD19+细胞、B10细胞和Breg细胞表达水平分别为(3.20±0.35)%、(2.52±0.37)%和(8.39±0.92)%,均高于健康人对照组(1.77±0.25)%、(1.57±0.28)%和(2.96±0.23)%,差异有统计学意义(P均<0.05),而Br3细胞(6.07±0.46)%与健康人对照组(5.93±0.28)%比较差异无统计学意义(P>0.05);与术前比较,食管癌患者B10、Br3细胞术后1 d表达水平明显升高,Breg细胞表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05),而术后7 d与术前比较,CD5+CD19+细胞、B10和Breg细胞差异均有统计学意义(P均<0.05);与术后1 d与术后7 d比较,仅CD5+CD19+、B10、Br3细胞表达水平差异有统计学意义(P均<0.05)。结论食管癌患者围手术期外周血调节性B细胞的表达水平呈现动态变化,可用于手术疗效监测。

关键词： 日本血吸虫   B淋巴细胞   调节性B细胞   白介素10   生长趋化因子β   干扰素γ  

摘要： 目的研究细菌脂多糖诱导BALB／c小鼠B淋巴细胞对日本血吸虫发育的影响。方法取T细胞缺陷的BALB／cnude小鼠18只．以及T／B细胞联合缺陷的BALB／cSCID小鼠23只．每鼠感染日本血吸虫尾蚴（30±1）条。用细菌脂多糖（LPS）腹腔注射诱导（100μg／ml．0．2ml／只，2周1次，共2--3次）nude小鼠（NL组，9只）和SCID小鼠（SL组，12只）。同时设置对照组，即以PBS处理nude小鼠（N组．9只）和SCID小鼠（S组，11只）。感染后28d、36d，分别解剖N、NL、S和SL各组小鼠（n=4／5，4／5，5／6，6／6）．肝门静脉灌注法收集血吸虫成虫，计算成虫检获率，测量体长，记录雌雄合抱数。取肝组织经5％KOH溶液消化后．计数虫卵，计算每克肝组织虫卵数。摘除眼球取血，检测外周血中转化生长因子（TGF—β）、γ干扰素（IFN-γ）和白介素10（IL-10）水平。取脾组织制备脾细胞悬液，检测脾淋巴细胞中调节性B细胞（regulatoryBcells，Bregs）所占比例。结果感染后28d，NL、N组雄虫体长分别为（7．66±2．85）mm和（5．28±1．64）mm（P〈0．01）．雌虫体长分别为（9．64±1．99）mm和（7．49±1．63）mm（P〈0．01）。感染后36d，NL组每克肝组织虫卵数（1088±297）明显高于N组（715±404）（P〈0．05），sL组的（217±33）明显低于S组（573±160）（P〈O．01）。感染后28d、36d，N组脾淋巴细胞中CDld CD5＋CDl9＋Bregs所占比例分别为（12．73±0．96）％和（37．15±3．04）％（P〈0．05），与NL组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。感染后28d，N、NL组血清中TGF—β水平分别为（101．75±46．72）pg／ml和（260．90±45．34）pg／ml，IFN-γ水平分别为（7．91±1．62）pg／ml和（14．11±3．72）pg／ml，两组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。感染后36d，S、N组血清中IL-10分别为（41．85±3．14）pg／ml、（66．25±4．16）pg／m]，SL、NL组分别为（44．48±3．87）pg／ml、（72．22±17．76）pg／ml，两种小鼠比较差异具有统计学意义（P〈0．01），但LPS处理组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LPS可诱导日本血吸虫感染BALB／c小鼠B细胞释放TGF-β等细胞因子．促进日本血吸虫雌雄成虫的早期发育。

关键词： 调节性B细胞   强直性脊柱炎   调节性T细胞   T辅助细胞17  

摘要： 目的探讨强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)中调节性B细胞(regulatory B cells,Breg)的水平及与疾病活动度间的关系。方法选取确诊AS患者38例,按BASDAI评分分为活动期21例和非活动期17例,同时选取30例健康人对照者,AS患者与对照组间一般资料差异无统计学意义。ASDAS-CRP和BASDAI评分作为疾病活动度评价指标。用流式细胞术检测AS患者外周血CD19+CD24hiCD38hiBreg、CD19+CD24hiCD27+Breg、CD4+CD25highTreg及CD3+IL-17+CD8-TH17比例,荧光定量PCR检测RORγt和Foxp3 mRNA表达水平。结果 AS患者CD19+CD24hiCD38hiBreg比例为(2.10±0.16)%,显著低于对照组(3.44±0.80)%,其中活动期患者[(1.88±0.66)%]低于非活动期患者[(2.36±0.57)%],均低于对照组,差异均有统计学意义。AS患者CD19+CD24hiCD38hiBreg与Foxp3 mRNA成显著正相关性(r=0.369,P<0.05),与TH17、RORγt mRNA、BASDAI评分及ASDAS-CRP负相关(r分别为-0.338、-0.661、-0.411、-0.714,P均<0.05),而与Treg无相关性(r=-0.006,P>0.05)。而AS患者中CD19+CD24hiCD27+Breg亚群比例与对照组间差异则无统计学意义,但活动期患者比例有所降低,与非活动期患者及对照组比较,差异有统计学意义。AS患者中CD19+CD24hiCD27+Breg亚群比例与Foxp3 mRNA正相关(r=0.344,P<0.05),与ASDAS-CRP负相关(r=-0.383,P<0.05),但与TH17、Treg、RORγt mRNA及BASDAI评分均无显著相关性。结论 AS患者中存在异常的Breg表型主要为CD19+CD24hiCD38hiBreg,其在AS患者中显著降低,并与疾病活动度密切相关,且与RORγt和Foxp3 mRNA水平及TH17数量存在一定的关联。