关键词:
类风湿性关节炎
木犀草素
调节性B细胞
IL-10
摘要:
目的类风湿性关节炎是由免疫系统异常攻击机体而导致的免疫性疾病,不仅损害关节,还引起多种并发症,致残率高。目前,临床上主要通过达标治疗延缓关节炎进展。在类风湿性关节炎的潜在治疗靶点中,具有负向免疫调节作用的调节性B细胞受到学者们的关注。研究发现,类风湿性关节炎患者体内调节性B细胞的数量减少、功能受损。本课题组在牙周炎小鼠诱导类风湿性关节炎的动物实验中,发现下调的调节性B细胞可能是牙龈卟啉单胞菌介导牙周炎进而增强类风湿性关节炎的重要因素,而注射调节性B细胞和用特定的药物诱导调节性B细胞的免疫疗法可能是治疗类风湿性关节炎的有效方法。木犀草素(LUT)作为一种黄酮类化合物广泛存在于人们日常饮食中,具有抗炎特性。本课题通过细胞实验探索LUT对调节性B细胞的诱导作用及内在机制,并通过动物实验探讨富含LUT的饮食对类风湿性关节炎的预防作用,旨在为类风湿性关节炎的预防与护理提供理论依据。方法(1)通过体外实验揭示LUT诱导调节性B细胞的作用与机制从文献中筛选出5种药物,分别为:LUT、山奈酚、绿原酸(CGA)、异甘草素(ISL)及芝麻素。流式细胞术比较5种药物处理对调节性B细胞的诱导作用,以确定本课题的研究药物。通过RT-q PCR、ELISA及Western Blot等实验检测LUT处理调节性B细胞后,细胞及上清液中细胞因子的比例、转录因子的转录水平、蛋白及蛋白磷酸化水平,并揭示LUT促进调节性B细胞分化的信号通路。(2)通过体内实验揭示LUT对类风湿性关节炎的影响将6~8 w雄性DBA/1小鼠分为:对照组、模型组(CIA组)、LUT组、CGA组及ISL组,小鼠数量分别为5只、8只、10只、10只及10只。利用牛Ⅱ型胶原乳剂对小鼠进行免疫,以建立胶原诱导性关节炎动物模型。造模过程中,CIA组2只小鼠因不耐受胶原乳剂死亡,最终纳入8只。LUT组、CGA组及ISL组小鼠在免疫的同时分别给予6 g/kg LUT饲料、4 m M/L CGA饮水及3 g/kg ISL饲料饲养,46天后采集小鼠标本进行分析。通过小鼠体重、关节炎指数评分、流式细胞术及微型CT评价富含LUT的饮食对类风湿性关节炎的预防作用。结果(1)LUT可能通过激活p38 MAPK信号通路及抑制组蛋白去乙酰化酶活性促进调节性B细胞分泌IL-10观察5种药物处理对调节性B细胞分泌IL-10的促进作用及IL-6的抑制作用,选定LUT作为本课题的研究药物,浓度为8μM。LUT上调调节性B细胞IL-10的转录水平(P<0.05),下调IL-6及IL-1β的转录水平(P<0.05);抑制细胞上清因子IL-6的表达(P<0.01)。在MAPK信号通路中,LUT处理调节性B细胞后,p38蛋白激酶的磷酸化水平上升(P<0.05);抑制p38支路后,p38蛋白激酶的磷酸化水平下降(P<0.05),且调节性B细胞分化能力下降(P<0.05)。ELISA实验表明,LUT抑制调节性B细胞组蛋白去乙酰化酶的活性(P<0.01)。(2)富含LUT的饮食减轻小鼠关节炎症状及降低关节损害程度相较于CIA组,LUT组小鼠体重无明显变化(P>0.05),CGA组与ISL组小鼠体重上升程度较低(P<0.05);三个药物组一定程度上减轻小鼠爪部的红肿症状;LUT组小鼠的关节炎指数评分较低,CGA组及ISL组小鼠的关节炎指数评分较高;各药物组的CD4T细胞比例上升,但无统计学意义,调节性B细胞的IL-10及IL-6的分泌无明显变化(P>0.05);CGA组小鼠关节骨侵蚀及破坏较严重,LUT及ISL组小鼠的关节骨侵蚀及破坏程度减轻。结论(1)LUT可能通过激活p38 MAPK信号通路及抑制组蛋白去乙酰化酶活性诱导调节性B细胞分化。(2)在CIA动物模型中,富含LUT的饮食对类风湿性关节炎小鼠的关节具有保护作用,延缓疾病的进展。