关键词： B淋巴细胞   红斑狼疮,系统性   白细胞介素10  

摘要： 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是由自身免疫介导的,累及多器官、多系统的弥漫性结缔组织病,B细胞在SLE发病中起着重要作用,SLE患者体内B细胞处于高度活化状态,产生大量自身抗体。但是,最近新发现了一种特殊的、具有负向调节免疫应答功能的B细胞亚群,这种B细胞亚群通过分泌白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)、IL-35及转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)抑制致病性T细胞及其他淋巴细胞的增殖,从而抑制自身免疫性疾病中的过度炎症反应;目前将这种具有负向调节免疫应答能力的B细胞群称为调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)。本文就Bregs以及其在SLE中的研究进展及现状作一综述。

关键词： 过敏性鼻炎   调节性B细胞   鼠模型  

摘要： 目的:探讨调节性B细胞(regulatory B cell,Breg细胞)在过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)鼠模型鼻黏膜中比例变化及意义。方法:16只BALB/C小鼠随机分为两组,每组8只。AR组使用卵清蛋白来构建AR鼠模型,对照组使用生理盐水替代。收取两组小鼠鼻黏膜组织,采用流式细胞术检测两组小鼠鼻黏膜中Breg细胞的比例。结果:在AR组与对照组小鼠鼻黏膜中均检测到Breg细胞,并且A R组中Breg细胞比例(1.15%±0.20%)低于对照组(2.30%±0.46%),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Breg细胞比例下降在AR的发病中起重要作用。

关键词： 红斑狼疮   自身免疫病   Foxd3基因   转录因子   白细胞介素-10   调节性B细胞   分化发育  

摘要： IL-10+调节性B细胞（Breg）通过分泌白介素-10（IL-10）在抑制过度炎性反应方面起到重要作用。然而调节性B细胞因在体内含量少，没有特异性表面标记，没有特异性转录因子，和分化发育机制不清楚等限制其将来临床应用。为了进一步深入研究调节性B细胞的分化发育机制，本研究首先关注了一个关键的科学问题：哪些转录因子能有效地调控调节性B细胞关键的标志性分子—IL-10的表达？　　目的：分析IL-10启动子上转录因子结合位点，检测Foxd3（经预测是结合在IL-10启动子上得分最高和结合位点最多的一个转录因子）在调节性B细胞中与IL-10分泌的相关性，阐明“Foxd3在调节性B细胞分化、发育、扩增及功能中的作用及机制”，并为靶向Foxd3信号通路促使调节性B细胞扩增及其对自身免疫病治疗提供理论及实验依据。　　方法：　　（1）通过两个网站为基础的预测软件，对IL-10启动子上转录因子结合位点进行分析;（2）应用染色质免疫共沉淀-PCR技术验证Foxd3是否能够直接结合在IL-10启动子上;（3）应用基因突变技术进一步证实Foxd3与IL-10启动子结合的具体相互作用位点;（4）通过双荧光素酶报告系统分析Foxd3是否调节IL-10启动子的活性;（5）应用实时定量PCR和免疫印迹技术检测LPS活化的B细胞中Foxd3的mRNA水平和蛋白水平表达;（6）应用Foxd3特异性shRNA敲低B细胞中Foxd3的表达，检测Foxd3表达降低是否影响IL-10的表达;（7）通过流式细胞术、酶联免疫吸附实验和免疫印迹技术，检测系统性红斑狼疮小鼠B细胞中Foxd3和IL-10表达的相关性。　　结果：　　（1）对小鼠IL-10启动子上转录因子结合位点进行分析，发现Foxd3是与IL-10启动子结合最强（得分最高）和最多（结合位点最多）的转录因子;（2）染色质免疫共沉淀-PCR技术鉴定出Foxd3能结合在IL-10启动子上游-1400bp位置;（3）通过构建截短型IL-10启动子，证明Foxd3通过与IL-10启动子结合位点p4（-1413）结合;通过构建截短型Foxd3蛋白，证实Foxd3通过一个N末端结构域结合在IL-10启动子上;（4）双荧光素酶报告系统分析显示，Foxd3能有效地抑制IL-10启动子的功能;（5）实时定量PCR和免疫印迹技术证实LPS活化的B细胞高表达Foxd3 mRNA和蛋白，并且Foxd3的表达随着LPS的刺激呈时间依赖性增加;（6）实时定量PCR、免疫印迹技术、流式细胞术和酶联免疫吸附实验检测结果显示Foxd3低表达的IL-10+调节性B细胞中IL-10的表达升高;（7）流式细胞术、酶联免疫吸附实验和免疫印迹技术结果表明，系统性红斑狼疮小鼠B细胞中Foxd3表达量升高而IL-10+调节性B细胞降低。　　结论：本研究表明无论是在体内还是体外，活化的B细胞上调Foxd3的表达。Foxd3通过直接结合IL-10的启动子，限制IL-10启动子的激活，进而抑制IL-10+调节性B细胞的产生。自身免疫病小鼠B细胞高表达Foxd3进而降低调节性B细胞的产生。这样，转录因子Foxd3通过抑制B细胞中白介素-10的表达抑制调节性B细胞的产生。　　这项研究不仅阐明了Foxd3抑制调节性B细胞产生的机制，而且为以Foxd3为潜在靶点诱导调节性B细胞产生来治疗自身免疫病的新方法奠定前期基础。因此，这项研究既丰富了调节性B细胞分化发育的基本理论又为调节性B细胞的可能应用奠定了坚实基础。

关键词： 视神经脊髓炎谱系疾病   调节性B细胞   系统性自身抗体  

摘要： 【目的】视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorders,NMOSDs),是一组慢性中枢神经系统免疫性疾病,以视神经与脊髓受累为主。这组疾病的流行病学特点为全球分布,青中年女性好发,有较高的致残率和一定的致死率。随着水通道蛋白4(AQP4)抗体及其致病特点的发现,目前认为体液免疫机制介导的中枢神经系统星形胶质细胞脱髓鞘是主要的病理改变。经典免疫学认为活化的B细胞的主要功能是分泌产生抗体以及作为抗原提呈细胞(APC)激活效应性T细胞。最先在实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)的小鼠模型中发现了B细胞亚群具有免疫调节功能。具有免疫调节功能的这群细胞被命名为调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs),深入研究发现Bregs的负性免疫调节作用与其IL10因子的分泌有关,并能改变Th1/Th2细胞平衡,在自身免疫性疾病的发生发展中起重要作用。目前对于调节性B细胞在神经系统疾病中的研究尚少,本研究通过比较分析视神经脊髓炎谱系疾病患者与健康对照外周血调节性B细胞的百分数、相关细胞因子水平,揭示了调节性B细胞在视神经脊髓炎谱系疾病发生、发展中的重要作用。【方法】本研究选取2015年9月至2016年9月之间就诊于厦门大学附属第一医院神经内科的NMOSDs患者26例,并同期选取年龄性别匹配的健康对照27例。所有患者按2015年最新版NMOSDs诊断标准经两位神经内科医师诊断,其中包括两例视神经炎以及六例复发性长节段横贯性脊髓炎。所有对象在采血前三个月内均未使用大剂量静脉激素冲击、环磷酰胺、硫唑嘌呤、单克隆抗体等免疫抑制剂治疗。收集病例组与对照组血液样本后以流式细胞术检测病例组与对照组外周血CD19+CD24hiCD38hi细胞百分率,并以酶联免疫吸附法(ELISA)检测病例组与对照组血浆中水通道蛋白4(AQP4)抗体、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)抗体水平以及细胞因子IL6、IL10水平。通过比较初步探讨调节性B细胞在视神经脊髓炎谱系疾病中的功能与作用。【结果】NMOSDs组患者外周血CD19+CD24hiCD38hi细胞占CD19+细胞百分率(0.648±0.358)较健康对照组(0.878±0.267)明显下降(P=0.0099);NMOSDs组患者水通道蛋白4抗体浓度(57.80±16.15 ng/mL)较健康对照组(26.21±5.557ng/mL)明显升高(P=0.036);NMOSDs组患者血浆IL10细胞因子水平(1.88±0.51)较健康对照组(2.40±0.80)明显下降(P=0.009);NMOSDs组患者血浆IL6细胞因子水平(7.550±0.7133)较健康对照组(5.433±0.6779)明显升高(P=0.0363);患者组外周血CD19+CD24hiCD38hi百分数与血浆IL10细胞因子水平存在相关性(P=0.0213,r2=0.2020)。伴自身抗体谱异常患者与不伴自身抗体谱异常的患者比较,血浆IL6因子水平升高(P=0.0165),外周血CD19+CD24hiCD38hi细胞占CD19+细胞百分率、血浆IL10因子水平的差异均无统计学意义(P>0.05)。血清AQP4抗体阳性NMOSDs患者与血清AQP4抗体阴性患者在外周血CD19+CD24hiCD38hi Bregs细胞百分率、血浆IL10因子水平、血浆IL6因子水平上的差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】视神经脊髓炎谱系疾病患者较健康对照存在外周血CD19+CD24hiCD38hi调节性B细胞数量下降,IL10细胞因子水平下降,IL6细胞因子水平升高,提示体液免疫平衡紊乱是视神经脊髓炎谱系疾病的主要发病机制之一,外周血调节性B细胞水平可能可以作为监测疾病复发、指导治疗的生物标记物。

关键词： 调节性T细胞   急性髓系白血病   调节性B细胞   肿瘤免疫白血病   淋巴细胞   急性   费城染色体   伊马替尼   治疗结果  

摘要： 目的:研究AML患者Tregs的数量、趋化及其对免疫细胞的抑制功能,并探讨导致AML患者Tregs异常可能的上游因素,阐明其在AML免疫逃逸机制中的作用,为提高AML临床疗效寻找新的治疗方向。方法:①流式细胞术检测初诊AML患者和正常对照骨髓液单个核细胞中Tregs比例及Tregs表面PD1、CTLA4、GITR的表达;②transwell实验检测Tregs迁移至骨髓的趋化功能;③流式细胞术检测Tregs细胞表面CXCR4、CXCR7表达,ELISA方法检测骨髓和血浆中SDF-1α水平;④Tregs分别与CD4+T细胞和CD8+T细胞共培养、交叉共培养比较AML与正常Tregs对免疫细胞的抑制能力;⑤Bregs与CD4+CD25-T细胞共培养、交叉共培养比较AML与正常Bregs诱导CD4+CD25-T细胞向Tregs转化的能力。结果:①初诊急性髓系白血病患者外周血和骨髓液中Tregs比例增多;②AML患者外周血Tregs趋化至骨髓的能力增强;③AML患者外周血Tregs趋化至骨髓的能力增强源于CXCR4表达升高;④AML患者Tregs抑制CD4+ T细胞增殖促进CD4+ T细胞凋亡的能力增强并影响其INF-γ分泌;⑤AML患者Bregs诱导CD4+CD25-T细胞向 CD4+CD25+Foxp3+Tregs 转化。结论:AML患者Tregs数量增多,迁移至骨髓能力增强,并影响CD4+T细胞增殖、凋亡、细胞因子分泌等功能,而AML患者Bregs促进CD4+ CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+ Tregs的转化,从而放大Tregs的免疫抑制效应,为AML基于Tregs的免疫抑制治疗提供理论依据。目的:探讨真实世界中伊马替尼（IM）联合化疗治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞白血病（ALL）的疗效及相关预后因素。方法:2003年4月至2015年8月中国医学科学院血液病医院收治的209例治疗中包含IM的BCR-ABL阳性ALL患者纳入研究,106例患者接受造血干细胞移植（HSCT）。对患者的疗效和预后影响因素进行分析。结果:初诊患者诱导完全缓解（CR）率为97.9%。初诊时WBC≥100×109/L是总生存（OS）的不良预后因素（P=0.043）。未接受HSCT、诱导治疗4周内未达CR和治疗过程中未达到分子生物学完全缓解（CMR）是OS（P值分别为＜0.001、0.009和＜0.001）和无复发生存（RFS）（P值均＜0.001）的不良预后因素。接受异基因HSCT和自体HSCT的患者,其OS和RFS的差异无统计学意义。首次诱导治疗时联用IM与否对OS无明显影响,但是联用IM的患者较未联用IM的患者显示出更高的5年RFS率（37.0%对24.0%,P =0.005）。在治疗过程中持续规律服用酪氨酸激酶抑制剂（TKI,40例患者由于复发/转录本水平下降不理想/出现突变换用其他TKI）的患者生存情况最佳,其次为骨髓抑制期间断停用TKI的患者,不规律服用TKI的患者生存情况最差,三组5年OS率分别为46.0%、28.0%、17.0%（P=0.004）,5年RFS率分别为 38.0%、28.0%、17.0%（P＜0.001）。结论:TKI联合化疗获得CMR,序贯以HSCT可改善BCR-ABL阳性ALL患者预后,持续规律地联用TKI有助于BCR-ABL阳性ALL患者疗效的提高。

关键词： 调节性B细胞   免疫性血小板减少症   流式细胞学   相关分析  

摘要： 目的:通过检测免疫性血小板减少症疾病患者及健康者外周血中CD19+CD24hiCD38hi调节性B细胞的水平及其功能的变化,探讨调节性B细胞在ITP疾病的发生、出血风险、发展、转归及预后中所起的作用,深入研究调节性B细胞与ITP发病机理的关系。方法:选取2015年01月01日至2016年12月31日于济宁医学院附属医院血液科门诊就诊或住院的免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)患者124例作为实验组;选取同期年龄、性别匹配的37例健康人群作为对照组。并根据ITP的分型及分期标准,将ITP患者分为四个不同的组别:新诊断的ITP组、持续性ITP组、慢性ITP组和重症ITP组。根据疗效标准将完全缓解组,分别比较激素治疗前后,及其与持续性ITP组、慢性ITP组及重症ITP组进行比较。采用流式细胞学检测研究对象外周血中的CD19+CD24hiCD38hi调节性B细胞(Regulatory B cells,Bregs)及其功能分子白介素-10(interleukin-10,IL-10)的水平,比较它们在ITP组和健康对照组的水平差异,以及在ITP各亚组之间的水平差异;采用原发免疫性血小板减少症出血评分系统对ITP组进行评分;所有受试对象进行血常规、骨髓穿刺等指标的检测。选取一般人口学资料、血小板计数、出血评分作为参数,通过相关分析,初步探讨影响Bregs功数量和功能的可能影响因素及其意义。结果:免疫性血小板减少症患者外周血中的Bregs的水平(2.7519%±1.71625%)显著低于对照组(8.3195%±0.98072%)(P<0.05),且IL-10的水平(2.5059%±1.55297%)亦均低于健康组(7.0257%±0.78238%)(P<0.05)。且在研究的ITP各亚组中,Bregs及其功能分子IL-10在持续性、慢性、重症ITP组的人群中水平表达更低。但是,在完全缓解组中,Bregs的水平较治疗前有明显升高(P<0.05),且比ITP其他亚组表达显著增加(P<0.05)。另外,通过相关分析发现:Bregs与外周血PLT的水平(r=0.829,p<0.05)、与ITP疾病的严重程度(r=0.434,p<0.05)呈显著正相关,与ITP出血评分呈负相关(r=-0.771,p<0.05);Bregs功能分子IL-10与外周血PLT的水平(r=0.742,p<0.05)、与ITP疾病的严重程度(r=0.358,p<0.05)呈显著正相关,与ITP出血评分呈负相关(r=-0.668,p<0.05)。结论:调节性B细胞可能参与了免疫性血小板减少症的发生以及发展,且与免疫性血小板减少症疾病的严重程度明显相关,其可作为评估ITP的严重程度、疾病分型、出血风险的一个参考指标,也可作为评估诊断疗效、疾病转归及预后的十分有效的一个指标。调节性B细胞可作为难治性ITP患者免疫治疗的新靶点。

关键词： 脓毒症   调节性B细胞   预后   老年  

摘要： 目的探讨外周血CD20~+CD24CD38调节性B细胞(Bregs)水平对老年脓毒症患者预后的评估价值。方法采用前瞻性研究方法,选择2016年4月至2017年2月入住同济大学附属东方医院急诊内科和急诊重症加强治疗病房(ICU)符合Sepsis-3诊断标准、年龄>65岁的老年脓毒症患者。常规检测降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)和动脉血乳酸(Lac)水平,并根据24 h内指标最差值计算急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分和序贯器官衰竭评分(SOFA);于入院1、3、7 d采用流式细胞仪检测外周血CD20~+CD24CD38Bregs表达水平。根据28 d预后将患者分为存活组和死亡组,比较两组各指标的差异;对差异有统计学意义的变量进行二元logistic回归分析;用Spearman法分析Bregs与各指标的相关性;用受试者工作特征曲线(ROC)分析Bregs对老年脓毒症患者预后的评估价值。结果入选58例患者,其中男性38例,女性20例;年龄(79.91±7.97)岁;脓毒症32例,脓毒性休克26例;死亡35例,病死率为60.3%。死亡组APACHEⅡ评分、SOFA评分显著高于存活组[APACHEⅡ(分):18.14±4.52比14.91±3.56,SOFA(分):8.80±4.56比6.35±3.00,均P<0.05],1、3、7 d外周血Bregs表达水平均显著低于存活组[个/μL:0.70(0.20,1.40)比1.50(0.70,2.20),0.54(0.20,1.00)比1.42(1.10,2.12),0.25(0.10,0.50)比0.80(0.50,1.00),均P<0.05]。老年脓毒症患者入院1 d外周血Bregs与APACHEⅡ评分呈显著负相关(r=-0.351,P=0.007),与PCT、CRP、Lac和SOFA评分无相关性。二元logistic回归分析显示,Bregs[优势比(OR)=1.865,P=0.028]和APACHEⅡ评分(OR=0.853,P=0.026)是影响老年脓毒症患者预后的独立危险因素。ROC曲线分析显示,入院1、3、7 d Bregs和APACHEⅡ评分对老年脓毒症患者预后的预测价值均较高,ROC曲线下面积(AUC)和95%可信区间(95%CI)为0.842(0.647~0.954)、0.770(0.564~0.911)、0.888(0.703~0.977)和0.855(0.661~0.961),均P<0.01;入院7 d Bregs的AUC最大,截断值为0.50个/μL时敏感度为72.73%,特异度为86.67%。结论外周血CD20~+CD24CD38Bregs表达水平在一定程度上可以用于判断老年脓毒症患者的预后。

关键词： 自身免疫性葡萄膜炎   间充质干细胞   辅助性T细胞17   调节性B细胞   疗效评价  

摘要： 目的:　　葡萄膜炎是一种常见的自身免疫性眼病.实验性自身免疫性葡萄膜炎(recurrent experimental autoimmune uveitis,EAU)主要致炎因子为Th17,目前发现调节性B细胞(Regulatory Bcells,Breg)可抑制Th17的分化及活性.间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一种具有免疫调节功能的成体干细胞,可调节多种免疫细胞的增殖和功能.本研究通过建立动物模型研究Th17及Breg细胞在诱导大鼠自身免疫性葡萄膜炎过程中的作用,并观察MSCs对EAU的治疗效果.　　方法:　　***培养:将SD大鼠骨髓间充质干细胞分离出来,并进行培养鉴定.　　2.动物模型建立:Lewis大鼠36只,各12只.MSCs干预组:光感受器间维生素A类结合蛋白(Interphotoreceptorbinding protein,IRBP)与弗氏完全佐剂(CFA)等体积混合并充分乳化后,尾静脉(1ml)+双侧大腿肌肉(各0.5ml)注射建立EAU动物模型,同时腹腔注射2mlMSCs悬液进行干预.模型对照组:相同方法建立EAU动物模型,同时腹腔注射2mlPBS进行干预.正常对照组;同部位同体积注射PBS建立模型,同时腹腔注射2mlPBS进行干预.　　3.临床观察:动物模型建立后,从第3天起每日在裂隙灯显微镜下观察大鼠眼部,并按照Caspi临床分级进行评分.　　4.组织病理学观察:正常对照组、MSCs干预组及模型对照组各4只,在动物模型建立后第7、14、21天分别处死,摘除眼球制备视网膜组织切片,并用HE染色后观察,按照Caspi组织学分级法进行评分.　　5.细胞因子检测:将大鼠麻醉后,取外周血,离心取上清,ELISA法检测血清中IL-17、IL-10、TGF-β的表达.　　***17细胞和Breg细胞检测:大鼠过量麻醉后,取外周血裂解后制成细胞悬液,摘除脾脏,研磨后分离细胞,流式细胞仪检测Th17细胞和Breg细胞的比例.　　结果:　　1.成功分离MSCs并用流式细胞仪鉴定.　　2.成功建立EAU动物模型.　　3.与模型对照组相比,MSCs干预组各个时间点大鼠眼部炎症表现均减轻(P<0.05);视网膜组织病理学炎症反应均减轻.(P<0.05).　　4.与模型对照组相比,MSCs干预组在各个时间点血清ELISA检测IL-17含量均降低(P<0.05),IL-10、TGF-β含量均升高(P<0.05).　　5.与模型对照组相比,MSCs干预组在各个时间点流式细胞仪检测Thl7细胞比例均降低(P<0.05),Breg细胞比例均升高(P<0.05).　　结论：　　Th17和Breg细胞的比例与EAU的发生、发展密切相关.MSCs治疗能够降低Th17、升高Breg在淋巴细胞中的比例,从而抑制EAU大鼠体内IL-17的分化及活性,提高IL-10、TGF-β的增殖与活性,抑制EAU炎症反应.

关键词： 调节性B细胞   B10   IL-10   1型糖尿病  

摘要： 第一部分人外周血B10细胞的表型及功能鉴定目的:鉴定人外周血B10细胞的表型及功能。方法:分离健康志愿者外周血单个核细胞,流式细胞术检测IL-10B淋巴细胞与IL-10-B淋巴细胞的表面标志,比较IL-10B与IL-10-B淋巴细胞表面CD分子的平均荧光强度,并比较不同B淋巴细胞亚群IL-10的分泌水平。流式细胞术分选B10细胞与CD4CD25-T细胞共培养,观察B10细胞对CD4细胞分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17及表达Foxp3的影响。采用中和抗体阻断实验探索B10细胞作用的可能机制。结果:(1)IL-10B淋巴细胞较IL-10-B淋巴细胞高表达CD24及CD38,IL-10B淋巴细胞表面CD24和CD38的平均荧光强度明显高于IL-10-B淋巴细胞,差异有统计学意义(P<0.01),CD19CD24hiCD38hiB淋巴细胞高分泌IL-10;(2)健康人外周血B10细胞能明显抑制CD4T细胞分泌IFN-γ(P<0.01)、TNF-α(P<0.01)和 IL-17(P<0.05),促进 CD4T 细胞分泌 IL-4(P<0.01)及表达Foxp3(P<0.05),结果具有统计学意义;(3)在B10细胞与CD4T细胞共培养体系中加入IL-10/IL-10R中和抗体后CD4T细胞分泌IFN-γ(P<0.01)、TNF-α(P<0.001)和 IL-17(P<0.05)水平上升,分泌 IL-4(P<0.05)及表达Foxp3(P<0.05)水平下降,结果具有统计学意义。而在加入CD80和CD86中和抗体后,CD4T细胞分泌IFN-γ(P<0.05)、TNF-α(P<0.05)水平上升,而分泌IL-17、IL-4及表达Foxp3水平未见明显改变(P>0.05)。结论:外周血B10细胞的表型为CD19CD24hiCD38hi;健康人外周血B10细胞具有免疫调节功能,可调节CD4T细胞各亚群平衡;B10细胞主要通过分泌细胞因子IL-10发挥免疫调节功能。第二部分T1D患者外周血B10细胞数量的检测与分析目的:检测和分析TID患者外周血B10细胞的数量变化。方法:本研究共入选受试者136例,其中T1D患者62例、健康对照74例。收集受试者外周血,分离单个核细胞,流式细胞术检测比较T1D患者和健康对照外周血各亚群T淋巴细胞及B10细胞的比例,分析T1D患者外周血B10细胞与T淋巴细胞亚群平衡的相关性,并分析T1D患者外周血B10细胞与初诊年龄、年龄、病程、性别及糖化血红蛋白水平的相关性。结果:(1)与健康对照相比,T1D患者外周血CD4T淋巴细胞比例较高,且其分泌IFN-γ、TNF-α及IL-17的比例增高,差异具有统计学意义(P<0.05),而分泌IL-4的比例减少,差异具有显著统计学意义(P<0.001);(2)与健康对照相比,T1D患者外周血B10细胞占B淋巴细胞的比例降低,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)T1D患者外周血B10细胞数量与CD4T细胞数量呈负相关(P<0.05),且与其分泌IFN-γ及TNF-α的水平呈负相关(P<0.05),与CD4CD25Foxp3T细胞数量呈明显正相关(P<0.01);(4)T1D患者外周血B10细胞与年龄、初诊年龄、病程及性别均未见明显相关(P>0.05),与检测时糖化血红蛋白水平呈负相关(P<0.05)。结论:T1D患者外周血存在着T淋巴细胞亚群比例的失衡:CD4T淋巴细胞比例的增高,且CD4T淋巴细胞分泌致病性细胞因子比例增高,分泌保护性细胞因子比例降低;T1D患者外周血存在着B10细胞数量的减少;T1D患者外周血B10细胞数量与分泌致病性细胞因子的CD4T淋巴细胞数量呈反比,与保护性Tregs数量呈正比,与HbA1c呈反比,提示B10细胞数量的变化可能参与了 T1D的发病。第三部分T1D患者外周血B10细胞功能的初探目的:观察T1D患者外周血B10细胞免疫调节功能的变化,探索B10细胞参与T1D发病的可能机制。方法:分离T1D患者外周血单个核细胞,流式细胞术反向剔除B10细胞,观察对CD4T细胞分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17及表达Foxp3的影响。检测T1D患者外周血B10细胞IL-10的分泌水平。结果:(1)与健康对照组相比,T1D患者外周血单个核细胞反向剔除B10细胞后CD4T细胞分泌IFN-y、TNF-α、IL-17有上升趋势,表达Foxp3有下降趋势,但均未见明显统计学差异(P>0.05),但CD4T细胞分泌IL-4仍有下降趋势,且具有统计学意义(P<0.05);(3)与健康对照组相比,T1D患者外周血B10细胞IL-10分泌水平明显降低,差异具有显著统计学意义(P<0.001)。结论:T1D患者外周血B10细胞存在免疫调节功能缺陷,可

关键词： 艾滋病病毒I型感染者/艾滋病患者   调节性B细胞   高效联合抗反转录病毒治疗   发病机制  

摘要： 目的:本研究旨在观察调节性B细胞在HIV-1/AIDS患者外周血中的变化,探讨其在HIV-1/AIDS疾病中的发病机制和疾病发展进程中的作用。研究方法:本项研究以云南省传染病专科医院住院部和门诊部的HIV-1/AIDS患者为实验组,以医疗卫生工作者和健康体检人群为对照组。选择121例未经过抗病毒治疗的HIV-1/AIDS患者,分成两组,其中无症状感染者82人、艾滋病患者39例,接受HAART治疗并长期随访者30例(在121例HIV-1/AIDS患者中选择)。用流式细胞术(FCM)检测其外周血中CD1d hiCD5+CD19+B细胞的比例、CD4+T淋巴细胞数量、CD8+T淋巴细胞数量、CD4细胞/CD8细胞的比值,并与同期选择的36例健康对照者作比较。通过研究HIV-1/AIDS患者和健康对照者横断面队列外周血中T淋巴细胞数量和调节性B细胞比例变化,以及其中的30例HIV-1/AIDS患者在接受HAART前、后不同时期T淋巴细胞数量和Bergs比例的表达水平变化,并且观察30例HIV-1/AIDS患者接受HAART长期随访过程中艾滋病的纵向进展和抗病毒治疗疗效的关系,统计分析组内各变量间的相关性。结果:HIV-1/AIDS患者外周血中CD4细胞数量显著低于健康对照组(P<0.001),AIDS病人的CD4细胞数量显著低于HIV-1感染组(P<0.001)。HIV-1/AIDS患者外周血中CD8细胞数量显著低于健康对照组(P<0.001),而AIDS病人的CD8细胞数量与HIV-1感染者相比无显著差异(P=0.709)。HIV-1/AIDS患者外周血中CD4细胞/CD8细胞比值显著低于健康对照组(P<0.001),AIDS病人的CD4细胞/CD8细胞比值显著低于HIV-1感染者(P<0.001)。HIV-1/AIDS患者外周血中CD1d hiCD5+CD19+B细胞的比例显著高于健康对照组(P<0.01),AIDS患者的外周血中的CD1d hiCD5+CD19+B细胞的比例显著高于HIV-1感染者(P<0.001)。并且HIV-1/AIDS患者外周血中CD1d hiCD5+CD19+B细胞的比例与CD4细胞数量(r=-0.732,r2=0.536,P<0.001)和CD8细胞数量(r=-0.253,r2=0.064,P=0.011)均呈负相关关系,或者与CD4细胞/CD8细胞的比值(r=-0.643,r2=0.414,P<0.001)呈负相关关系。30例接受HAART患者在治疗前、治疗后的2周、1个月、2个月、3个月、6个月CD1d hiCD5+CD19+B细胞的比例均与同时期的CD4细胞数量、CD8细胞数量呈负相关关系,并且在HAART治疗后CD4细胞均值有上升趋势,CD1d hiCD5+CD19+B细胞比例均值有下降趋势。结论:HIV-1/AIDS患者外周血中CD1d hiCD5+CD19+B细胞显著升高,并随着艾滋病的进展而明显增加,经过抗病毒治疗后下降。CD1d hiCD5+CD19+B细胞可能在艾滋病的免疫衰竭中发挥作用,促进了艾滋病的发展进程;针对性降低HIV-1/AIDS患者的CD1d hiCD5+CD19+B细胞比例可能有利于抑制艾滋病的发展进程。