关键词： 牛白藤   傅里叶变换红外光谱   指纹图谱  

摘要： 目的探索牛白藤红外光谱(IR)快速鉴定技术。方法采用傅里叶变换红外光谱(FT-IR)对牛白藤原药材进行整体分析。结果获得牛白藤的红外指纹图谱特征吸收峰有:3418,2925,2854,1723,1650,1514,1401,1319,1267,1155,1104,1054,1030,919,811,782,763,664,592,538,520 cm^(-1),并确定1267,1030,919 cm^(-1)为牛白藤镇痛抗炎药效成分熊果酸的红外特征指示峰。各样品IR相似度在0.9003~0.9895范围内,因此拟定牛白藤的IR相似度阈值为0.90。结论牛白藤的FT-IR指纹图谱可为其快速鉴定及质量控制提供科学依据。

关键词： 牛白藤   化学成分   药理研究   临床应用  

摘要： 牛白藤[Hedyotis hedyotidea(DC.)Merr.]为茜草科耳草属干燥全草,在我国广西、广东、福建、台湾地区、贵州、云南等地广泛分布,资源丰富。现代研究表明,牛白藤中含有萜类、甾体类、香豆素类、木脂素类等化合物,具有镇痛、抗肿瘤、抗菌消炎、抗白血病效应等作用。目前,牛白藤的药理活性研究大多以萜类为主,但是相关的药理机制研究较少。因此,本文对牛白藤的化学成分与药理作用及临床应用研究进行归纳总结,为今后对牛白藤的开发利用提供理论参考。

关键词： 牛白藤   饮片   薄层色谱   水分   总灰分   浸出物   质量标准  

摘要： 目的制定牛白藤饮片的质量标准。方法牛白藤为茜草科植物牛白藤Hedyotis hedyotidea(DC.)Meer.的干燥藤茎,12批饮片样品来源于湖南省内4家中药饮片公司。完善薄层色谱(TLC)鉴别牛白藤饮片方法。新增水分、总灰分检查项目,按《中国药典》2020年版水分测定法第二法、灰分测定法测定样品的总灰分量,按水分的平均值、总灰分的平均值的120%计算水分、总灰分的控制限度;按浸出物测定法测定水溶性浸出物的含量,按浸出物平均值的80%计算浸出物的控制限度。结果完善后薄层色谱方法检验效率更高。12批牛白藤样品水分平均值为12.67%,建议水分限度定为“不得过15.0%”;总灰分平均值为8.71%,建议总灰分限度定为“不得过11.0%”;浸出物测定样品的水溶性浸出物平均值为16.04%,建议浸出物限度定为“不得少于13.0%”。结论新增了水分、总灰分检查项目;薄层色谱鉴别提高了检验效率;浸出物测定更符合临床应用实际。为牛白藤饮片质量标准完善提供了依据。

关键词： 类风湿性关节炎   牛白藤   龙胆苦苷   代谢组学   CIA  

摘要： 目的类风湿性关节炎是一种慢性自身免疫性疾病,主要表现为滑膜炎症及关节损伤,本文旨在建立CIA大鼠模型研究牛白藤以及龙胆苦苷的药效,从Th17/Treg细胞平衡以及代谢组学角度探索龙胆苦苷抗类风湿性关节炎的作用机制。方法1.建立CIA大鼠模型,研究牛白藤对CIA大鼠的治疗作用。2.运用LC-MS技术对牛白藤进行成分分析。3.建立LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型,探讨龙胆苦苷在炎症细胞模型上对炎症因子的调控作用。4.建立CIA大鼠模型,研究龙胆苦苷对CIA大鼠的治疗作用以及从Th17/Treg细胞平衡的角度探索其抗炎机制。5.收集各组大鼠血浆,运用代谢组学技术研究龙胆苦苷抗类风湿性关节炎的作用机制。结果1.牛白藤对于CIA大鼠具有治疗作用。2.结合文献,初步识别了10种化合物,即车叶草苷酸、车叶草苷、龙胆苦苷、脱氧根皮苷、槲皮苷、乌苏酸、齐墩果酸、人参皂苷F1、人参皂苷K。3.在细胞实验中,龙胆苦苷能减少NO,TNF-α,IL-1β,PGE-2等炎症因子的分泌。4.在整体实验中,龙胆苦苷对CIA大鼠具有治疗作用且具有剂量依赖性。5.通过LC-MS分析,模型组与空白组相比,血浆代谢轮廓发生了明显变化,在正、负离子模式下,共筛选出44种差异性代谢物。通过KEGG代谢通路分析,得出他们主要与Th17细胞分化;苯丙氨酸代谢;视黄醇的新陈代谢;半胱氨酸和蛋氨酸代谢;丙氨酸、天冬氨酸、和谷氨酸代谢;氨酰生物合成等代谢通路相关。在龙胆苦苷干预后,有10个生物标志物产生了回调现象。包括PC、LPG、LPC、天门冬氨酸等。结论牛白藤和龙胆苦苷在一定程度上具有抗类风湿性关节炎的作用。本研究为龙胆苦苷发挥抗RA作用提供了新的内在机制,并预测牛白藤和龙胆苦苷有望成为治疗类风湿性关节炎的药物。

关键词： 牛白藤   提取工艺   齐墩果酸   熊果酸   正交试验  

摘要： 目的:优选瑶药牛白藤的提取工艺。方法:以齐墩果酸含量、熊果酸含量和干膏率的综合评分为评价指标,对牛白藤三种提取方法(煎煮法、浸渍法、回流提取法)进行筛选;采用单因素试验和正交试验法,以乙醇浓度、提取时间和溶剂倍量为考察因素,优选牛白藤的提取工艺。结果:提取方法以回流提取法最优,最佳提取工艺为加12倍量75%乙醇回流提取120 min。结论:该工艺稳定可靠、重复性好,提取率高,可为牛白藤的后续研究提供参考。

关键词： 牛白藤   绣球酚   含量测定  

摘要： 目的对牛白藤叶中的绣球酚进行分离鉴定并建立其含量测定方法,为牛白藤药材的进一步开发研究提供参考,同时对不同产地、不同批次牛白藤叶中绣球酚的含量进行比较。方法采用HPLC,使用Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈∶0.02 mol/L磷酸二氢铵(用磷酸调节p H值至3.0)=33∶67,流速1.0 m L/min,柱温35℃,检测波长350 nm。结果绣球酚在0.412~10.300μg范围内线性关系良好(r=1.000 0);平均回收率为99.09%(RSD=0.53%);精密度及重复性均良好,RSD均小于1%。不同产地及批次牛白藤叶中绣球酚含量为0.03%~0.38%,其中广西产含量最高。结论本研究建立的方法操作简便、准确,专属性强,重复性好,可用于牛白藤叶中绣球酚的含量测定;不同产地、不同批次牛白藤叶中绣球酚含量差异较大,其中广西、广东产牛白藤中绣球酚含量较高。

关键词： 牛白藤   白桦醇   熊果酸   抗炎化合物   肝炎治疗   T细胞活化  

摘要： 牛白藤在传统医学中常用于多种自身免疫病包括肝炎的治疗，但有关其抗肝炎作用的有效成分及潜在作用机制的研究鲜有报道。小鼠静脉注射刀豆蛋白A（concanavalin A, ConA）诱导的急性爆发性肝炎是典型的T细胞介导的自身免疫性肝损伤，是公认的研究人类多种肝脏疾病发病机制和筛选护肝药物的理想动物模型。本研究在前期从牛白藤中分离并鉴定出8个单体化合物的基础上，以 ConA刺激的小鼠脾细胞增殖实验体系筛选出具有抑制脾细胞增殖作用的化合物，再将其进一步应用于ConA诱导的急性肝炎小鼠模型，探讨其在体内对肝炎的影响及潜在的机制。　　论文共包括二个部分，其主要内容与结果如下：　　一、牛白藤中抗炎化合物的筛选　　目的：筛选牛白藤中具有抑制ConA刺激的小鼠脾细胞增殖作用的化合物。　　方法：通过ConA刺激小鼠脾细胞增殖的实验体系，分别采用MTT（methyl thiazolyl tetrazolium）比色法、CFSE（carboxyfluorescein diacetate）和PI（propidium iodide）双荧光染色联合流式细胞术（flow cytometry, FCM）筛选具有抑制ConA刺激脾细胞增殖作用的化合物，并进一步观察其对脾细胞和正常肝细胞活性的影响，以排除药物毒性。　　结果：8个化合物中，白桦醇和熊果酸可抑制ConA刺激的脾细胞增殖，存在剂量-效应关系（P<0.05），且在有效浓度范围内对脾细胞和正常肝细胞的活性几乎无影响，其中白桦醇抗炎作用更强且相对毒性更低。　　结论：白桦醇和熊果酸是牛白藤中具有抗炎作用的活性成分。　　二、白桦醇和熊果酸对ConA诱导的小鼠急性肝损伤的影响　　目的：探讨白桦醇与熊果酸在体内对ConA诱导的急性肝炎的作用及其机制。　　方法：采用静脉注射 ConA（15mg/kg，体重）建立小鼠急性爆发性肝炎动物模型。造模前3天腹腔注射给予不同剂量的白桦醇或熊果酸（10mg/kg或20mg/kg），每天一次连续3天，第3天给药后1小时，给予ConA造模;造模10小时后检测血清转氨酶水平、肝指数和肝组织病理切片观察肝损伤程度。通过流式微球分析法（cytometric bead array, CBA）测定血清中7种细胞因子水平，并进一步检测肝脏中淋巴细胞亚群的构成比例，以及 T细胞活化状态，最后通过胞内细胞因子染色分析T细胞各亚群的功能。　　结果：注射 ConA10小时后，模型组小鼠血清中谷丙转氨酶（alanine aminotransferase, ALT）和谷草转氨酶（aspartate transaminase, AST）水平显著升高;肝指数增大;H&E切片中可观察到肝细胞水肿明显，肝组织结构紊乱，并可见大量灶状坏死区和炎症细胞浸润。预先给予白桦醇或熊果酸可明显降低小鼠血清中ALT和AST水平;肝指数降低;肝细胞水肿减少、仅见少量点状坏死、炎症细胞浸润也明显减少;血清中炎症细胞因子干扰素γ（interferon-gamma, IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）和白细胞介素6（interleukine-6, IL-6）水平明显降低;治疗组小鼠存活率明显提高。进一步研究发现白桦醇或熊果酸对ConA诱导的肝损伤保护机制包括：缓解肝脏中自然杀伤T（natural killer T, NKT）细胞的清除;显著下调ConA诱发的传统T细胞和NKT细胞活化状态，降低传统T细胞和NKT细胞分泌IFN-γ和TNF-α的水平;但并不影响两类细胞产生细胞因子的潜能。　　结论：白桦醇和熊果酸可有效减轻ConA诱导的急性肝损伤，具有抗炎和护肝作用;民间应用牛白藤治疗各种肝脏疾病的药理基础可部分归因于存在的白桦醇和熊果酸等成分。

关键词： 牛白藤   (6S,9S)-vomifoliol   环烯醚萜   三萜   甾体   免疫抑制活性  

摘要： 研究茜草科耳草属植物牛白藤Hedyotis hedyotidea（DC.）Merr.干燥藤茎的化学成分及免疫抑制活性,为进一步开发利用牛白藤提供依据。以硅胶、凝胶柱色谱、制备高效液相色谱进行分离纯化,并应用MS和NMR技术分析鉴定化合物结构,分离得到11个化合物吐叶醇（6S,9S-vomifoliol,1）,桦木酮酸（betulonic acid,2）,白桦脂酸（betulinic acid,3）,白桦醇（betulin,4）,表白桦脂酸（3-epi-betulinic acid,5）,乌苏酸（ursolic acid,6）,β-谷甾醇（β-sitosterol,7）,stigmast-4-en-3-one（8）,7β-hydroxysitosterol（9）,（3β,7β）-7-methoxystigmast-5-en-3-ol（10）和巴戟醚萜（morindacin,11）。化合物1,2,4,8-11均首次从该植物中分得,化合物1,2,8-11均首次从耳草属植物中分得,化合物9,10均首次从茜草科植物中分得。通过体外淋巴细胞转化实验测试化学成分的免疫抑制活性,化合物4,6,9均有较强的免疫抑制活性。

关键词： 牛白藤   白花蛇舌草   白血病   槲皮素   水煎液   中药治疗  

摘要： 广东潮汕地区民间使用牛白藤、白粉藤和玉叶金花各一两水煎服治疗痰核瘰疬。该复方有解毒凉血、化痰散结之功效，可用于毒热炽盛、瘀血痰结型白血病中药治疗。牛白藤为茜草科耳草属植物，主要生长在我国广东、广西、云南、贵州、福建和台湾等地，民间常用来治疗中暑、感冒咳嗽、胃肠炎、腰腿痛、骨折和皮肤病等。有文献报道牛白藤具有抗炎、镇痛和抗溃疡活性，但尚未见其具是否抗癌活性报道。为此，本研究以常用耳草属抗癌中药白花蛇舌草为对照，观察了牛白藤体外抗白血病效应。结果显示牛白藤水煎液具有与白花蛇舌草水煎液等效的体外抗白血病作用，牛白藤水煎液在体外可诱导白血病细胞凋亡。此外，牛白藤水煎液中含有包括槲皮素在内的黄酮类化合物。\n 方法：\n 第1章：\n 1.按常规方法分别制备牛白藤、白花蛇舌草水煎液。\n 2.不同浓度牛白藤、白花蛇舌草水煎液分别作用人白血病细胞系HL-60和K56272小时， MTT检测细胞增殖活性。\n 3.不同浓度牛白藤、白花蛇舌草水煎液分别作用人白血病细胞系HL-60和K56224小时，提取细胞总蛋白，蛋白印迹法检测PARP剪切片段。\n 4.用选定浓度牛白藤、白花蛇舌草水煎液分别作用正常人外周血单个核细胞72小时，倒置显微镜观察细胞形态学变化。\n 第2章\n 1.活性炭分别吸附牛白藤、白花蛇舌草水煎液，制备成活性炭吸附后水煎液和水煎液经活性炭吸附后解吸附液两部分。\n 2.将活性炭分离得到的两部分水煎液分别作用人白血病细胞系HL-60和K56272小时， MTT检测细胞增殖活性。\n 3.活性炭吸附-Na2CO3洗脱-乙酸乙酯萃取方法提取牛白藤水煎液中黄酮类化合物。\n 4.液相色谱-质谱法分析水煎液中提取出的黄酮类化合物化学组分。\n 5.用槲皮素标准品作对照，高效液相色谱与离子阱二级质谱鉴定黄酮类化合物中的槲皮素。\n 结果：\n 第1章\n 1.牛白藤与白花蛇舌草两种水煎液体外抑制HL-60与K562细胞系增殖的IC50值相近。\n 2.牛白藤水煎液体外可诱导K562、HL-60细胞PARP形成明显剪切片段。\n 3.大于 IC50值约50倍的牛白藤、白花蛇舌草水煎液分别作用正常外周血单个核细胞72小时，细胞形态学未见发生明显变化。\n 第2章\n 1.牛白藤与白花蛇舌草水煎液所含体外抗白血病活性成分并不完全相同。\n 2.牛白藤水煎液可分离出黄酮类化合物。\n 3.液相色谱-质谱法分析结果显示黄酮类化合物中可能含槲皮素。\n 4.高效液相色谱与离子阱二级质谱证实提取的黄酮类化合物含槲皮素。\n 结论：\n 1.牛白藤与白花蛇舌草两种水煎液具有等效体外抗白血病效应。\n 2.牛白藤水煎液中含有包括槲皮素在内的黄酮类化合物。

关键词： 牛白藤   化学成分   色谱技术   分离鉴定  

摘要： 牛白藤为茜草科耳草属植物牛白藤Hedyotis hedyotidea(DC.) Merr.的干燥藤茎，具有清热解暑、祛风除湿、消肿解毒等功效，主治风湿、感冒咳嗽和皮肤湿疹等症。本文综合应用了各种色谱技术，从牛白藤石油醚和二氯甲烷部位中分离得到了21个化合物，其中化合物1（1-O-methylguaiacylglycerol）为新化合物，化合物2[(6S,9S)-vomifoliol]为新的天然产物。化合物1-12，15，17-19，21均首次从该植物中分得，化合物3-6，8-11，17-19，21均首次从耳草属植物中分得，化合物6，8-11，19，21均首次从茜草科中分得。茜草科植物的化学成分主要是环烯醚萜，三萜，甾体，蒽醌和黄酮。本文从牛白藤中分离得到的化合物类型主要有木脂素，降倍半萜，环烯醚萜，三萜和甾体,佐证了牛白藤在茜草科植物中的化学分类学地位。化合物2首次从天然产物中分离得到，对茜草科植物的化学分类学有无意义，还有待进一步研究。化合物4仅从茜草科植物海滨木巴戟（Morinda citrifolia）中分离得到过，表明化合物4对茜草科植物化学分类学有重要意义。