关键词： 三阴性乳腺癌   穿心莲内脂   YAP蛋白   上皮间质转化  

摘要： 目的通过体内外实验,探讨穿心莲内酯(andrographolide,Andro)对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移、干细胞特性和上皮间质转化进程的影响及可能作用机制。方法利用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法检测细胞活性;采用细胞划痕实验、流式技术和干细胞成球实验检测细胞迁移能力、干细胞增殖能力及CD44^(+)/CD24^(-/low)的比例;Western Blot实验检测NESTIN、NANOG、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、p-YAP、YAP、ANKRD1蛋白的表达。采用小鼠移植瘤实验检测Andro对乳腺癌细胞体内增殖和小鼠致瘤性的作用。利用免疫组化实验检测各组肿瘤组织中YAP和ANKRD1的表达。结果体外实验结果表明:Andro可剂量依赖性降低MDA-MB-231和4T1细胞活性;与对照组比较,经Andro干预后的MDA-MB-231和4T1细胞的划痕愈合率降低,CD44^(+)/CD24^(-/low)比例下降,干细胞微球的体积减小和数量降低(P<0.05),NESTIN、NANOG、Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、YAP和ANKRD1蛋白表达下降,而E-cadherin和p-YAP的表达上升。体内实验结果表明:与对照组相比,经Andro干预的小鼠肿瘤体积和肿瘤质量减小,肿瘤组织中YAP和ANKRD1的表达下降(P<0.01)。结论Andro可通过调控Hippo/YAP信号通路发挥抗三阴性乳腺癌的作用。

关键词： 网络药理学   山茱萸-虎杖   三阴性乳腺癌   分子对接  

摘要： 目的利用网络药理学方法结合分子对接探究山茱萸-虎杖药对治疗三阴性乳腺癌的作用机制。方法采用TCMSP数据库获取药物的化学成分及其相关靶点;选择Gene Cards和OMIM数据库收集疾病的相关靶点,筛选出二者的共同靶点后可绘制蛋白质互作(PPI)网络;对关键靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因组与基因组百科全书通路(KEGG)通路富集分析,最后进行分子对接验证。结果筛选得到药物有效成分共20个;疾病相关靶点1512个,与药物共同靶点47个。通过PPI网络得出ESR1、EGFR和PTGS2为关键靶点。GO通路和KEGG富集分析显示,山茱萸-虎杖药对通过参与多种生物学过程抗三阴性乳腺癌;通过PI3K-Akt等信号通路调控病理进程。分子对接显示活性成分与核心靶点之间有较好的结合力。结论山茱萸-虎杖可以通过多成分、多靶点、多途径发挥抗三阴性乳腺癌的作用,从而为其临床应用及相关机制的研究提供理论依据。

关键词： 半枝莲   网络药理学   三阴性乳腺癌   靶基因   信号通路  

摘要： 目的利用网络药理学探讨半枝莲治疗三阴性乳腺癌的作用机制。方法本研究采用网络药理学方法,主要包括靶点预测、网络构建和功能富集。从中药系统药理学数据库与分析平台中获取“半枝莲”所有化合物靶点,并与其活化物进行匹配,发现木犀草素和汉黄芩素为主要相关化合物。构建蛋白-蛋白相互作用网络获得相关靶点信息,构建半枝莲与三阴性乳腺癌相关靶点网络,分析半枝莲抗三阴性乳腺癌的关键信号通路。结果共获得15个活性化合物的104个靶点。网络分析得出10个半枝莲治疗三阴性乳腺癌的关键靶点。功能富集分析表明,半枝莲可能通过协同调节多种生物学相关信号通路,对三阴性乳腺癌产生治疗作用。结论半枝莲治疗三阴性乳腺癌的药理机制可能与其协同调节细胞凋亡、细胞周期、分化、增殖、迁移、侵袭和血管生成密切相关。

关键词： 余甘子   三阴性乳腺癌   网络   药理学  

摘要： 目的借助网络药理学方法和实验验证方法探究余甘子抗三阴性乳腺癌(TNBC)的作用机制。方法1.网络药理学方法:1)通过TCMSP数据库分析余甘子活性成分,2)借助Pharm Mapp数据库进行作用靶点垂钓,3)利用生物信息学方法筛选TNBC差异表达基因,4)进行GO生物功能和KEGG通路富集分析,5)运用STRING数据库进行蛋白质互作网络的构建,6)使用Kaplan-Meier Plotter工具对相关靶点作生存分析,2.实验验证方法:1)用CCK-8法探究余甘子粗提物对MDA-MB-231细胞生长的影响,2)以划痕实验探究余甘子粗提物对三阴性乳腺癌细胞迁移能力的影响。结果1.网络药理学方法结果:1)通过TCMSP数据库获得余甘子有效活性成分21个,2)通过靶点垂钓分析得到作用靶点115个,3)通过TNBC差异基因分析发现2876个基因表达发生显著变化,4)余甘子有29个主要作用靶点影响孕酮受体、激素调节信号传导、乳腺细胞分化和中心体分离等通路,5)确定关键靶点为AURKA、PGR、AR、CCNA2、PPARG,6)AURKA、CCNA2的低表达与PGR、AR、PPARG的高表达与患者生存预后呈正相关关系;2.实验验证方法结果:1)确定了余甘子粗提物IC_(50)=6.1μg·mL^(-1),2)余甘子粗提物显著抑制MDA-MB-231细胞迁移。结论1.网络药理学结论:1)确定了余甘子抗TNBC的21种主要活性成分,2)预测其关键靶点为AURKA、PGR、AR、CCNA2、PPARG;2.实验验证结论:余甘子粗提物能够明显抑制MDA-MB-231细胞的生长和迁移。

关键词： 山慈菇   三阴性乳腺癌   网络药理学   分子对接  

摘要： 本研究基于网络药理学与分子对接的方法探讨山慈菇治疗三阴性乳腺癌的作用机制。利用TCMSP数据库和文献中获得山慈菇化学成分,在Swiss Target Prediction平台上搜索活性成分靶点;采用OMIM、GeneCards数据库检索三阴性乳腺癌靶点,并通过String构建蛋白质互作网络,使用DAVID数据库对核心靶点进行GO分析和KEGG通路富集分析;另外选取部分化合物和靶点使用Autodock软件进行分子对接验证;运用Western blot法检测相关调控靶点蛋白的表达。结果显示,共筛选出12个山慈菇活性成分,97个关键靶点,分子对接发现主要靶点HSP90AA1、EGFR、MAPK1、JUN和PIK3CA均与活性成分对接较好。山慈菇的作用靶点富集于PI3K-AKT信号通路,山慈菇通过降低p-AKT和p-PI3K的表达水平进行调控乳腺癌细胞的增殖、凋亡和迁移。本研究初步预测了山慈菇的有效活性成分、关键靶点和作用机制,可为山慈菇治疗三阴性乳腺癌的临床应用提供依据。

关键词： 三阴性乳腺癌   细胞周期依赖性激酶7   RNA聚合酶Ⅱ   THZ1   ZJC-11  

摘要： 研究目的三阴性乳腺癌（Triple-negative breast cancer,TNBC）是一种侵袭性乳腺癌,没有雌激素受体（Estrogen receptor,ER）,孕激素受体（progesterone receptor,PR）和人表皮生长因子受体-2（Human epidermal growth factor receptor-2,HER2）的表达。它是一种高度转移的异质性疾病,占乳腺癌总病例的10-15%,与非TNBC病例相比,治疗后五年内预后较差,复发率高。TNBC肿瘤的诊断和亚型对于确定治疗方案并为每个TNBC个体建立个性化,有针对性的药物至关重要。CDK7是细胞周期蛋白家族（Cyclin-dependent kinase,CDK）的重要成员之一,其参与调节多种生物过程,如细胞周期、基因转录和DNA修复。研究显示CDK7在TNBC中显著高表达,与TNBC临床预后显著相关,并形成肿瘤发生的驱动力,因此靶向CDK7可能成为治疗TNBC发生发展有效手段之一。本课题组前期合成并筛选了CDK7抑制剂THZ1的结构改造物——ZJC-11,发现其可能具有抗TNBC作用。因此本研究探究了ZJC-11药物代谢与动力学特征,阐述了ZJC-11对TNBC细胞周期、转录以及DNA修复的影响机制,提供了靶向CDK7可作为抗TNBC的可行性证据,进一步为临床开发更多高效的CDK7抑制剂提供参考。研究方法一、CDK7抑制剂ZJC-11的药代动力学及抗TNBC药效学研究1.通过MTT实验筛选15个THZ1结构改造化合物的抗TNBC细胞活性,得到化合物ZJC-11;2.通过药代动力学研究ZJC-11的药代动力学特征,KM小鼠单次尾静脉给予10mg/kg ZJC-11和10mg/kg THZ1,在给药后5min、10min、15min、30min、1h、2h取眼眶静脉血,分离得到含药血浆,样品经前处理后采用HPLC/MS检测样品血药浓度,再用DAS 3.0软件计算主要药代动力学参数(如t、AUC、CL等),并拟合药时曲线。3.通过MTT检测ZJC-11对TNBC细胞系（MDA-MB-231和MDA-MB-468）与ER/PR+细胞系（ZR-75-1）细胞活力的影响;4.通过细胞克隆和明场下观察ZJC-11对TNBC细胞系（MDA-MB-231和MDA-MB-468）与ER/PR+细胞系（ZR-75-1）细胞增殖和细胞形态的影响;5.通过流式细胞术和荧光检测ZJC-11对TNBC细胞系（MDA-MB-231和MDA-MB-468）与ER/PR+细胞系（ZR-75-1）细胞死亡的诱导作用;6.通过流式细胞术检测ZJC-11对TNBC细胞系（MDA-MB-231和MDA-MB-468）与ER/PR+细胞系（ZR-75-1）细胞周期和细胞活性的影响;7.通过Western Blot检测ZJC-11对TNBC细胞系（MDA-MB-231和MDA-MB-468）、ER/PR+细胞系（ZR-75-1）以及肿瘤组织中CDK7和RNAPII的磷酸化蛋白水平的影响;8.通过建立BALB/c裸鼠体内MDA-MB-231细胞原位移植瘤模型,腹腔注射给予4mg/kg和8mg/kg ZJC-11,观察ZJC-11对裸鼠肿瘤生长及体重的影响;9.通过免疫组化检测ZJC-11对细胞增殖标志物Ki67的影响。二、CDK7抑制剂ZJC-11抗TNBC的机制研究1.通过体外激酶活性实验检测ZJC-11对CDK2、CDK7以及CDK9的选择性抑制作用;2.通过分子对接模型验证ZJC-11与CDK7的结合作用;3.通过转录组学分析ZJC-11对TNBC细胞系（MDA-MB-231）基因转录的影响;4.通过Reactome富集分析探究ZJC-11诱导细胞衰老的作用。研究结果一、CDK7抑制剂ZJC-11的药代动力学及抗TNBC药效学研究1.通过对15个化合物的抗TNBC活性筛选发现,ZJC-11能够抑制MDA-MB-231细胞活力,且IC50均高于其余化合物;2.药代动力学实验结果显示,与THZ1相比,ZJC-11的AUC、C、C明显较高,而T较低,这表明ZJC-11在血浆中暴露量比THZ1大。相反,ZJC-11的V和CL更低,这表明了ZJC-11的清除率更高,并且其在体内的分布更窄。***实验结果表明,相比ER/PR+乳腺癌细胞ZR-75-1,ZJC-11分别处理TNBC细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468 48h和72h后能显著降低细胞活力,并且具有较好的时间依赖性和剂量依赖性;4.细胞克隆实验及明场观察细胞结果表明,相比ER/PR+乳腺癌细胞ZR-75-1,ZJC-11能显著改变TNBC细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞形态并明显抑制集落形成;5.流式细胞

关键词： 细胞穿膜肽   SN38   三阴性乳腺癌   抗转移   胶束  

摘要： 三阴性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌中最具侵袭性、预后最差的一种亚型,其主要特征表现为高概率的远端转移,有20%的TNBC患者在五年内死于转移性疾病进展。研究表明,7-乙基-10-羟基喜树碱(SN38)对TNBC细胞有显著的杀伤能力,并且前期研究发现SN38对TNBC的转移也具备一定的抑制作用。但是SN38的溶解性极差,在体内有效递送和渗透肿瘤组织存在障碍,不能直接应用于临床。通过细胞穿膜肽修饰的两亲性胶束可以有效地改善上述问题,但需要其对肿瘤细胞具有一定的选择性蓄积能力。本研究采用亲水性的聚乙二醇(PEG)与SN38疏水端相连,合成PEG-SN38前药,并选取了细胞穿膜肽TAT修饰PEGSN38,TAT-PEG-SN38在水溶液中自组装形成胶束。TAT-PEG-SN38胶束极大地改善了SN38的水溶性,TAT的引入也增强了胶束对肿瘤细胞的选择性摄取能力和对肿瘤组织的渗透能力,有效抑制了TNBC的肿瘤活性和远端转移。作为新型、高效且安全的抗TNBC药物,具有潜在的临床应用前景,值得作进一步的深入研究。本研究主要包括以下内容:1、TAT-PEG-SN38的合成及表征利用PEG作为linker两端连接TAT和SN38以制备TAT-PEG-SN38。两亲性的TAT-PEG-SN38在水相溶液中可以自组装形成胶束,粒径约为142 nm,电位约为+8.44 m V;通过扫描电镜观察胶束形态为均匀的近球体,胶束溶解性、稳定性良好,粒径、电位适中可以满足体内外药效评价条件。2、TAT-PEG-SN38的体外抗肿瘤效果研究TAT-PEG-SN38对鼠源三阴性乳腺癌细胞系4T1细胞和人源三阴性乳腺癌BT-549具有显著的细胞毒性:对于4T1细胞系,经过TAT的修饰,PEG-SN38的细胞毒性提高了3.61倍;而对于BT-549细胞系,TAT-PEG-SN38组的细胞杀伤效果也明显高于SN38、CPT-11和PEG-SN38。TAT-PEG-SN38对肿瘤细胞的毒性增强是由于细胞穿膜肽修饰改善了PEG-SN38的细胞摄取能力,与PEGSN38相比,4T1和BT-549细胞对TAT-PEG-SN38的细胞摄取强度分别提高了4.2倍和1.7倍。引入正常乳腺上皮细胞HC-11细胞系作为参照分析TAT修饰对肿瘤细胞的选择性,发现TAT-PEG-SN38的摄取与PEG-SN38相比并未有显著增强,可能由于细胞表面电荷差异,TAT-PEG-SN38对肿瘤细胞的内化具有一定的选择性。以3D肿瘤球模型模拟TAT-PEG-SN38的肿瘤穿透能力,孵育24 h后TAT-PEG-SN38渗透进入肿瘤球内部,PEG-SN38仅存在于肿瘤球表面,并且TAT-PEG-SN38明显抑制了肿瘤球的生长。上述实验证明,TAT-PEG-SN38能选择性地被肿瘤细胞摄取,并渗透进入肿瘤内部,具有优越的体外抗肿瘤活性。3、TAT-PEG-SN38的体内抗肿瘤活性评价建立小鼠乳腺癌原位荷瘤模型,对TAT-PEG-SN38的体内抗肿瘤效果进行评价:活体成像结果表明静脉注射胶束8 h后,TAT-PEG-SN38在肿瘤部位有效蓄积,进一步证明TAT能够将药物有效递送到肿瘤区域增强摄取。与Control组相比,TAT-PEG-SN38抑制了52.42%的肿瘤增长,抑制效果是PEG-SN38的1.57倍。通过对肺组织转移情况观察,可以发现TAT-PEG-SN38组对TNBC在体内器官的转移抑制效果明显高于其余给药组。病理性切片分析验证了同样的结果,除TAT-PEG-SN38组外,肿瘤向肝脏和肺脏均出现了不同程度的转移。由此可见,TAT-PEG-SN38明显改善了4T1小鼠荷瘤模型中的器官转移情况。通过免疫组化分析发现,与其他组相比,TAT-PEG-SN38组的抗原CD31的表达量最低,说明TAT-PEG-SN38组可有效抑制肿瘤新生血管的生成。TAT修饰显著提高了PEG-SN38的体内TNBC抗肿瘤效果,抑制了TNBC远端转移。4、TAT-PEG-SN38的抗转移研究首先,在细胞水平考察TAT-PEG-SN38对4T1和BT-549两种细胞系的转移抑制能力:通过细胞划痕愈合和Transwell细胞迁移的研究可以发现,TAT-PEGSN38划痕愈合率分别仅为16.17%、22.19%;,而在Transwell细胞迁移实验中,TAT-PEG-SN38处理组的细胞几乎未发生迁移。和对照组相比,CPT-11并未显著抑制细胞的迁移,TAT-PEG-SN38显著改善了CPT-11的细胞转移抑制能力。通过蛋白质组学对小鼠肿瘤组织的蛋白表达差异分析发现,相比于对照组,TAT-PEG-SN38给药组中有15种蛋白的表达发生了上调,29种蛋白发生了下调,其中与肿瘤转移相关的蛋白中包括DSG2和LDLR、JUP蛋白,并通过

关键词： 三阴性乳腺癌   细胞周期蛋白依赖性激酶7   N76-1   细胞周期,凋亡  

摘要： 1背景:目前,乳腺癌的治疗手段主要包括手术治疗、化疗、放疗、内分泌治疗和靶向治疗。然而,三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)因缺乏雌激素受体(Estrogen receptor,ER)、孕激素受体(Progesterone receptor,PR)、人表皮生长因子受体2(Human epidermal growth factor receptor 2,HER2)的表达,对靶向治疗或内分泌治疗几乎无效,除化疗外尚无其他有效的全身治疗措施。但是,遗传高度特异性的TNBC具有相对统一的转录程序,该程序异常依赖于细胞周期蛋白依赖性激酶7(Cyclin dependent kinases 7,CDK7)。因此CDK7被认为是TNBC有潜力的治疗靶点,CDK7抑制剂的开发对TNBC有效治疗策略的研发具有重要意义。在这项研究中,我们通过将共价CDK7抑制剂THZ1的侧链连接到ALK抑制剂色瑞替尼的母核,获得了新型CDK7的抑制剂N76-1。本研究旨在阐明N76-1抗TNBC的作用和潜在机制,以期为TNBC新药开发提供新的策略和研究基础。方法:一、CDK7抑制剂N76-1抗TNBC作用研究1.以TNBC乳腺癌细胞系MDA-MB-231、CAL-148、MFM-223细胞和ER+乳腺癌细胞系ZR-75-1为研究对象,采用MTT实验以及平板克隆实验检测N76-1对TNBC细胞活力和增殖的影响;2.高内涵细胞成像系统分析N76-1对TNBC细胞迁移的影响;3.采用流式细胞术检测N76-1对MDA-MB-231、CAL-148和MFM-223细胞周期的影响;Western blot检测N76-1对细胞周期相关蛋白:细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(Cyclin-dependent kinase 1,CDK1)及磷酸化CDK1(p-CDK1)表达的影响;4.采用流式细胞术检测N76-1对MDA-MB-231、CAL-148和MFM-223细胞凋亡的影响;Western blot检测N76-1对细胞凋亡相关蛋白:多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)、Cleaved-PARP、胱天蛋白酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase3,Caspase3)、Cleaved-Caspase3表达的影响;5.4周龄KM小鼠,尾静脉注射N76-1(3mg/kg)和THZ1(3mg/kg)后,不同时间点取血,并分离淡黄色含药血浆,使用液质联用色谱检测血药浓度,分析N76-1和THZ1在小鼠体内的代谢情况。6.建立MDA-MB-231细胞株裸鼠原位移植瘤模型,以每天两次的频率腹腔注射阳性对照THZ1(10mg/kg)以及N76-1(4 mg/kg和2mg/kg)共21天,评估N76-1体内抗肿瘤作用;7.苏木精—伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE)检测N76-1对裸鼠脏器生理结构的影响;免疫组织化学染色(Immunohistochemistry staining,IHC)检测N76-1对裸鼠原位移植瘤Ki67表达水平的影响。二、N76-1抗TNBC作用机制研究1.蛋白激酶实验检测N76-1对细胞周期蛋白依赖性激酶1(Cyclin-dependent kinase 1,CDK1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,CDK2)、CDK7细胞周期蛋白依赖性激酶9(Cyclin-dependent kinase 9,CDK9)和细胞周期蛋白依赖性激酶12(Cyclin-dependent kinase 12,CDK12)5个激酶的半抑制浓度,初步评估N76-1的靶点选择性;Western blot检测N76-1对CDK7蛋白表达水平和CDK7下游蛋白RNA聚合酶Ⅱ(RNA polymerase II,RNAPⅡ)的表达水平及其磷酸化水平的影响;2.使用分子对接预测N76-1与CDK7的结合位点以及结合能;细胞热转移分析(Cellular Thermal Shift Assay,CETSA)实验检测N76-1与CDK7结合作用;3.使用si RNA敲低CDK7,流式细胞术检测CDK7和N76-1对TNBC细胞细胞活力、周期和凋亡的影响;4.N76-1处理三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h,收集细胞,提取RNA,经转录组学测序,分析N76-1对MDA-MB-231细胞全基因组转录水平的影响;Reactome富集分析、GO富集分析和GSEA富集分析N76-1调控的三阴性乳腺癌的可能作用机制并检测关键基因转录水平和蛋白表达水平;

关键词： 三阴性乳腺癌   FAK抑制剂   黏附斑   抗转移  

摘要： 开发黏附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)抑制剂有望成为靶向治疗三阴乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)有效途径之一。然而,现有FAK抑制剂主要为激酶抑制剂,靶向高度保守的中心激酶催化域,缺乏对非酶催化功能的干预,对FAK的选择性也有待进一步提高,限制了其进一步临床应用。FAT(focal adhesion targeting)结构域位于FAK的C端,可通过多种途径调控FAK的非酶催化功能,对肿瘤细胞的粘附、存活、增殖、迁移发挥重要作用,已成为开发新型FAK抑制剂的前沿和热点。氯吡胺(chloropyramine,C4)是通过高通量筛选发现的首个靶向FAT域的FAK抑制剂,可抑制FAK-VEGFR-3的相互作用靶向FAT,进而抑制FAK的非酶催化功能。然而,C4及其现有衍生物的抗肿瘤活性仍有待进一步提高。本文基于优势片段的骨架跃迁原理,以C4为先导化合物,将其N-2位苄基取代基替换为含不同取代的天然肉桂酸片段,通过酰胺键进行偶联,设计、合成了19个C4衍生物9a-9s,旨在获得结构新颖、低毒高效且生物利用度更优的FAT域抑制剂,并考察其抗TNBC活性。生物活性研究结果表明:1.活性化合物9d对多种TNBC细胞的增殖抑制活性(IC=8.37-9.07μM)均明显优于C4。重要的是,9d对正常乳腺细胞MCF10A的毒性相对较低(IC=40.63μM),提示9d可在相对安全的剂量下有效抑制TNBC细胞增殖。2.化合物9d在体外能够剂量依赖性抑制高侵袭性TNBC细胞的侵袭和迁移。3.化合物9d有望通过插入FAT域在Y925附近的结合口袋,抑制关键位点Y925磷酸化,抑制FAK的功能。4.化合物9d可有效减少黏附斑(FAs)和应力纤维(SFs)的形成,并剂量依赖性诱导TNBC细胞凋亡。综上,以化合物9d为代表的C4衍生物为开发靶向FAT域的FAK抑制剂及其应用提供了新的思路,也为寻找与发现新型抗TNBC药物奠定了良好的基础。图18幅,表5个,参考文献52篇

关键词： 三阴性乳腺癌   适配体   雷公藤甲素   缩醛酯连接键   靶向治疗药物  

摘要： 三阴性乳腺癌(TNBC)是指雌激素受体、孕激素受体及人表皮生长因子受体均为阴性的乳腺癌亚型,占所有乳腺癌病理类型的15%-25%。由于TNBC具有特殊的生物学行为和临床病理特征,是侵袭性最强、预后最差的乳腺癌亚型,其常规治疗方法包括手术、放疗、化疗及免疫治疗,其中化疗仍是三阴性乳腺癌的标准治疗方式,目前尚无针对性的靶向治疗方法。研究表明,核仁素在多种肿瘤细胞中过表达,且广泛表达与TNBC细胞膜表面。核酸适配体AS1411是一种由26个碱基组成的高水溶性单链寡核苷酸,能够特异性与TNBC细胞表面过表达的核仁素以高亲和性结合。雷公藤甲素(TP)是一种广谱高效的抗癌药,具有多种抗癌机制,可诱导多种肿瘤细胞的凋亡,包括乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、胰腺癌等,抗肿瘤活性优于顺铂、阿霉素、紫杉醇等传统的抗癌药物。但由于其水溶性差和缺乏肿瘤靶向性,存在严重的毒副反应,其临床运用受到极大限制。由此,基于肿瘤的靶向治疗和药物的精准释放技术,本课题设计了合成一种p H高度敏感的核酸适配体AS1411-雷公藤甲素偶合物(AS-TP),用于靶向治疗三阴性乳腺癌。主要研究内容及结果如下:首先,采用丁二酸酐和烯丙醇为原料,设计合成了一种新型酸敏感性连接键,并将TP与核酸适配体AS1411通过该连接键进行偶联,合成了核酸适配体AS1411-雷公藤甲素偶合物。随后,采用HPLC测定AS-TP的血清稳定性、酸敏感性性及水溶性,结果证明AS-TP可在血清中保持稳定不分解,且易在弱酸微环境下断裂释放雷公藤甲素原药,进一步的水溶性测定证明与TP相比,AS1411偶联可显著提高TP的水溶性。随后,采用分子对接技术和生物分子相互作用分析仪测定了AS-TP与核仁素蛋白的亲和力,结果证明AS1411偶联可显著提高TP与核仁素蛋白的靶向性,细胞免疫荧光显示AS-TP与核仁素蛋白具有优异的共定位效果。进一步采用流式细胞术测定了核仁素表达量不同的细胞对羟基荧光素标记的AS-TP的摄取能力,细胞对FAM-AS-TP的摄入量与核仁素蛋白的表达量相关三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞高摄取FAM-AS-TP,AS1411可竞争性抑制MDA-MB-231对AS-TP的摄入及AS-TP有对MDA-MB-231的细胞毒性。采用MTT实验测定了AS-TP对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及对正常细胞的细胞毒性,结果证明AS1411偶联可显著增强TP的抗肿瘤作用并降低其对正常细胞的细胞毒性,流式细胞术分析显示AS-TP发挥与TP相似的抗肿瘤机制,其主要通过诱导MDA-MB-231细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡发挥抗TNBC作用。进一步研究表明,AS-TP主要通过降低MDA-MB-231细胞线粒体膜电位水平、促进细胞内活性氧生成及激活线粒体凋亡途径发挥抗TNBC作用。为了进一步验证AS-TP的体内分布及体内抗肿瘤作用,本论文构建了三阴性乳腺癌荷瘤小鼠模型。小动物活体成像实验表明,AS-TP可显著蓄积于TNBC肿瘤组织并主要通过肝、肾组织代谢。体内疗效实验发现,AS-TP可发挥高效的体内抗TNBC作用,其可显著损伤肿瘤组织、诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤组织增殖。体内生物安全性表明,在有效治疗剂量条件下,AS-TP并未对小鼠正常组织结构造成病理损伤,同时血生化数据表明AS-TP并未引起小鼠肝、肾指标变化,这表明AS-TP具有较好的体内生物安全性。