关键词： 新冠疫情   儿童患者   肺炎支原体   流行病学  

摘要： 目的：分析新冠疫情前后益阳地区儿童肺炎支原体（mycoplasmapneumoniae，MP）感染的流行病学特点，为后疫情时代儿童MP感染的防治提供循证医学依据，从而提高本地区儿童MP感染的诊治水平。　　方法：选取益阳市中心医院2018年1月～2021年12月发生急性呼吸道感染并行MP-IgM抗体检测的7607例住院患儿为研究对象，对不同性别、年龄、年度、季节MP感染的情况进行分析，以及新冠疫情前后变化作对比（疫情前：2018年1月～2019年12月、疫情后：2020年1月～2021年12月）。　　结果：7607例急性呼吸道感染患儿中，男性患儿MP总阳性率26.93%（1232/4574），女性患儿MP总阳性率36.00%（1092/3033），差异具有统计学意义(P＜0.001)，且疫情前后均为女性患儿阳性率更高（P均＜0.001）。不同年龄组间MP总阳性率分别为：婴儿组13.80%（262/1899）、幼儿组30.36%（776/2556）、学龄前组37.45%（779/2080）、学龄组47.29%（507/1072），学龄组总阳性率最高，婴儿组最低，差异具有统计学意义（P＜0.001），疫情前后MP感染的年龄组间排序仍未发生改变。2018年～2021年患儿MP总阳性率30．55%（2324/7607），其中不同年度的MP阳性率分别为：2018年36.62%（833/2275）、2019年33.36%（719/2155）、2020年20.53%（324/1578）、2021年28.02%（448/1599），差异具有统计学意义（P＜0.001），且疫情前儿童MP感染率（35.03%）明显高于疫情后（24.30%）。MP一年四季均可致病，不同季节的总感染率分别为：春季22.88%（394/1722）、夏季40.10%（792/1975）、秋季31.08%（594/1911）、冬季27.21%（544/1999），其中以夏季最高发，秋季次之，春季最低，差异具有统计学意义（P＜0.001），2020年夏秋冬三季MP感染率接近，但仍以夏季最高（22.68%）。　　结论：1）2018年～2021年益阳地区MP感染以女性患儿更具易感性，且学龄期儿童好发，一年四季均可致病，以夏季最高发、秋季次之;2）新冠疫情后，本地区儿童MP感染率明显下降，且好发季节发生改变，2020年夏秋冬三季MP感染率相近，春季最低，而2021年再次以夏季最高发、秋季次之。

关键词： 蛇咬伤   蛇毒   流行病学   临床特征   预后  

摘要： 目的收集2012年-2021年广州地区及周边地区的毒蛇咬伤病例,探讨其流行病学特点及其临床特征,为本地蛇伤临床救治提供更直观可靠的数据,也为临床诊疗提供更客观详实的参数。方法回顾性分析2012年1月-2021年12月广州医科大学附属第一医院广东省蛇伤救治中心收治的蛇咬伤患者。对蛇伤患者人口学信息(如性别、年龄),致伤蛇的种类、咬伤月份及时段、抗蛇毒使用情况、严重程度、治疗转归等,以及特殊人群(儿童、孕妇、老人)蛇伤临床特征及救治特点等临床和流行病学特点进行整理归纳分析。结果2012年-2021年广州医科大学附属第一医院广东省毒蛇伤救治中心共收治蛇伤患者2406例,其中住院蛇伤患者609例。广州及周边地区有多种致伤蛇,其中竹叶青蛇致伤648例(占总数的52.38%),其次为眼镜蛇致伤316例(占总数25.55%)。咬伤以男性咬伤为主(64.90%),女性占35.08%,男女比例为1.85。受伤年龄为11个月-94岁(中位数年龄49岁),主要受伤年龄段集中在41-50岁及51-60岁年龄组。咬伤部位主要集中在四肢(97.53%),以下肢为主(51.25%)。一年四季均有蛇伤事件发生,5-10月份多见,其中9月为蛇咬伤最高峰月份。全天24小时致伤病例统计发现0点-24点都有蛇伤发生,高峰段主要集中在14-16点(19.40%)及20-22点(15.34%)。受伤职业只要以农民为主,农林种植(38.55%)及野外行走(26.03%)时容易被蛇咬伤。蛇伤后24小时内就诊人数达86.36%,超一半(56.10%)以上患者能在4小时内到医院。使用卡方检验分析不同就诊时间与蛇伤严重程度两组间的差异,的p值为0.000,两组数据间差异具有统计学意义,不同就诊时间与蛇伤严重程度呈正比。就严重程度而言,轻中重度均有发生,轻型占多数(64.01%),中型占7.97%,重型、危重型占28.01%。最常见的局部症状为伤口及伤周,其中以肿胀953例(87.11%)、疼痛873例(79.80%)常见,部分患者出现坏死/溃疡95例(8.68%)、瘀斑76例(6.95%)、麻木60例(5.48%)、出血54例(4.36%)等。全身各系统以血液系统异常,凝血功能障碍为主,约占49.26%,神经系统受累的表现如头晕头痛括眼睑下垂、呼吸困难、神志改变,约占7.06%。本组患者中224例(9.31%)为轻症或干咬,未使用抗蛇毒血清治疗,而其他患者抗蛇毒血清的使用率48.75%。接受抗蛇毒血清治疗患者中,47.84%患者咬伤后4小时内使用了抗蛇毒血清治疗,咬伤12小时内接受抗蛇毒血清治疗患者占90.04%。对不同时间使用抗蛇毒血清治疗与蛇伤严重程度进行卡方分析的,p值为0.000,两组间差异具有统计学意义,说明越早使用抗蛇毒血清,咬伤严重程度越小。在蛇咬伤患者中,孕妇蛇咬伤12人,91.67%致伤蛇种为竹叶青蛇,以轻型中型为主,局部症状以肿胀9例(75.00%)、疼痛7例(58.33%)常见,12人中6人均出现凝血功能异常,未有出现流产、早产等严重后果。儿童咬伤患者共153例,以轻型(52.23%)、重型(46.15%)为主,局部症状中,73.85%疼痛肿胀,全身症状以血液系统(56.92%)为主,1例出现多器官障碍。60岁以上老年人占16.38%(394例),伤后严重程度以重型为主(53.91%),局部症状其中以肿胀100例(78.13%)、疼痛50例(39.06%)为主,全身症状以血液系统异常见72例(56.25%),4例患者出现多器官衰竭,死亡1人。住院天数为1-78天,总平均住院时间为6.96天(中位数3天,众数1天),平均住院费用15300元。其中仅内科保守治疗患者平均住院天数5.26天,平均费用13400元,需进行手术治疗的患者平均住院天数29.60天,这部分患者抗蛇毒方面已完成,主要是伤口溃烂或切开后修复,平均住院费用40004元。经斯皮尔曼相关性(spearman)相关性分析,不同就诊时间与住院费用呈正相关。结论本研究表明,(1)本组主要致伤蛇种为竹叶青蛇和眼镜蛇,男性和农林种植为主,受伤年龄主要发生在41-60岁。(2)5-10月为蛇伤高发季节,以9月为最,每月下旬蛇伤事件偏多,咬伤时间段集中在每日14-16点、20-22点。(3)本地咬伤以轻症为主,症状无显著特异性,但儿童、老年人易发展为重症。(4)抗蛇毒血清使用率偏低,延迟使用与严重程度正相关。(5)外科干预或伤口切开延长住院时间,增加费用。

关键词： 犬、猫   皮肤癣菌病   调查   鉴定   药敏试验  

摘要： 皮肤癣菌病由多种皮肤癣菌感染引起,是犬猫常见的传染性皮肤病,随着近几年宠物行业的快速发展,饲养犬猫数量逐年增加,作为人畜共患病,有必要掌握犬猫皮肤癣菌病的发病特点及病原菌的流行情况。本试验通过调查南昌市经开区犬猫皮肤癣菌病的流行情况,比较不同方法鉴定皮肤癣菌的准确性,同时进行体外药敏试验,了解分离菌种对药物的敏感性,为临床诊断犬猫皮肤癣菌病及治疗提供依据。本试验收集2021年10月-2022年10月来自南昌市经开区宠物医院和猫繁育舍皮肤癣菌病材料,对犬猫皮肤癣菌病的发病率、季节、年龄、品种、性别、发病部位进行统计分析。统计结果显示,犬皮肤癣菌病的发病率为4%,猫皮肤癣菌病的发病率为12.5%;犬猫皮肤癣菌病在一岁以内高发,且秋冬季节的发病率明显高于春夏;犬猫皮肤癣菌病与发病部位有关,其中猫主要在头、耳两个部位易感染,犬好发于头部及肘部。先通过显微镜镜检、分离培养进行形态学鉴定,再通过PCR检测及ITS区、D1-D2区基因分别构建种系发生树,确定菌种。共有60例犬猫皮肤癣菌,其中犬小孢子菌57例、*** 2例、趾间毛癣菌1例。比较PCR法与形态学鉴定菌种,发现两种方法鉴定结果相一致;通过ITS靶位与D1-D2靶位构建进化树,对于须癣毛癣菌复合体和石膏样奈尼兹皮菌复合体,ITS靶位比D1-D2靶位构建种系发生树效能更优。选择特比萘芬、伊曲康唑、酮康唑三种抗真菌药物,采用NCCLS推荐的微量液基稀释法对不同来源分离的菌株进行体外药敏试验,结果显示:对三种皮肤癣菌敏感性最好的药物为特比萘芬,来源于猫繁育舍的犬小孢子菌比宠物门诊分离的犬小孢子菌对药物的敏感性更低,其次犬源分离的趾间毛癣菌和***对伊曲康唑的MIC高于猫源分离的犬小孢子菌。

关键词： 军事飞行员   椎间盘退行性疾病   颈椎病   腰椎间盘突出症   流行病学   危险因素   预测模型  

摘要： 【目的】(1)调查分析军事飞行员椎间盘退行性疾病(degenerative disc disease,DDD)流行病学特征;(2)研究飞行员DDD危险因素和症状严重程度相关因素;(3)建立并验证飞行员DDD疾病预测模型。【方法】(1)通过调查问卷收集飞行员基本信息、飞行相关特征、疾病相关特征以及个人习惯等资料。结合影像学资料,计算DDD、颈椎病(cervical spondylosis,CS)、腰椎间盘突出症(lumbar disc herniation,LDH)、退行性腰椎滑脱症、退行性椎管狭窄症以及颈腰痛患病率。计算颈腰痛频率、颈腰疼痛视觉模拟评分量表(visual analogue scale,VAS)评分、颈椎功能障碍指数(neck disability index,NDI)评分和Oswestry功能障碍指数(Oswestry disability index,ODI)评分评价症状严重程度。分析不同机种患病特征。比较飞行员和地勤人员患病率和严重程度差异,并计算暴露因素的相对危险度(relative risk,RR)值。计数资料差异分析采用卡方(χ)检验或Fisher精确检验,计量资料差异分析采用t检验或Mann-Whitney U检验。(2)危险因素的分析:单因素χ检验分析比较飞行员不同特征下DDD、CS以及LDH患病率差异,然后进行多因素二元Logistic回归分析。VAS、NDI和ODI的相关因素的分析:分别使用皮尔逊线性相关(连续变量)或斯皮尔曼秩相关(等级变量)计算相关系数r。然后使用多元线性回归分析筛选有统计学显著性的变量,计算调整后R。(3)根据之前的单因素分析结果,将χ检验P<0.2的变量列为待筛选变量。采用赤池信息量准则(akaike information criterion,AIC)逐步筛选模型,对所有的变量组合比较拟合优度,选取AIC分值最小的组合作为最佳模型。最后绘制列线图对模型进行可视化,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线、校准曲线,以及决策曲线(decision curve,DC)评价和验证模型。【结果】(1)总体患病率统计:共调查军事飞行员283人。DDD患病率43.8%(124/283),CS患病率25.4%(72/283),LDH患病率29.3%(83/283)。腰椎滑脱症患病率2.1%(6/283),腰椎管狭窄症患病率1.4%(4/283)。颈痛患病率64.7%(183/283);腰痛患病率74.2%(210/283)。(2)按机种分析,歼击机飞行员DDD患病率为54.9%(50/91),CS患病率33.0%(30/91),均显著高于轰运直及其他机种飞行员(P=0.007、P=0.008);各机种LDH、颈痛和腰痛患病率无显著差异;各机种间颈腰痛频率无显著性差异。(3)飞行员DDD、CS和颈痛患病率显著高于地勤人员(P<0.05),LDH(P=0.554)和腰痛患病率无显著性差异(P=0.245);飞行员(飞行暴露)和地勤人员(非暴露)之间患病的RR值以及95%可信区间(confidence interval,CI)为:DDD RR=2.188(1.294-3.699)、CS RR=3.143(1.404-7.036)、LDH RR=1.308(0.670-2.553)、颈痛RR=1.386(1.052-1.828)、腰痛RR=1.143(0.935-1.397);飞行员(46.1%)偶尔腰痛频率的构成比显著高于地勤人员(22.1%);飞行员颈痛VAS(Z=2.628,P=0.009)和NDI(Z=8.072,P<0.001)显著高于地勤人员。(4)年龄>40岁(OR=2.022,P=0.041)、超重(OR=2.666,P=0.008)、肥胖(OR=5.330,P=0.065)、高性能飞机(OR=2.706,P=0.009)、焦虑情绪(OR=2.895,P=0.002)、吸烟(OR=1.951,P=0.045)是飞行员DDD的独立危险因素;年龄>40岁(OR=2.569,P=0.010)、高性能飞机(OR=2.466,P=0.017)、焦虑情绪(OR=2.261,P=0.027)是飞行员CS的独立危险因素;飞行时间>2000小时(OR=2.747,P=0.012)、焦虑情绪(OR=2.174,P=0.029)、吸烟(OR=2.075,P=0.035)是飞行员LDH的独立危险因素。(5)颈痛VAS多元线性回归结果:压力频率(B=0.778,P<0.001)、失眠程度(B=0.300,P=0.045)、头盔质量(B=0.275,P=0.014)、平均飞行载荷(B=0.193,P=0.034)被纳入最终线性回归模型(F=1

关键词： 重症监护病房   多重耐药革兰氏阴性菌感染   流行病学   替加环素   群体药代动力学  

摘要： 目的：　　目前，由多重耐药革兰氏阴性菌（MDR-GNB）引起的医疗保健相关感染在世界范围内的报道越来越多，导致较高的发病率和死亡率，尤其是在重症监护病房（ICU）,其抗生素耐药性限制了治疗选择，并可能对临床结果产生不利影响。因此早期阶段确定MDR-GNB感染的危险因素并开始有效的抗菌治疗对于控制MDR-GNB引起的感染是十分必要的。此外，我们国家的ICU患者受到经济状况和传统意识的影响，会出现因临床结果不佳或康复前景黯淡而选择出院的现象,但这些患者极有可能在短期内死亡，因此我们选择纳入这一患者亚组来评估MDR-GNB对死亡率结局的影响。替加环素作为首个被批准的甘氨酰四环素类抗生素，其体外抗菌活性较强，临床上常用于治疗多重耐药菌引起的重症感染。说明书推荐的剂量方案是初始剂量为100mg,随后每12小时静脉输注50mg。然而重症感染患者病理生理变化较大，药物在患者体内的药动学参数发生改变，个体之间的血药浓度差异较大，导致替加环素的标准剂量无法达到期望的治疗效果，因此优化替加环素剂量方案，指导临床合理使用抗菌药物至关重要。因此，本研究通过分析重症患者多重耐药革兰氏阴性菌感染的临床特征，旨在明确该类患者感染以及预后的高危因素，同时采用二维液相色谱方法测定重症感染患者血清中替加环素浓度，结合患者的病理生理数据，通过Phoenix NLME软件构建替加环素群体药代动力学模型，研究患者特征与个体PK参数之间的关系，并利用合成的模型优化给药方案。　　一、中国北方某教学医院ICU的多重耐药革兰阴性菌感染：患病率、危险因素和预测死亡率　　方法：　　1.研究对象和数据收集：回顾性分析2018年1月至2020年12月入住ICU时长≥48小时的所有GNB感染成年患者（年龄≥18岁）的电子病历。收集了有关人口统计学、临床和微生物学信息的数据。　　2.统计学分析：所有统计分析均使用IBM SPSS 25.0软件进行。通过Mann-Whitney U检验或独立样本t检验分析连续变量，数据表示为均值±标准差或中位数（第25-75个百分位数）。使用卡方检验或Fisher精确检验分析分类变量，数据以百分比形式列出。单变量分析中p＜0.05的所有变量均采用逐步选择法纳入多元logistic回归分析中。采用Kaplan-Meier检验进行生存分析。　　结果：　　1.患者特征：共纳入173例GNB感染的成年患者，包括MDR-GNB感染患者（n=111,64.2％）和非MDR-GNB感染患者（n=62,35.8％）。所有病例均为医院获得性感染，两组中男性患者居多，年龄分别为60.66±15.745岁和61.69±19.758岁。最常见的基础疾病分别为高血压（35.1％）和心脑血管疾病（25.8％）,留置导尿管是两组最常见的侵入性手术。两组在APACHE Ⅱ评分方面存在显著差异（20.58±9.603 vs 17.69±7.997;p=0.046）。　　2.获得MDR-GNB感染的独立危险因素：多变量分析显示，获得MDR-GNB感染的独立危险因素包括分离GNB病原体前较长的ICU住院时间、接受气管插管和持续肾脏替代疗法（CRRT）治疗、既往暴露于β-内酰胺酶抑制剂和碳青霉烯类药物。　　3.两组临床结局和生存率的比较：与非MDR-GNB组相比，MDR-GNB组的预测死亡率显著更高（47.7％ vs 27.4％;p=0.009）,在其他方面无统计学意义。Kaplan-Meier分析显示，MDR-GNB感染患者的预测死亡率显著更高（P＜0.05）。　　***病原体的分布：最常见的感染部位是呼吸道（n=211,66.6％）。研究期间从不同临床标本中共分离出317株GNB分离株。其中，214例（67.5％）为葡萄糖非发酵菌（GNF）,103例（32.5％）为肠杆菌科细菌。157株MDR-GNB分离株中，鲍曼不动杆菌（68.2％）是主要成员。GNF分离株占MDR-GNB分离株的80.3％。　　5.与预测死亡率相关的危险因素：21例MDR-GNB感染患者的住院死亡率为18.9％,32名患者因病情危重、预后不良出院。53例MDR-GNB感染患者的预测死亡率为47.7％(53/111)。在多因素分析中，年龄≥65岁、意识障碍、既往类固醇暴露、脓毒性休克与预测死亡率独立相关。　　6.经验性和明确性抗菌治疗：共有27例(24.3％)患者在MDR-GNB感染发生后48小时内接受了适当的经验性治疗。存活组和非存活组之间不适当的经验性抗菌治疗(P＞0.05)无显著差异。共有84例(75.7％)患者被纳入明确的抗菌治疗分析。共52例患者(61.9％)接受了替加环素的抗菌治疗。接受舒巴坦治疗的患者预测死亡率显著降低(43.1％ vs 22.6％;p=0.022)。　　二、重症感染患者中替加环素的群体药

关键词： 糖尿病   糖尿病前期   流行病学   危险因素   合肥市  

摘要： 目的分析合肥市某区成年常住居民糖尿病及糖尿病前期的患病状况及相关危险因素,为本地糖尿病的防治工作提供依据及指导。方法通过采用分层抽样方法,随机抽取合肥市某区城乡2774例年龄>18岁的常住居民,通过问卷调查了解研究对象的一般情况、文化程度及相关病史,通过体格检查收集研究对象的身高、体重及腰围等相关资料,并计算其体质指数(body mass index,BMI)。通过实验室检测的方式进行收集研究对象的血脂及血糖指标,血脂指标即甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C);血糖指标即空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、餐后 2h 血糖(2-hour postprandial blood glucose,2hPG)等相关数据。应用EpiData 3.02软件进行调查数据的录入。用SPSS 23.0进行统计分析,以(x±s)描述计量资料,符合正态分布的资料采用方差分析比较多组间数据;以[n(%)]描述计数资料,采用χ2检验比较组间数据。用Logistic回归分析该区成人患糖尿病或糖尿病前期的危险因素,P<0.05为差异具有统计学意义。结果1.本次调查研究共纳入2785例研究对象,根据排除标准,最终收集到2774例合格问卷。DM患者168例,患病率为6.1%。PDM患者277例,患病率为10.0%。DM患者城市居民占比7.0%;农村居民占比5.1%;PDM城市居民患者占比12.1%;农村居民占比7.7%,二者城市患病率均高于农村(χ2=32.901,P<0.05)。研究对象年龄19～95岁,平均(44.1±14.5)岁,可分为18～29岁、30～39岁、40～49岁、50～59岁、≥60岁五个年龄组,DM患者占比分别为0.5%、1.3%、5.2%、9.5%、16.9%;PDM 患者占比分别为 2.3%、6.8%、8.5%、13.2%、22.6%。随着年龄增加,二者患病率均随年龄的增加而升高,在60岁及以上人群中达到最高。(χ2=88.741,P<0.05)。2.单因素分析显示研究对象的年龄、居住地、文化程度高低、有无糖尿病家族史、是否存在高脂血症、是否患有高血压、BMI、腰围、HDL-C、LDL-C、TC、TG 均是 DM、DM 前期(IFG、IGT、IFG+IGT)的影响因素(P<0.05)。3.多因素Logistic回归分析显示年龄、城市、文化程度、TC、HDL-C、LDL-C、有糖尿病家族史、高血压及高脂血症为DM的危险因素(P<0.05);其中年龄、TC、LDL-C、城市、文化程度与DM呈正相关,HDL-C、无糖尿病家族史、无高血压、无高脂血症危险因素与DM成负相关,且HDL-C是DM保护因素,无相关基础疾病或家族史人群患DM风险明显减小。而年龄、城市、文化程度、TC、有糖尿病家族史也是PDM的危险因素(P<0.05)。其中年龄、TC、LDL-C、BMI、城市、文化程度因素与PDM呈正相关,无糖尿病家族史与PDM呈负相关,且无糖尿病家族史患PDM风险明显减少。结论不同年龄段及不同地区的人群,糖尿病及糖尿病前期患病率均有显著差异,老年人及城市居民是重点防治人群,对于可控性因素,应积极控制体重、血压、血脂,且有相关危险因素的人群应加强管理、尽早干预,以降低糖尿病、糖尿病前期的患病率。

关键词： 猪圆环病毒2型   分子流行病学   遗传进化   分离鉴定  

摘要： 猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)隶属于圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus),是迄今为止已知最小型的DNA病毒。PCV1、PCV2、PCV3和PCV4是目前发现的4个基因型,其中PCV2是猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要致病原且临床上广泛流行,因此,本研究围绕PCV2展开。为了解PCV2在我国的流行特点、遗传演化及其致病性,本研究通过qPCR检测方法对全国部分地区2021年12月至2022年11月1233份临床样品开展PCV2感染情况调查,分析其流行情况;并进行病毒的分离鉴定及仔猪感染试验比较研究分离毒株的致病性。主要研究内容和结果如下:1.2021年12月至2022年11月全国部分地区猪圆环病毒2型分子流行病学研究为了解全国部分地区猪圆环病毒的流行现状及基因特性,本研究收集了2021年12月至2022年11月全国部分地区猪场的1233份临床样品,采用qPCR方法进行PCV2的检测,共检测出458份阳性样品,总阳性率达37.15%(458/1233),表明PCV2在这些地区广泛流行。为了解PCV2各基因亚型在调查地区的混合感染情况,应用多重qPCR对458份阳性临床样品进行PCV2a、2b和2d不同亚型的检测。其中PCV2a、PCV2b、PCV2d三种亚型混合感染尤为严重。为更深入地了解PCV2的基因特性,对阳性样品PCV2 ORF2及全基因组扩增并测序,共获197条ORF2基因序列和34条全基因组序列。197条ORF2基因序列经系统发育分析,发现PCV2a亚型占17.26%(34/197),PCV2b亚型占12.69%(25/197),PCV2d亚型占70.05%(138/197),表明PCV2d为优势基因型;经核酸同源性分析,表明在PCV2 ORF2测序株之间同源性达88.0%-100%,与选取的国内外各基因亚型的PCV2参考毒株有85.6%-99.8%的同源性。Cap蛋白氨基酸序列突变分析,发现有29个氨基酸变异位点共存,其中大部分位于Cap蛋白的抗原表位。34条PCV2全基因组序列,经系统发育分析显示,1株属于PCV2a,7株属于PCV2b,26株属于PCV2d,表明在调查地区PCV2d是主要的流行毒株;经核苷酸同源性分析,表明PCV2测序株之间同源性达94.9%-100%,与选取的国内外各基因亚型的PCV2参考毒株同源性为89.5%-99.8%。2.病毒的分离鉴定和致病性研究为深入探究PCV2不同亚型毒株的致病性及其差异,对PCV2b和PCV2d病毒分离鉴定,并采用动物试验进行致病性比较研究。本研究分离到1株PCV2b命名为ZJ0263和1株PCV2d命名为SD0027,两毒株对猪均具有一定的致病性。感染后的仔猪表现为食欲不振、体毛杂乱,但两攻毒组间无显著差异(P>0.05)。此外,两攻毒组较对照组平均日增重均降低,SD0027(PCV2d)组降低显著(P<0.05),对猪只的生长率影响更明显。依据抗体水平分析,发现两分离株攻毒后宿主均能快速的发生免疫反应,而SD0027(PCV2d)组的免疫反应更早更快。经病毒载量测定,发现ZJ0263(PCV2b)攻毒后第7d出现病毒血症,随后病毒载量上升第14d达到峰值,之后呈下降趋势。SD0027(PCV2d)组攻毒后第3d出现病毒血症,之后病毒载量上升第21d达到峰值,其峰值比ZJ0263(PCV2b)组更高,随后下降。攻毒后28d剖杀,取心脏、肝、肺、脾、肾、淋巴结进行检测,发现肺、淋巴结病毒载量较高。经切片观察发现肺泡壁增厚及炎性细胞浸润,SD0027(PCV2d)组炎性细胞浸润更严重;而淋巴结两攻毒组均表现为轻微的单核巨噬细胞浸润,淋巴细胞减少。上述结果表明,本研究分离的PCV2b、PCV2d毒株均具有致病性。两攻毒组相比较而言,分离的SD0027(PCV2d)毒株攻毒后导致宿主的病毒血症出现得更早、引发的免疫反应更快,且肺脏病变更明显,致病性更高。

关键词： 禽呼肠孤病毒   病毒分离鉴定   致病力   基因型   交叉保护  

摘要： 禽呼肠孤病毒(Avian Reovirus,ARV)可引起禽类多种疾病。近年来,我国鸡群感染ARV有增加趋势,而且临床症状也表现多样,给我国养殖业造成巨大经济损失。一些免疫过ARV疫苗的鸡群也出现较高发病率,给ARV的防控增加了难度。为了解近年来我国ARV流行状况及流行毒株分子遗传进化、致病性和疫苗保护性等情况,本研究采集2019年1月-2022年9月华东地区的疑似ARV样本,对ARV的流行病学、基因组遗传进化、致病性及疫苗保护等方面进行研究。具体内容如下:1.2019年1月-2022年9月我国华东地区流行病学调查采集2019年1月-2022年9月我国山东、福建、江苏、浙江和安徽华东5省份256个鸡场疑似ARV的组织样本2076份以及71个鸡场的2631份血清样本进行检测。RT-PCR检测结果显示69个鸡场的277份样本ARV核酸阳性(阳性率为13.34%),感染日龄主要集中在2-6周龄(占比84.8%),易感品种主要为白羽肉鸡,其次是肉种鸡。血清样本的ELISA抗体检测结果显示,59个鸡场的2160份样品为ARV抗体阳性(阳性率为82.10%)。按照年度统计,2019年至2022年度,采集样本中ARV病原阳性率分别为5.4%、11.2%、20.1%和12.8%;抗体阳性率分别为84.73%、78.28%、87.5%和70.23%。277份ARV核酸阳性样本进一步利用LMH细胞进行病毒分离,共分离获得90株ARV病毒。结合σC基因遗传进化特征及ARV病毒血清学分型规律,将ARV经典的1、2、3、4、5、6总共6个分支(基因型)进一步细分为1.1、1.2、1.3、2.1、2.2、3、4.1、4.2、4.3、5和6共11个小分支(基因型)。根据新的划分标准,本研究分离的90株毒株分属于1.2、1.3、2.1、2.2、3、4.2、4.3和5共8个基因型,其中1.3、2.2、4.3和5分支毒株最多,为华东地区主要流行基因型。2.不同基因型ARV全基因组测序分析筛选华东主要流行的1.3、2.2、4.3和5分支代表毒株20191774、201910415、20206919和20209560进行全基因组测序。基因序列比对结果表明所测4株病毒的10个基因组片段均来自鸡源呼肠孤病毒,但与Gen Bank中ARV有一定差异,均发生了不同程度的片段重组或核苷酸位点突变,其中201910415毒株在L2基因发生基因片段内重组。*** Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法建立通过对Gen Bank中ARV序列信息以及本研究测得不同基因型ARV序列信息进行比对分析,在M3基因的保守区设计引物和探针,制备标准品,建立检测所有基因型ARV的Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明:该方法标准曲线线性关系良好,相关系数R达到0.999,扩增效率为108.196%;敏感性高,检测最低病毒模板浓度为1.0×10copies/μL,是普通RT-PCR的100倍;特异性强,与其他常见禽病不发生交叉反应;重复性好,组间组内重复变异系数小于1%;检测范围广,能检测S1133疫苗株和目前我国华东地区流行的所有基因型毒株。说明本研究建立的方法可广泛应用于我国各省份样品中ARV的定性和定量检测。4.动物感染模型的建立本研究测定20191774、201910415、20206919和20209560这4株流行代表株的ELD。选取ELD最低的20206919做为攻毒毒株,以脚垫接种、口服和口服同居三种方式对1日龄SPF鸡和5日龄白羽肉鸡进行攻毒试验,结果表明SPF鸡脚垫攻毒可以引起脚垫肿胀症状可作为攻毒模型,SPF鸡经口服和口服同居感染未发生明显临床症状,但是抗体转阳,肉鸡通过不同接种方式攻毒均出现典型的临床症状可作为致病性模型。5.不同基因型ARV对肉鸡致病性研究本研究对20191774、201910415、20206919和20209560进行肉鸡致病性研究。结果表明这4株毒株均能引起白羽肉鸡脚垫及关节肿胀等与临床相似症状,但并未发生死亡。4株ARV流行株可引起肉鸡病毒性关节炎、生长抑制等症状,其中20191774(1.3分支)毒株对体重的影响以及造成脚垫肌腱损伤最严重,排毒量和组织病毒载量也最高,表明其致病力最强,其次是201910415(2.2分支),而20209560(5分支)和20206919(4.3分支)致病力相对较轻。6.两种商品疫苗对不同基因型ARV的攻毒保护性研究为验证目前商品疫苗是否能保护当前流行ARV毒株的感染,本研究选取市场上常用的两种ARV疫苗对SPF鸡进行免疫,其中疫苗A为国产多价苗,疫苗B为进口疫苗。利用当前流行代表株20191774(1.3分支)、201910415(2.2分支)、20206919(4.3分支)和2020956

关键词： 代谢相关脂肪性肝病   临床特征   性别差异   流行病学   病理生理  

摘要： 背景：非酒精性脂肪肝（NAFLD），现更名为代谢相关脂肪性肝病（MAFLD），已经成为全球最常见的慢性肝病。随着对MAFLD研究的不断深入，越来越多的研究结果显示了MAFLD在流行病学、病理生理和临床特征等方面存在显著的性别差异。　　目的：本研究针对肥胖门诊患者的一般身体参数及临床指标进行分析，探索了我国MAFLD患者在临床特征上的性别差异。　　方法：本研究纳入了2018年1月至2022年12月于重庆医科大学附属第二医院内分泌肥胖门诊就诊的患者205例。收集患者人体测量学指标、实验室检查结果以及身体成分分析等数据进行横断面研究。根据患者性别分组，分析MAFLD患者在临床特征上的性别差异。　　结果：在对不同性别的MAFLD患者的人体测量学及临床指标进行比较后发现：男性的BMI、腰臀比、腰围身高比、收缩压、舒张压、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、尿酸（UA）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、空腹胰岛素水平、内脏脂肪面积及内脏/皮下脂肪面积都高于女性，而高密度脂蛋白（HDL）水平低于女性。且更多的男性MAFLD患者同时合并有高血压、血脂异常、高尿酸血症、糖尿病、内脏脂肪型肥胖及代谢综合征等代谢相关疾病。　　与女性MAFLD患者相比，男性MAFLD患者肝硬度、肝脂肪变程度及发展成晚期肝纤维化的风险更高。无论男性、女性MAFLD患者，受控衰减参数（CAP）与BMI、TG、ALT、AST、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、内脏脂肪水平存在正相关性;然而仅在女性中显示CAP与腰围身高比、TC、UA、皮下脂肪、全身脂肪百分比存在正相关性。无论男性、女性MAFLD患者，肝硬度测定值（LSM）与空腹血糖及HOMA-IR存在正相关性，然而仅在女性MAFLD患者中发现，LSM与多个临床指标，如BMI、腰围身高比、收缩压、TG、ALT、AST、OGIRT0min、内脏脂肪面积、皮下脂肪面积、全身脂肪百分比存在正相关性。　　结论：不同性别MAFLD患者在人体测量学指标、实验室指标、身体成分、肝脂肪变程度、肝纤维化风险以及合并代谢相关疾病方面均存在显著差异。男性MAFLD患者长期暴露于高代谢风险因素中，应该更早期进行筛查及干预。女性MAFLD患者的临床指标与CAP及LSM相关性更高，其原因仍需进一步探索。

关键词： 弯曲菌   fexA   流行病学   耐药性   IS1216  

摘要： 弯曲菌,尤其是空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,***)和结肠弯曲菌(Campylobacter coli,***),是全世界细菌性腹泻疾病最常见的原因之一。家禽等动物是弯曲菌的重要宿主,因此在食用动物中大量使用抗生素,将使得弯曲菌经常暴露在各种兽用抗生素中,并进化出多种抗生素耐药机制。2020年,研究首次在弯曲菌中报道了氟苯尼考耐药基因fexA,该基因常常与可移动遗传元件和多重耐药基因岛(multidrug resistance genomic islands,MDRGIs)相关联,造成fexA和其他临床重要抗生素耐药基因的共同转移,弯曲菌耐药性也愈发严重。然而,当前关于fexA阳性弯曲菌的流行及传播情况只有零星报道,缺少系统的调查和研究。由于本实验室早期已经进行大量的采样工作,积累了许多不同来源的空肠弯曲菌和结肠弯曲菌分离株,因此,本研究对实验室2008-2019年在华东地区分离的动物、人及环境来源的弯曲菌进行fexA基因的分子流行病学调查,并在此基础上进一步探究fexA基因的传播机制及其传播的可能来源。本研究在从山东、江苏、上海和安徽地区分离到的2721株弯曲菌中共检测到69株fexA阳性弯曲菌,包括13(0.85%,13/1527)株空肠弯曲菌和56(4.70%,56/1194)株结肠弯曲菌。其中,fexA阳性菌株最早是在2010年被检测到,且fexA阳性率在2019年呈现显著上升趋势,达17.24%。从菌株分离的不同地区来看,山东省分离的菌株中,fexA阳性率为12.56%,远高于其他三个地区(0-2.99%)。从菌株分离的不同宿主来看,鸡源弯曲菌的阳性率最高(3.82%,61/1595),其次是环境源(2.86%,3/105)、鹅源(0.98%,2/204)和鸭源(1.02%,2/197)弯曲菌,而在人源及猪源弯曲菌中并未检测到fexA阳性菌株。这些结果表明虽然fexA基因已经在动物及环境源弯曲菌中发生广泛传播,但目前还尚未有在人源弯曲菌中传播的现象。对这69株fexA阳性菌株进行耐药表型测定,发现这些菌株同时对氟苯尼考、环丙沙星、红霉素及四环素产生抗性,多重耐药现象十分严峻,且多重耐药主要集中在7耐(71.01%,49/69)。进一步分析fexA阳性弯曲菌携带耐药基因的情况,发现在这69株菌中共检测到17种耐药机制,包括15种获得性耐药机制和2种基因突变。其中,四环素耐药基因tet(L)和与环丙沙星抗性有关的gyrA T86I点突变在69株fexA阳性菌株中均有分布,这与菌株的耐药表型相一致。此外,我们也对fexA阳性菌株的遗传进化特征进行分析,结果显示这些菌株属于14种不同的ST型,其中,ST10086(12/22,54.55%)是fexA阳性空肠弯曲菌中最流行的 ST 型,ST860(23/61,37.70%)和 ST830(20/61,32.79%)是fexA阳性结肠弯曲菌中最主要的类型。同样地,SNP系统发育树分析也呈相似的分型结果,表明克隆传播是fexA在不同来源弯曲菌间传播的重要方式。进一步通过RAST基因注释分析fexA的基因环境,发现fexA基因能够与其他抗生素耐药基因一起共定位在不同的MDRGIs上,这些MDRGIs都是插入到弯曲菌基因组的同一位点tgh102基因上。此外,我们发现遗传结构IS1216-hp-fexA-hp-ΔISEfa11-IS1216在fexA基因传播的过程中十分稳定,推测IS1216可能与fexA在弯曲菌中的传播有关。为进一步验证IS1216介导fexA基因传播的功能,我们率先通过反向PCR发现IS1216可以通过重组形成携带fexA的环状中间体,随后通过构建重组自杀质粒和接合转移实验证实IS1216能够发挥转座功能介导fexA在大肠杆菌中的转移,自然转化实验也表明IS1216能和fexA一起在弯曲菌中发生转移。最后,为了探究弯曲菌中fexA基因的可能来源,本研究对nt数据库进行fexA及IS1216检索,最终检索到254个基因组携带fexA基因,其中肠球菌所占比例最大,有128(50.39%)个;同样地,在携带有IS1216的1817个细菌基因组中,有1362(73.71%)个为肠球菌基因组。进一步具体比较粪肠球菌和弯曲菌基因组中fexA和IS1216的阳性率,发现IS1216阳性率较高的粪肠球菌,其fexA基因的阳性率(2.50%,201/8040)也是显著高于空肠弯曲菌(0.02%,11/51877)和结肠弯曲菌(0.04%,10/22237),说明IS12169在细菌基因组上的整合可能有利于fexA基因的获得。由于数据库中的fexA基因与IS1216都主要分布在肠球菌基因组中,且IS1216的GC含量接近肠球菌基因组GC含量(～3