关键词:
鲍曼不动杆菌
流行病学调查
细菌分离鉴定
生物学特性
多位点序列分型
毒力基因
耐药基因
致病性
摘要:
鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)属于非发酵的革兰氏阴性菌,严格需氧,条件性致病菌。目前,鲍曼不动杆菌是医院内发生严重感染的主要病原菌之一,可以引起血液感染、伤口感染、尿路感染,诱发脑膜炎,呼吸相关性肺炎,皮肤和软组织感染、呼吸道感染等多种疾病。国内外研究显示,在动物中鲍曼不动杆菌可引起仔猪腹泻、山羊肺炎、牛子宫内膜炎、马支气管炎、雏鸡急性死亡,也可以感染鳜鱼、异育银鲫和斑点叉尾鮰且死亡率极高。此外,动物性食品,如鸡蛋、肉雏鸡中也分离到鲍曼不动杆菌。这表明探明鸡源鲍曼不动杆菌的致病性和流行病学以及生物学特性对于人和动物都具有重要意义。本研究首次对河南省鸡群进行鲍曼不动杆菌携带情况的流行病学调查;获得7株鲍曼不动杆菌分离株,其中3个ST型菌株源于人,4个鸡源新ST型菌株,为首次发现;全基因组分析显示7株鲍曼不动杆菌毒力基因复杂,从中共发现9种耐药基因;7个菌株均对小鼠有致病力,显示了人源、禽源菌株的跨宿主互传演化。1.河南省鸡源鲍曼不动杆菌携带情况的流行病学调查在河南地区随机抽样142个养鸡场,每个养鸡场随机采集22份鸡口咽拭子,共13个市3124份样品,利用细菌分离鉴定的方法,从中分离出7株鲍曼不动杆菌,分别是从开封和南阳各检出2株,新乡、信阳和郑州各检出1株。河南地区,鸡源鲍曼不动杆菌在群体(厂)水平的流行率为4.930%,在个体水平的流行率为0.224%。根据纸片扩散法测得的药敏试验结果显示,7株鲍曼不动杆菌对头孢类的头孢他啶、头孢哌酮和头孢曲松;β-内酰胺类的青霉素和阿莫西林;大环内酯类的红霉素和阿奇霉素;以及利福平和氟苯尼考均耐药,属于多重耐药性菌株。2.7株鲍曼不动杆菌的多位点序列分型扩增7株鲍曼不动杆菌的7个管家基因glt A、gyr B、gdh B、rec A、cpn60、gpi、rpo D,并对其测序,将测序结果传至Pub MLST数据库,对比7株鲍曼不动杆菌的ST(Sequence type)型。结果表明,本试验7株鲍曼不动杆菌分为7个ST型,其中3个ST型是数据库中已有的ST型,分别为HNXX32F的ST1320、HNNY86G的ST931、HNZZ130D的ST2525。HNXX32F的ST1320与从澳大利亚人血液中分离的MSHR_A192为同一个ST型;HNNY86G的ST931与从荷兰人尿中、印度环境中和美国人血中分离出的鲍曼不动杆菌为同一个ST型;HNZZ130D的ST2525与从中国人血中分离出的鲍曼不动杆菌为同一个ST型。其余4个型别为新发现的不同于人源菌株的鸡源ST型,暂时命名为STnew1-STnew4。基于管家基因的系统发育分析表明人源菌株和本试验分离的鸡源菌株已存在互相演化。3.7株鲍曼不动杆菌的耐药基因和毒力基因分析对7株鲍曼不动杆菌进行全基因测序分析,共发现9种耐药基因,包括D类β-内酰胺类耐药基因bla OXA-106、bla OXA-375、bla OXA-91、bla OXA-337、bla OXA-98、bla OXA-68;C类β-内酰胺酶类耐药基因bla ADC-25;四环素耐药基因tet(39)和氨基糖苷类耐药基因aph(3’)-Ⅵa。每株鲍曼不动杆菌均携带C类β-内酰胺酶类耐药基因bla 和不同的D类β-内酰胺酶类耐药基因。HNNY86G还携带tet(39)四环素类耐药基因,HNNY-FY还携带氨基糖苷类耐药基因aph(3’)-Ⅵa,与药敏试验表型结果稍有不同。7株鲍曼不动杆菌所含的毒力基因主要有外排泵毒力基因ade F、ade G和ade H;生物膜形成相关的毒力基因bfm R、bfm S、pga B、pga C、pga D;铁载体摄取系统相关的毒力基因bas A、bas B、bas C、bas D、ent E等;生物膜群体感应毒力基因aba R;磷脂酶毒力基因plc1、plc2和plc D;青霉素结合蛋白毒力基因pbp G等毒力基因。HNXX33P所含的毒力基因最少,理论上致病性要弱于其他组。本研究的7株鲍曼不动杆菌还含有其他菌属的毒力基因,所含有的各个毒力基因使得鲍曼不动杆菌具有了强大的侵袭力和定植的能力。4.7株鲍曼不动杆菌对小鼠的致病性试验为了研究7株鲍曼不动杆菌对小鼠的致病性,及其对各个组织器官的损伤情况,设置一定浓度梯度的菌液感染小鼠,观察其临床症状、剖检变化及组织病理学变化。结果显示,各组别都有不同数量小鼠的死亡,高剂量感染组的小鼠出现了精神抑郁,不活泼,被毛杂乱,反应迟钝,畏缩的临床症状。剖检观察发现,感染后死亡小鼠的肝脏肿大、出血,脾脏肿大暗红,肺部有出血,肠道出血,十二指肠肠壁变薄,肠内容物有棕黄色粘性物质等情况。组织病理学结果显示,感染后死亡小鼠的肝血窦肿胀,肺泡壁增厚,脾脏红髓区和白髓区有红细胞浸入,十二指