关键词： 精神障碍   患病率   影响因素   心理健康   新疆北疆地区  

摘要： 目的:调查新疆北疆地区各类精神障碍的患病现况,探究各类精神障碍患病的相关影响因素,了解新疆北疆地区居民的心理健康状况,以针对性预防控制疾病发生发展、合理化分配医疗资源。方法:采用多阶段分层整群抽样方法,于2021年11月～2022年7月在新疆北疆五个地区或城市(乌鲁木齐市、五家渠市、石河子市、伊犁哈萨克自治州、塔城地区)随机抽取15岁及以上人群4400人,最终获得有效样本量3853人。采用一般人口学调查表、自评量表(一般用健康问卷、心境障碍问卷、90项症状清单等)以及他评量表(汉密尔顿抑郁量表、贝克-拉范森躁狂量表、简易精神状态量表等)作为调查工具,以国际疾病分类第10版(ICD-10)中的精神与行为障碍分类为诊断标准,由两名具有五年及以上工作经验的精神科医师对受访者进行精神障碍的诊断,诊断不一致者由精神科主任或副主任医师进行二次诊断。使用χ2检验探究不同社会人口学因素下各类精神障碍的患病率差异,Logistic回归分析探讨各类精神障碍患病的独立影响因素,通过SCL-90量表评分整体评估北疆地区居民的心理健康状况,t检验比较不同人群SCL-90量表各维度间得分差异。结果:1.新疆北疆地区总精神障碍的时点患病率为9.71%(95%CI=8.77～10.64),年龄调整率为10.07%(95%CI=9.10～11.03)。2.总精神障碍患病率在不同社会人口学分布下:女性高于男性(11.50%>7.28%;χ2=19.111,P<0.001);离异人群高于其他婚姻状况人群(21.59%;χ2=15.098,P=0.005);文盲群体高于其他文化程度人群(36.49%;χ2=117.071,P<0.001);月均收入2000元以下群体高于其他收入段人群(11.08%;χ2=10.810,P=0.004)。***回归分析可知:女性(OR=1.912;95%CI=1.501～2.437)、离异(OR=2.272;95%CI=1.307～3.948)、文盲(OR=11.686;95%CI=6.624～20.619)及饮酒(OR=1.517;95%CI=1.182～1.948)人群患各类精神障碍的风险较高;女性(OR=1.977;95%CI=1.401～2.792)、25～34岁(OR=5.342;95%CI=1.414～20.188)、文盲(OR=6.173;95%CI=2.205～17.281)、月均收入2000元以下(OR=2.379;95%CI=1.085～5.216)、饮酒人群(OR=1.524;95%CI=1.079～2.153)患心境障碍的风险较高;女性(OR=1.824;95%CI=1.272～2.616)、年龄≥65岁(OR=3.868;95%CI=1.716～8.720)、饮酒人群(OR=1.547;95%CI=1.067～2.242)患焦虑障碍的风险较高;农村人群(OR=4.770;95%CI=1.626～13.993)患精神分裂症的风险较高,中专/高中学历人群患精神分裂症风险较低(OR=0.094;95%CI=0.016～0.549)。***-90量表中,除恐怖因子外,新疆北疆地区居民其余因子得分较全国常模好,其中男性得分优于女性得分。结论:1.新疆北疆地区精神障碍检出率为9.71%,年龄调整率为10.07%,其中心境障碍和焦虑障碍的患病率较高;2.影响各类精神障碍患病的因素有同有异,其中女性、离异、低文化程度、低收入及饮酒人群等为精神障碍患病的高危人群。3.总体来看,新疆北疆地区居民的心理健康状况较全国常模好。

关键词： 丁型肝炎病毒   乙型肝炎病毒   流行病学   分子机制   筛查策略  

摘要： 实验背景和目的:丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus,HDV)是乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)的卫星病毒,理论上所有乙型肝炎患者都应该接受丁型肝炎筛查。但是由于乙型肝炎患者基数庞大,实际丁型肝炎筛查率较低,不同地区丁型肝炎流行率差距大等原因,目前还无法准确估算丁型肝炎的流行率。HDV入侵肝细胞后,产生的小丁型肝炎抗原(Small-hepatitis D antigen,S-HDAg)促进HDV的复制。复制进行一段时间后,HDV利用宿主酶进行RNA编辑,成为编辑型丁型肝炎病毒(edited-HDV)。后者产生的大丁型肝炎抗原(Large-hepatitis D antigen,L-HDAg)抑制HDV的复制,促进HDV的组装和释放。S-HDAg和L-HDAg均可以通过多种机制抑制辅助病毒HBV的复制。Edited-HDV也可以释放并重新入侵细胞,不过单独感染肝细胞后,无法进行病毒复制和建立丁型肝炎感染,产生的L-HDAg有防止HBV或原始型HDV感染细胞的潜力。本实验的目的是研究HDV在乙型肝炎患者中的流行率以及分子病毒学特点,寻找更加合理的筛查策略;以及研究edited-HDV对肝炎病毒的影响,探究其在病毒性肝炎治疗上的应用前景。实验方法:本实验在吉林省收集了 5594份乙型肝炎血清样本,对乙型肝炎表面抗原(Hepatitis B surface antigen,HBsAg),HBV DNA,抗-HDV和HDV RNA 进行检测,利用统计学知识进行数据分析。通过基因测序的方法分析丁型肝炎患者血清中edited-HDV在总HDV中的所占比例。利用体外实验和分子生物学手段,通过病毒全基因组质粒使细胞感染对应病毒,研究edited-HDV对其他肝炎病毒是否有抑制作用。实验结果:吉林省乙型肝炎患者中抗-HDV的阳性率约为3.6%(3.2-4.2%),HDVRNA的阳性率约为1.2%(0.9-1.5%)。男性和女性乙型肝炎患者的HDV RNA筛检阳性率相似(1.2%vs 1.1%,P>0.05)。51-80岁的乙型肝炎患者的HDV RNA筛检阳性率高于31-50岁的患者(2.1%vs 0.2%,P<0.05),87.7%的丁型肝炎患者年龄在51-70岁之间。HDV清除患者(抗-HDV为阳性,HDV RNA为阴性)的HBsAg 定量值小于丁型肝炎患者(65.83 IU/mL vs 892.90 IU/mL,P<0.05)。丁型肝炎患者的HBV DNA定量结果较单独乙型肝炎患者低(18.6 IU/mL vs 338 IU/mL,P<0.05),HBVDNA水平较低的乙型肝炎患者,HDV筛查结果为阳性的可能性较大,95.2%的丁型肝炎患者HBVDNA定量值小于2000 IU/mL。丁型肝炎患者的抗-HDV吸光度较HDV清除患者高(2.219 vs 1.397,P<0.05),抗-HDV水平较高的患者更有可能同时为HDVRNA阳性。在丁型肝炎患者中,HBsAg和抗-HDV之间存在较弱的相关性(r=0.256,P=0.043)。83.3%的丁型肝炎患者血清中的edited-HDV占总HDV的35%-43%。细胞实验中,edited-HDV的初始占比在50%以上时,HDV的复制较转染原始型HDV时少(P<0.05),HBV的复制与不转染HDV时无显著性差异(P>0.05)。HDV单独感染时,HDV RNA水平与edited-HDV的初始占比呈负相关(r=-0.857,P=0.029);HBV-HDV同时感染时,HDVRNA水平与edited-HDV的初始占比没有相关性(r=-0.790,P=0.061),HBV DNA水平与edited-HDV的初始占比也没有相关性(r=-0.547,P=0.262)。提前加入细胞的edited-HDV可以减少后续进入的HBV的复制(0.56 vs 1.00,P<0.05),不过对后续进入的原始型HDV没有影响(0.99 vs 1.00,P>0.05)。Edited-HDV进入原本就感染HBV的细胞中后,增加细胞中HBV的复制(1.46 vs 1.00,P<0.05)。实验结论:吉林省乙型肝炎患者中抗-HDV和HDV RNA的阳性率分别约为3.6%和1.2%。年龄50岁以上,HBVDNA定量小于2000 IU/mL的乙肝患者应作为丁型肝炎的重点筛查对象。抗-HDV水平较高的患者更有可能同时为HDVRNA阳性。大部分丁型肝炎患者血清中的edited-HDV占总HDV的35%-43%。在细胞实验中,当edited-HDV的初始占比在50%以上时,edited-HDV可以抑制同时进入细胞的原始型HDV的复制,但对同时进入细胞的HBV的复制没有抑制作用。细胞中的edited-HDV可

关键词： 艾美耳球虫   奶牛   单卵囊挑选   形态学鉴定   SSU rRNA   COI  

摘要： 奶牛球虫病是一种重要的奶牛寄生虫病,感染球虫的奶牛可能会出现腹泻、发热、厌食、脱水、电解质失衡、体重降低、便血等症状,严重时甚至会死亡。目前对于奶牛球虫的研究很多,但多数基于球虫形态学特征对奶牛球虫感染情况进行统计,这种方法对奶牛球虫进行鉴定具有局限性,导致结果的不准确。在形态学鉴定的基础上,准确地将不同种的球虫区分开来,然后借助分子生物学的方法,得到的每种球虫的序列,类似“身份码”一样。本研究将形态学鉴定与分子生物学鉴定两种方法结合,对中国部分地区奶牛球虫感染种类和感染情况进行调查,丰富了中国部分地区关于奶牛球虫感染情况的数据。本研究从2021年9月至2022年8月,从宁夏银川、河南新乡、河南荥阳、黑龙江大庆四地区的规模化奶牛养殖场采集900份新鲜奶牛粪便样品。显微镜观察结果表明肠道寄生虫总感染率为53.22%(479/900),其中大庆地区感染率最高72.83%(134/184),银川地区感染率最低33.95%(92/271)。共检测出阿米巴原虫37.22%(335/900)、球虫34.78%(313/900)、贾第虫3.00%(27/900)、圆线虫6.44%(58/900)、鞭虫3.11%(28/900)5种肠道寄生虫,其中四地区奶牛肠道寄生虫感染优势虫种均是阿米巴原虫和球虫。显微镜观察结果显示奶牛球虫总感染率为34.78%(313/900),其中荥阳地区感染率最高,为50.38%(66/131);银川地区感染率最低,为14.02%(38/271)。球虫混合感染现象较为普遍,混合感染率为85.30%(267/313),单种感染率为14.70%(46/313),四个地区的结果都表明2-5种混合感染的情况最为普遍,其中两种球虫混合感染率最高。共鉴定出13种球虫,分别为Eimeria alabamensis(12.46%,39/313)、***(28.43%,89/313)、***(42.81%,134/313)、***(5.75%,18/313)、***(27.80%,87/313)、***(30.67%,96/313)、***(37.06%,116/313)、***(0.30%,1/313)、***(28.12%,88/313)、***(50.48%,158/313)、***(25.56%,80/313)、***(3.83%,12/313)、***(1.28%,4/313),其中***首次在中国被报道。本次研究中大庆、荥阳、新乡三地奶牛感染球虫优势虫种均为***和***,银川地区为***和***。对基于SSU r RNA基因位点和COI基因位点得到的序列进行比对分析,结果表明这13种球虫的两个基因位点的序列同源性分别为93.00%～100.00%,83.30%-98.80%;基于以上两基因位点对得到的序列进行种系发育分析,结果显示13种球虫均与参考序列中感染牛的各种球虫的序列位于同一大分分枝上。本研究对中国部分地区奶牛肠道寄生虫感染情况进行统计分析,在形态学方法鉴定的基础上,基于SSU r RNA和COI基因位点对奶牛球虫进行更准确地鉴定。为中国部分地区奶牛肠道寄生虫感染情况提供数据参考,对奶牛球虫形态学特征进行整理与更新,并且提供了一种结合球虫形态学特征与分子生物学方法对奶牛球虫进行鉴定的思路,旨在更准确地对奶牛球虫进行鉴定,能够更好地对奶牛肠道寄生虫病,尤其是奶牛球虫病进行更好地防控。

关键词： 脑卒中   流行病学特征   危险因素   40岁及以上居民  

摘要： 目的通过调查,分析石家庄市40岁及以上居民脑卒中流行病学特征及其危险因素,为当地科学的、有效的开展脑卒中防治工作提供参考和依据,并为筛查出的高危人群的干预、随访和管理工作提供资料。方法本研究基于2020年度国家“脑卒中高危人群筛查和干预项目”,在石家庄市选取7个筛查点,对其中年龄大于等于40岁的常住居民作为研究对象进行调查,进行一般人口学特征和脑卒中常见危险因素现况调查,包括问卷调查、体格检查和实验室检查。将收集到的资料进行统计学分析,分析探究石家庄市40岁及以上居民脑卒中患病情况、危险分级、危险因素暴露情况并进行危险因素分析。结果1、本研究共纳入10677名研究对象,脑卒中患病率为3.03%,其中男性有180人患有脑卒中(4.38%);女性有144人患有脑卒中(2.19%),且男女患病率的差异具有统计学意义(P<0.001)。脑卒中在不同年龄段的患病率由高到低依次是:≥80岁、70～79岁、60～69岁、50～59岁和40～49岁,患病率分别为10.42%、6.58%、5.09%、1.69%和0.48%,且差异具有统计学意义(P<0.001)。城区居民脑卒中患病率为3.45%,乡镇居民脑卒中患病率为2.58%,且二者的差异具有统计学意义(P<0.05)。2、脑卒中低危人群4817人,占45.12%;中危人群3290人,占30.81%;高危人群2570人,占24.07%。将脑卒中危险分级按照不同性别进行分析,可得出:男性低危人群(39.57%)占比低于女性低危人群(48.59%),差异具有统计学意义(P<0.001);男性中危人群(30.00%)占比低于女性中危人群(31.33%),但差异不具有统计学意义(P>0.05);男性高危人群(30.43%)占比高于女性高危人群(20.08%),差异有统计学意义(P<0.001)。将脑卒中危险分级按照不同年龄组进行分析,可得出:低危人群中,40～49岁年龄组共1993人(63.13%),50～59岁年龄组共1514人(47.49%),60～69岁年龄组共869人(32.30%),70～79岁年龄组共378人(27.33%),≥80岁年龄组共63人(24.32%),五个年龄组在低危人群中的占比具有差异,且差异具有统计学意义(P<0.001);中危人群中,40～49岁年龄组共765人(24.23%),50～59岁年龄组共979人(30.71%),60～69岁年龄组共911人(33.87%),70～79岁年龄组共526人(38.03%),≥80岁年龄组共109人(42.09%),五个年龄组在中危人群中的占比具有差异,且差异具有统计学意义(P<0.001);高危人群中,40～49岁年龄组共399人(12.64%),50～59岁年龄组共695人(21.80%),60～69岁年龄组共910人(33.83%),70～79岁年龄组共479人(34.64%),≥80岁年龄组共87人(33.59%),五个年龄组在高危人群中的占比具有差异,且差异具有统计学意义(P<0.001)。将脑卒中危险分级按照居住地不同进行分析,可得出:低危人群中,城区居民共有2537人,占比为45.35%,乡镇居民共有2280人,占比为44.86%,城区居民占比大于乡镇居民,但是二者之间的差异不具有统计学意义(P>0.05);中危人群中,城区居民共1649人,占比为29.48%,乡镇居民共1641人,占比为32.28%,乡镇居民占比高于城区居民,且差异具有统计学意义(P<0.05);高危人群中,城区居民共1408人,占比为25.17%,乡镇居民共1162人,占比为22.86%,城区居民占比高于乡镇居民,且二者之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。3、石家庄市脑卒中危险因素暴露率从高到低依次为:血脂异常(40.52%)、高血压(39.79%)、糖尿病(24.80%)、缺乏运动(18.20%)、肥胖(17.13%)、脑卒中家族史(13.05%)、吸烟史(9.48%)、房颤或瓣膜性心脏病(0.93%)。按照性别分析,男性高血压、血脂异常、糖尿病及吸烟史的暴露率大于女性(P均<0.05),房颤或瓣膜性心脏病、肥胖、缺乏运动及脑卒中家族史的暴露率在性别之间无差异(P均>0.05);按照年龄分析,高血压和房颤或瓣膜性心脏病的暴露率随年龄增大而增长,其他危险因素的暴露率在各个年龄段之间的暴露率均具有差异(P均<0.05);按照居住地分析,城区居民高血压和肥胖的暴露率低于乡镇,血脂异常、糖尿病、房颤或瓣膜性心脏病、吸烟史、缺乏运动和脑卒中家族史的暴露率均高于乡镇居民,且差异均具有统计学意义(P均<0.05)。4、石家庄市脑卒中危险因素经单因素分析,年龄、性别、居住地、受教育程度、高血压、血脂异常、糖尿病、房颤或瓣膜性心脏病、吸烟史、肥胖、缺乏运

关键词： 儿童   中枢神经系统肿瘤   流行病学   多学科团队治疗   脑干肿瘤   DIPG   预后  

摘要： 第一部分431例儿童中枢神经系统肿瘤临床分析目的:中枢神经系统肿瘤是儿童最常见的实体瘤,但目前相关流行病学统计分析缺乏。本研究以2015年1月1日至2020年12月31日这6年间在我院诊断为中枢神经系统肿瘤并接受针对肿瘤相关治疗的18岁以下患者为研究对象,统计分析患者的发病情况、临床特点、治疗及预后等,并揭示当前存在的相关问题。方法:横断性回顾性分析431例18岁以下患者的人口统计学(发病年龄、性别比例)、肿瘤病理类型、肿瘤发生部位、治疗方案和生存预后。统计学数据应用描述性统计,包括中位数、均值、范围和95%置信区间,并使用SPSS 21.0软件基于Kaplan-Meier方法进行患者生存预后分析。结果:纳入研究的431名中枢神经系统肿瘤18岁以下患者,中位发病年龄为7岁,男女比例为1.71。中枢神经系统肿瘤的发生部位以幕上肿瘤为主(60.56%),幕下肿瘤占33.18%,脊髓肿瘤占6.26%。最常见的中枢神经系统肿瘤的病理组织类型为胶质瘤(26.70%),髓母细胞瘤(14.92%),血管瘤(8.90%),室管膜瘤(7.85%,),非生殖性细胞瘤(7.07%)和生殖细胞瘤(6.28%)。362例患儿接受手术治疗,20例单纯接受化疗或放疗,49例接受检查或保守治疗后放弃治疗。截至2021年3月29日,308病例存活,82病例出现死亡和41病例失访。结论:儿童中枢神经系统肿瘤的流行病学具有特殊性,常见病理类型与国外存在差异,对诊断和治疗具有一定的指导意义。但是目前中枢神经系统肿瘤患儿拒绝和放弃治疗的比例仍较高,生存预后比较差,因此,未来将需要更多的努力来攻克这一难题。第二部分儿童脑干肿瘤的临床分析目的:脑干肿瘤是儿童中枢神经系统肿瘤中具高威胁性的一种肿瘤,其中弥漫性胶质瘤是较常见的类型。以第一部分中诊断为脑干肿瘤的病例为研究对象进行统计分析,为儿童中枢神经系统肿瘤流行病学提供参考。方法:横断性回顾性24例脑干肿瘤患儿的临床表现、影像学结果、病理类型、治疗方案和生存预后。统计学数据应用描述性统计。结果:24例脑干肿瘤患儿包括了 14例非DIPG患者和10例DIPG患者,62.5%患者均有颅内高压表现,45.83%锥体束异常。13例接受手术治疗并行病理组织学诊断,其中低级别胶质瘤6例,高级别胶质瘤3例和血管瘤4例。截至2021年3月29日,非DIPG患者的总生存时间为47.10个月,而DIPG患者仅为4.31个月。结论:脑干肿瘤对儿童的生命健康构成的威胁性大,致命性高,目前无有效的治疗方案和患者的生存预后,因此,探索新的有效治疗策略对改善脑干肿瘤患者十分重要。

关键词： 手足口病   柯萨奇病毒A10   RT-PCR   VP1区   进化树  

摘要： 目的:近年来,由非肠道病毒A组71型(enterovirus A71,EV-A71)、非柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)的其他肠道病毒引起的手足口病(hand,foot,and mouth disease,HFMD)的发病人数显著增加,使手足口病的病原谱发生了很大的变化,特别是柯萨奇病毒A10型(coxsackievirus A10,CVA10)在中国大陆地区广泛流行。本研究通过分析山西省太原市2016年-2020年手足口病病原谱流行规律及CVA10的遗传变异特征,为太原市HFMD的疫苗研发和防控措施的制定提供依据。方法:太原市2016-2020年的HFMD流行病学数据来源于全民健康保障疾控信息系统。人口数据来源于太原市统计年鉴。太原市不同区县的10家医院采集发病后3天内临床诊断的HFMD病例咽拭子,每个月至少采集5份样本,再由各区县疾病预防控制中心(Center for Disease Control and Prevention,CDC)将样本送至太原市CDC微生物检验科。2016-2020年共收集到2701份临床诊断的HFMD咽拭子样本。分析发病时间、年龄、人群类别等病例资料,了解太原市HFMD的流行病学特征,采用卡方检验对数据进行统计分析。对收集到的样本提取病毒RNA,使用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)试剂盒进行肠道病毒型别鉴定,对鉴定为CVA10的样本采用逆转录PCR扩增VP1全长,经测序、序列拼接比对后利用MEGA 11.0.11和Bio Edit 7.2.5软件对获得的CVA10 VP1序列和从Gene Bank数据库上下载的各型别病毒代表株进行基因进化关系分析、同源性分析和氨基酸序列比对。结果:2016-2020年太原市共报告经临床诊断的HFMD病例22044例,年平均发病率为86.45/10万(范围20.68～148.49/10万),男性的年平均发病率高于女性,差异有统计学意义。发病人群主要为散居儿童(49.33%)、托幼儿童(41.74%)和学校学生(8.27%),共占发病总数的99.35%。所有病例中,1-5岁儿童占81.65%。HFMD全年均可发病,除2020年受到COVID-19大流行的影响,HFMD发病在6-8月和10-11月期间分别出现了两个高峰。2016-2020年共收集到2701份临床诊断的HFMD咽拭子样本,检测到1439份为EV阳性,总阳性率53.28%(1439/2701),其中EV-A71占15.22%(219/1439),CVA16占28.77%(414/1439),其他肠道病毒占56.01%(806/1439)。在其他肠道病毒阳性样本中共检测到31个CVA10阳性样本。CVA10可以分为A-G 7个基因型,C基因型分C1和C2亚型。太原市CVA10株均属于C基因型,其中C1亚型仅1株,其他30株属C2亚型,C2亚型又进一步分为C2a、C2b、C2c三个进化分支。2016年的全部13株与C2国内代表株同处于C2a进化分支,C2b进化分支包含2018年1株与2019年的2株,其余14株处于C2c进化分支。CVA10太原株间的VP1区基因核苷酸和氨基酸同源性分别为92.6%～100%、96.9%～100%,与A型原型株Kowalik的同源性最低,核苷酸和氨基酸同源性分别为75.9%～77.0%、91.2%～93.6%,与C型代表株的同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为91.7%～100%、76.2%～100%。与原型株相比,CVA10太原株VP1区氨基酸序列存在多个位点的特异性突变。对各基因型的氨基酸序列分析显示,CVA10 VP1氨基酸序列的162-176区域具有高度保守的特性。结论:太原市2016-2020年HFMD男性的发病人数均高于同年女性的发病人数,男女发病率差异有统计学意义。发病人群主要为散居儿童、托幼儿童和学校学生。1-5岁儿童占总病例数的81.65%。HFMD全年均可发病,2016-2019年的6-8月和10-11月期间分别出现了两个高峰。太原市CVA10株与C型流行株核苷酸和氨基酸同源性最高,属于CVA10C基因型,仅1株为C1亚型,其他30株属C2亚型,进一步分为C2a、C2b、C2c三个不同的进化分支。本研究发现太原市CVA10 VP1区存在多个氨基酸位点的变异,162-176位氨基酸高度保守,这些可能是后续研究所关注的重点,需要加强HFMD病原谱的持续监测。

关键词： 猪圆环病毒病   PCR   流行病学调查   遗传进化分析  

摘要： PCV2可造成免疫系统抑制引起猪的多种疾病综合征,是威胁我国生猪健康养殖的重要病原之一。PCV3和PCV4目前尚无有效的商品化疫苗。我国近年来各省均有3个病毒感染的报道。本研究拟建立PCV2、PCV3和PCV4的三重PCR方法,对云南省开展PCVs流行病学调查,明确猪圆环病毒的流行分布规律;对阳性样品的进行遗传进化分析,了解核苷酸和氨基酸序列的同源性和变异情况,对揭示我省猪圆环病毒流行及其病原生态学具有重要意义。***2、PCV3和PCV4三重PCR方法的建立本研究分别在NCBI Gene Bank数据库查找PCV2、PCV3和PCV4的基因序列,分别设计3对引物用于扩增PCV2、PCV3和PCV4的保守区域。构建重组质粒作为本方法的阳性质粒标准品,调整反应体系和条件,进行灵敏性、特异性试验。结果显示,三重PCR的灵敏性和特异性良好。2.云南省PCV2、PCV3、PCV4流行病学调查收集云南省2018-2022年16个地州市的养殖场、屠宰场、散养户、市场的3406份(脾脏、肺脏、淋巴结)样品进行三重PCR检测,对PCVs在不同年份、季节、地区和场点分布流行情况进行分析。在2018-2022年间,PCVs的总阳性检出率分别为62.24%。季节分布,PCV2和PCV3单独感染在秋季最高,阳性检出率为41.2%,26.64%;冬季最低,分别为35.17%,20.59%;二者混合感染在夏季最高,为27.65%,冬季最低,为24.57%。空间分布,在各地州市均存在PCV2和PCV3单独感染和混合感染情况,PCV2和PCV3阳性检出率最高的地区均为德宏(49.15%,31.19%),最低的地区分别为昆明(28.66%),昭通(17.68%);混合感染率最高的地区为曲靖(38.33%),最低的地区为临沧(15.04%)。场点分布,PCV2和PCV3在散养户阳性率最高,分别为87.23%、69.33%;在规模场和市场最低,分别为66.67%、23.95%。PCV2和PCV3混合感染在散养户最高(30.92%),规模场最低(8%)。3.云南省PCV2和PCV3测序和遗传进化分析选取14株PCV2阳性样品进行全基因组,Cap基因和25株PCV3阳性样品的Cap基因测序分析,多序列比对分析核苷酸与氨基酸序列同源性、变异位点,构建遗传进化树。14株PCV2测序毒株全基因序列与参考序列之间的核苷酸同源性为93.6%～99.4%;Cap基因核苷酸变异位点分析显示在该区域存在碱基的插入和替换,无缺失现象;遗传进化分析有1株2a亚型、5株2b亚型、8株2d亚型。PCV3分型分析显示有4株3a亚型,5株3b亚型,16株3c亚型;Cap基因与参考毒株相比,核苷酸同源性为94%～99.5%,氨基酸突变位点分析显示,存在13处氨基酸位点发生替换,无插入和缺失。结论:建立的PCV2、PCV3、PCV4三重PCR检测方法检测效果稳定;在云南省PCVs的感染率较高,包括PCV2、PCV3的单独感染和混合感染;PCV2全基因核苷酸序列同源性较高,Cap基因核苷酸的变异程度较小,PCV2d为主要流行基因亚型。PCV3的Cap基因核苷酸同源性较高,测序毒株Cap蛋白氨基酸差异程度小,主要的流行毒株亚型为PCV3c。

关键词： 芽囊原虫   猪   牛   羊   流行病学   人兽共患   海南  

摘要： 目的:芽囊原虫是一种常见的机会致病人兽共患肠道原虫,主要通过粪-口途径传播。猪、牛和羊是芽囊原虫重要的宿主,粪便污染环境会导致人和其他动物芽囊原虫的感染,具有重要的公共卫生意义。海南是我国唯一的热带岛屿省份,目前尚无对海南猪、牛和羊芽囊原虫感染情况的系统性调查。本研究首次对海南猪、牛、羊的芽囊原虫进行了分子流行病学调查,旨在获得海南猪、牛和羊芽囊原虫的感染情况及亚型特征,评估其人兽共患风险及公共卫生意义。方法:在海南省海口、保亭、万宁等13个地区共采集1595份粪便样本,其中猪456份、牛302份、羊837份,记录采样地点及年龄信息。采用PCR方法扩增芽囊原虫核糖体小亚基(Small subunit ribosomal RNA,SSU r RNA)基因位点确定芽囊原虫的感染率,通过序列分析确定芽囊原虫亚型。利用卡方检验评估地区及年龄间的统计学差异,对鉴定到的亚型采用邻接法构建系统发育进化树。结果:(1)猪的芽囊原虫总感染率为30.3%(138/456)。不同地区猪的感染率统计学差异极显著(P<0.001),其中保亭的感染率最高(83.3%,50/60),琼海和琼中未检出芽囊原虫。0～2月龄的猪感染率(11.5%,7/61)显著低于2～5月龄(34.9%,90/258)和>5月龄(29.9%,41/137)的感染率(P<0.01)。猪体内共鉴定出1种亚型,为ST5(100%,138/138)。138株ST5分离株存在12种变异,25个多态性位点。(2)牛的芽囊原虫总感染率为13.2%(40/302)。不同地区牛的感染率存在统计学差异(P<0.05),其中万宁的感染率最高(25.8%,8/31),澄迈的感染率最低(4.9%,4/82)。>24月龄的牛感染率(22.7%,15/66)显著高于0～12月龄(0%,0/18)和12～24月龄(11.5%,25/218)(P<0.01)。牛体内共鉴定出6种亚型,包括ST21(45.0%,18/40)、ST26(25.0%,10/40)、ST10(17.5%,7/40)、ST23(5.0%,2/40)、ST25(5.0%,2/40)和ST5(2.5%,1/40),ST21为感染牛的主要亚型。(3)羊的芽囊原虫总感染率为9.0%(75/837)。不同地区羊的感染率统计学存在显著性差异(P<0.001),其中定安的感染率最高(19.2%,10/52),琼中、三亚和五指山未检出芽囊原虫。>12月龄的羊感染率(8.8%,34/385)低于0～12月龄(9.1%,41/452),但无统计学差异(P>0.05)。羊体内共鉴定出10种亚型:ST10(38.7%,29/75)、ST4(26.7%,20/75)、ST5(9.3%,7/75)、ST24(8.0%,6/75)、ST26(5.3%,4/75)、ST14(4.0%,3/75)、ST13(4.0%,3/75)、ST6(1.3%,1/75)、ST21(1.3%,1/75)和ST23(1.3%,1/75),ST10为主要亚型。结论:(1)本研究首次采用分子生物学方法对海南猪、牛和羊芽囊原虫的感染情况进行了系统性调查,总感染率为15.9%(253/1595),猪的感染率(30.3%,138/456)高于牛(13.2%,40/302)和羊(9.0%,75/837),不同物种之间感染率差异显著(P<0.001)。猪和牛芽囊原虫的感染率在地区和年龄间存在统计学差异,羊的感染率在地区间存在统计学差异,而年龄间无统计学差异。(2)在海南猪、牛和羊体内共检测到11种亚型。羊体内共检出10种亚型,依次为:ST10、ST4、ST5、ST24、ST26、ST14、ST13、ST6、ST21和ST23,其中人兽共患亚型为ST4-ST6、ST10、ST14和ST23,占81.3%(61/75),ST10为主要亚型,ST23和ST24是我国山羊首次发现;牛体内共检出6种亚型,依次为:ST21、ST26、ST10、ST23、ST25和ST5,其中人兽共患亚型为ST5、ST10和ST23,占25.0%(10/40),ST21为主要亚型,与其他地区的亚型分布显著不同,可能与热带地区及地理隔离有关;猪体内仅检出一种亚型ST5,为人兽共患亚型ST5,存在25个多态性位点,提示海南芽囊原虫ST5具有较高的遗传多样性。因此,相对于牛和羊,猪具有更重要的公共卫生意义。(3)在海南猪、牛和羊体内共检测到6种人兽共患亚型:ST4、ST5、ST6、ST10、ST14和ST23,前期研究中海南地区人群也检测到ST4、ST5和ST6,表明海南地区可能存在芽囊原虫在人和动物之间相互传播的风险,提示在家畜的养殖过程中,需注意对动物粪便进行规范化处理,以防污染水源,进而造成人或其他动物感染。ST10、ST14、S

关键词： 狂犬病   分子流行病学   系统进化分析  

摘要： 菲律宾是狂犬病高发国家,感染犬是人感染狂犬病的主要传播来源,所以犬狂犬病防治是彻底控制和消灭人狂犬病的先决条件和唯一出路,而研究RABV的分子流行病学有助于制定狂犬病防控策略。菲律宾RABV分子流行病学的研究集中在2010年前后,近十年菲律宾狂犬病流行毒株的遗传多样性、优势进化群和毒株的遗传演化规律并不十分清楚。同时,菲律宾与周边国家RABV分子流行病学研究存在获得的数据分散、基因分型命名不统一,国家之间无法进行比较分析等问题,导致菲律宾与其周边国家狂犬病传播特征、遗传多样性和流行态势不清。本实验室作为世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,WOAH)参考实验室,与菲律宾农业部兽医局动物疫病与诊断参考实验室在重点研发计划政府间科技创新合作项目(2021YFE0901000)“菲律宾狂犬病分子流行病学及病毒遗传衍化研究”的资助下,通过在菲律宾开展大规模动物狂犬病监测,对流行毒株全基因组序列进行测定,分析狂犬毒株的遗传特征和变异规律,阐明了当前菲律宾国内狂犬病流行态势和传播特征。同时也对菲律宾及周边狂犬病流行国家进行了系统全面的分析,并采用统一的基因型命名的方式,详细阐明了菲律宾与周边国家狂犬病毒株的遗传多样性和传播特征,为菲律宾全面提升狂犬病防控能力提供理论支撑,对帮助菲律宾提升狂犬病的防控能力具有重要意义。本研究主要包括以下两部分内容:1.菲律宾RABV全基因组遗传衍化分析菲律宾收集的阳性样品如何安全的运输至我国是本研究面临的难题。本研究建立了通过FTA卡进行保存、运输、检测RABV样品的标准操作程序,该方法RABV检出率为99.7%(367/368),这为国际运输RABV样品提供了更为便捷、安全的途径。本研究对菲律宾通过FTA寄送的368份动物狂犬病样品背景信息进行统计,表明2018～2022年收集的样品来自16个大区58个省,动物种类包括犬、猫、牛和猪,明确了流浪犬及幼龄未免疫犬是当地狂犬病主要传播来源。通过对样品进行高通量测序和特异性PCR扩增获得了 353个流行毒株的全基因组序列。同源性分析表明,菲律宾所有RABV毒株的核苷酸同源性为94.8%～100%。各结构蛋白主要功能位点分析表明,G蛋白主要功能位点、毒力位点无变化,但其余结构蛋白都存在个别氨基酸位点发生变化。N基因系统进化分析表明,菲律宾所有RABV毒株均属于亚洲群的SEA4亚群,未发现其他国家毒株的传入,证明了菲律宾国内狂犬病的自我传播循环。研究进一步将菲律宾流行的SEA4亚群进一步细分为6个谱系,揭示了狂犬病在菲律宾流行的地理分布和传播特征。菲律宾主要分为三大岛屿,分别是吕宋岛、维萨亚斯岛和棉兰老岛,这三大岛屿分别流行SEA4-L、SEA4-V、SEA4-M,而这三个谱系也是菲律宾流行的主要谱系,尤其是SEA4-L流行最广。此外,3条相对独立的谱系SEA4-MZ、SEA4-GrSL和SEA4-GrMD流行区域较少,其中源自棉兰老岛Ⅸ大区的SEA4-MZ为本次研究首次发现的谱系。同源重组分析表明菲律宾RABV毒株无重组现象发生。选择压力分析表明菲律宾RABV系统发育的所有位点和分支都有很强的净化选择。系统地理学传播分析表明菲律宾RABV岛内传播是主要的传播途径,岛屿间传播偶尔在少数地区发生,如维萨亚斯岛有较少来自吕宋岛和棉兰老岛的RABV毒株传入。同时构建的流行病学数据库实现了菲律宾狂犬病流行趋势和流行特点可视化以及数据共享,对菲律宾狂犬病信息化、智能化管理具有重要的促进作用。2.东南亚和南亚RABV的分子流行病学研究为了系统而全面地阐明菲律宾及周边国家RABV毒株的传播特征、遗传多样性和流行态势,本研究通过在GenB ank数据库下载东南亚和南亚14个狂犬病流行国家所有的RABV序列,获得了 1963～2019年的2,917条序列,来自2,368条毒株。通过统计动物种类情况,明确了 76%的动物宿主是犬,其他还包括人、家畜和野生动物宿主。序列上传的时间表明自1995年起序列提交的数量和提交的国家数量开始迅速增加,并在2010年前后达到顶峰,但近十年序列上传的数量出现某些国家每年都上传序列和某些国家未上传序列的现象。通过系统进化分析结果表明东南亚只流行亚洲群,其中SEA3为优势流行亚群,南亚流行类北极群、印度次大陆群,AL1为优势流行亚群,这表明东南亚和南亚两大区域的RABV流行毒株的基因型有显著的区别。世界群虽然在这两大区域之间都有传播,但除印度外,目前其余国家未检测到流行。因斯里兰卡与菲律宾都为岛屿国家,其狂犬病只流行单一的进化群,前者只流行印度次大陆群,后者只流行SEA4,且SEA4只在菲律宾流行,并未传入其他东南亚和南亚国家。通过绘制东南亚和南亚14个狂犬病流行国家的RABV毒株数量、基因型和地区三者