关键词:
鸭疫里默氏杆菌
流行病学调查
血清型
耐药性分析
致病性
摘要:
鸭疫里默氏杆菌病是由鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的一种鸭急性传染病,病鸭主要表现为食欲减退、呼吸困难、共济失调、角弓反张、抽搐等症状,病死鸭剖检可见明显纤维素性心包炎和肝周炎。本病以1~6周龄的雏鸭发病较多,可经呼吸道传播,也可经垫料、污染的饲料水源等接触传播,发病率最高可达90%以上,死亡率为5%~75%,耐过后的雏鸭易形成弱雏,饲养价值降低,对养鸭业造成严重的经济损失。山东省作为养鸭大省,了解鸭疫里默氏杆菌病目前的流行情况,掌握RA的耐药及致病性特点对保障养鸭业健康发展具有重要意义。本研究收集了2020年3月至2022年3月山东省9个地市1020份疑似RA感染肉鸭的脑、肝组织,从中分离出171株RA菌株,对其进行流行病学分析,同时对病死鸭的心脏和肝脏进行了组织病理学检测;使用PCR和凝集试验对分离细菌进行了鉴定和血清分型;通过测定最小抑菌浓度对代表性分离菌株进了药敏试验,并且检测了耐药基因;对部分代表性分离菌株进行了动物回归试验及生长特性鉴定,通过计算其半数致死量(LD)来分析菌株的致病性。结果显示,2020年3月至2022年3月期间,山东省鸭疫里默氏杆菌总体流行率为16.7%(171/1020)。从地理分布上分析,阳性病例主要集中在青岛,该地区分离率占比最高为18.2%(31/171),其次是济宁,分离率占比为15.8%(27/171),荷泽分离率占比为15.2%(26/171)。从菌株分离时间上分析,RA在每个月份都可以被分离到,但大部分离菌株来自于每年9~12月份。从分离组织上分析,发现从大脑组织共分离到153株RA占分离菌的89.4%,肝脏组织分离到18株占分离菌的10.6%。病理组织学观察显示病鸭心脏血管高度扩张并充满红细胞,心包膜外有明显的纤维素性渗出物,病变组织与健康组织界限明显;肝脏肿大、淤血、表面附有一层黄白色的纤维素性假膜,镜检可见肝细胞脂肪变性,并伴有出血。通过平板凝集试验对分离菌株进行血清分型,共分离到血清1型RA 45株,血清2型45株,血清4型2株,血清6型33株,血清7型44株,血清10型2株。通过琼脂稀释法测定10种常见抗生素,包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类、喹诺酮类对其中74株菌株的最小抑菌浓度(MIC)。结果发现74株RA菌株对庆大霉素耐药性最严重,耐药率可达为77%,其次是卡那霉素耐药率为62.2%,链霉素耐药率为58.2%。但是,74株分离菌株对头孢曲松完全敏感。所检测的分离菌株均呈现严重的多重耐药性,耐三种及三种以上抗生素的菌株有60株,占比达到81.1%。对分离菌株进行耐药基因检测,发现四环素类耐药基因tet X检出率最高(95.9%),其次是大环内酯类耐药基因erm F检出率为77%,β-内酰胺类耐药基因bla 检出率最低为10.8%。通过上述流行病学调查和试验分析结果,我们选取了血清1型、2型、6型和7型RA各一株,对4株分离菌进行了动物试验。首先,对4株菌进行半数致死量(LD)测定,结果显示:血清1型菌株的LD为9.46×10CFU/m L,血清2型菌株为2.95×10CFU/m L,血清6型菌株为3.06×10CFU/m L,血清7型菌株为1.91×10CFU/m L。随后,以LD为接种剂量通过腿部肌肉注射进行致病性实验,结果显示:4株分离菌对7日龄雏鸭的致病力没有明显差异,且致病力较强,均可造成雏鸭出现抽搐、共济失调等神经症状,剖检可见明显的病理变化,死亡率可达58%~70%。综上所述,本研究对山东省部分地区2020~2022年鸭疫里默氏杆菌的调查结果显示,目前RA在山东各养鸭地区广泛流行,流行菌株大多为血清1型、2型、6型和7型。分离菌大都存在严重的多重耐药,携带有多种耐药基因。其中,携带四环素类耐药基因菌株最多为95.9%。动物实验显示,主要血清型代表菌株对雏鸭有较强的致病性。本研究将有助于我们了解近年来RA在中国山东地区最新的流行情况与耐药特点将对该病的防治起到指导作用。