关键词： 黄曲霉毒素B1   荧光适配体传感器   核酸外切酶Ⅲ   树枝状DNA纳米结构   比率型传感器   金钯纳米颗粒   无标记探针  

摘要： 黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种典型的真菌毒素,在农产品中极易残留,当蓄积到一定量时对人类和动物都有巨大的威胁。因此,准确、快速地测定AFB1对环境分析和食品安全至关重要。本课题利用荧光传感器操作简单、成本低、稳定性好等优势,结合适配体的高亲和力和特异性,并引入磁珠(MBs)、DNA纳米结构、核酸外切酶Ⅲ(Exo Ⅲ)和催化发夹自组装等不同的传感策略,构建了三种用于检测AFB1的DNA荧光适配体传感器。具体研究内容如下:1.合成了一种新型氮掺杂碳负载钯(C-N-Pd)材料,并首次将其作为荧光适配体传感器的能量受体。以C-N-Pd为新型猝灭材料,Exo Ⅲ辅助信号放大,构建了用于检测AFB1的荧光传感器。与不加酶相比,添加Exo Ⅲ的传感器的荧光响应值提高了74.7%。该荧光传感器对AFB1具有良好的选择性,检出限(LOD)低至9 pg/m L。将本传感器对玉米、花生和葡萄酒样品中的AFB1进行了检测,LOD分别为15 pg/m L、13 pg/m L和18 pg/m L。此外,将本方法与高效液相色谱法(HPLC)进行了比较,t值为1.588,小于理论t值4.303,表明在95%的置信区间下两者具有较好的一致性。该方法不仅操作简单,并且从传感器的制备到实现检测仅需2 h,在快速检测方面具有较高的潜力。2.经前期研究发现,单信号在受到环境影响下可能会产生假阳性。且基于Exo Ⅲ的辅助信号放大策略容易受到温度和p H的影响。而本实验设计了一种基于荧光共振能量转移(FRET)的比率型传感器,以两个不同波长下的荧光强度比值作为响应信号,可以极大地减弱复杂环境对荧光的负面影响,达到内部校正的效果。同时辅以无酶扩增催化发夹自组装实现信号放大,用于食品中AFB1的特异性检测。与单信号模式相比,基于F/F的比率型信号模式对AFB1的检测具有更宽的线性范围(0.1-100 ng/m L)和更高的相关系数(R=0.991)。对于花生、大豆和葡萄酒样品的加标实验,以F、F和F/F等3条标准曲线回收率的平均值为参考值,比率型信号比单信号具有更高的精度。同时,树枝状支架的存在不仅提高了传感器的稳定性,而且提高了FRET的效率。在整个检测过程中,有树枝状DNA纳米结构的响应信号差是无树枝状DNA纳米结构的5.7倍。此外,引入催化发夹自组装这一无酶扩增策略,通过适配体互补链(c-DNA)的循环实现信号扩增。3.经前期研究发现,基于比率型的传感器具有更高的准确性,且自主合成的DNA纳米结构可以提高FRET的效率。本实验引入了具有发夹结构的h-DNA,并首次将金钯纳米颗粒(Au-Pd NPs)作为荧光猝灭基底,自主合成了碳点(CDs),同时引入SYBR Green I(SG I)染料,构建了以F/F为信号的比率型传感器用于食品中AFB1的特异性检测。h-DNA的加入,极大地提高了其负载适配体(Apt)的效率。Au-Pd NPs对CDs的猝灭效果分别是Au NPs、Pd NPs的1.4倍和3.4倍。与标记型探针相比,本传感器所用的自主合成的CDs和无标记探针SG I具有节省成本的优势。在1-100 ng/m L范围内,F/F与AFB1的浓度对数具有良好的线性关系,LOD低至0.07 ng/m L。同时,本传感器对花生和葡萄酒样品中的AFB1进行了加标检测,回收率在91%-115%之间,表明本传感器在实际样品检测中具有较高的应用潜力。

关键词： AFB1   肾脏   线粒体自噬   氧化应激   细胞凋亡  

摘要： 黄曲霉毒素B(AFB)属于剧毒污染物,进入机体后会蓄积于肾脏,造成肾脏损伤。氧化应激是AFB致肾脏损伤的病理基础,并可引发线粒体损伤,而受损的线粒体可触发细胞凋亡,加剧肾脏损伤。PINK1/Parkin介导的线粒体自噬参与肾脏组织细胞内受损线粒体的清除,在维持肾脏功能方面发挥重要作用,但其在AFB致肾脏损伤中是否被激活及在其中发挥的作用尚无定论。因此,本研究提出“PINK1/Parkin介导的线粒体自噬参与保护AFB致肾脏损伤”的理论假说,拟开展以下两方面的研究:(1)AFB毒性试验:将40只野生型(WT)C57BL/6雄性小鼠分为对照组(CG,0 mg/kg ***)、低剂量组(LG,0.5 mg/kg ***)、中剂量组(MG,0.75 mg/kg ***)和高剂量组(HG,1 mg/kg ***),暴露于AFB 28 d,检测小鼠生长发育状况、肾脏结构和功能、氧化与抗氧化水平、线粒体结构和功能、细胞凋亡水平及线粒体自噬关键因子的表达,旨在明确AFB对小鼠肾脏损伤和线粒体自噬的影响,并筛选Parkin基因敲除(Parkin--)干预试验所用的AFB适宜剂量。(2)Parkin--干预试验:将20只WT C57BL/6雄性小鼠和20只Parkin--C57BL/6雄性小鼠分为WT对照组(WCG,0 mg/kg ***)、WT中毒组(WAG,1 mg/kg ***)、Parkin对照组(PCG,0 mg/kg ***)和Parkin中毒组(PAG,1 mg/kg ***),暴露于AFB 28 d,检测小鼠生长发育状况、肾脏结构和功能、氧化与抗氧化水平、线粒体结构和功能、细胞凋亡水平及线粒体自噬关键因子的表达,旨在探明PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在AFB致小鼠肾脏损伤中的作用。试验结果如下:(1)AFB毒性试验结果1)与CG相比,MG和HG小鼠体重和肾脏系数显著降低;肾脏显微和超微结构显著受损;血清BUN和CREA含量显著升高,表明AFB可导致小鼠肾脏结构和功能损伤。2)与CG相比,各AFB处理组小鼠肾脏ROS含量显著升高,SOD活性显著降低,表明AFB可诱导小鼠肾脏氧化应激。3)与CG相比,MG和HG小鼠肾脏线粒体结构显著受损;MMP水平和ATP含量显著降低,表明AFB可诱导小鼠肾脏线粒体结构和功能损伤。4)与CG相比,MG和HG小鼠肾脏Bax蛋白表达显著上调,Bcl-2蛋白表达显著下调,表明AFB可引发小鼠肾脏细胞凋亡。5)与CG相比,MG和HG小鼠肾脏PINK1、Parkin和LC3基因及蛋白表达显著升高,p62基因及蛋白表达显著降低,表明AFB可激活小鼠肾脏PINK1/Parkin介导的线粒体自噬。综上所述,以肾脏损伤显著,且线粒体自噬强度最高的剂量点,即1 mg/kg,作为Parkin--干预试验所用的AFB剂量。(2)Parkin--干预试验结果1)与WAG相比,PAG小鼠肾脏PINK1和LC3基因及蛋白表达降低,p62基因及蛋白表达升高,表明Parkin--可抑制AFB诱导的小鼠肾脏PINK1/Parkin介导的线粒体自噬。2)与WAG相比,PAG小鼠体重和肾脏系数降低;肾脏显微和超微结构损伤加重;血清BUN和CREA含量升高,表明Parkin--可加剧AFB诱导的小鼠肾脏结构和功能损伤。3)与WAG相比,PAG小鼠肾脏ROS和MDA含量升高,GSH-Px和SOD活性降低,表明Parkin--可加剧AFB诱导的小鼠肾脏氧化应激。4)与WAG相比,PAG小鼠肾脏线粒体结构损伤加剧;MMP水平和ATP含量降低,表明Parkin--可加剧AFB诱导的小鼠肾脏线粒体结构和功能损伤。5)TUNEL染色显示,与WAG相比,PAG小鼠肾脏细胞凋亡加剧;肾脏Bax蛋白表达和Caspase-3活性上调,Bcl-2蛋白表达下调,表明Parkin--可加剧AFB诱导的小鼠肾脏细胞凋亡。结论:AFB暴露可激活肾脏PINK1/Parkin介导的线粒体自噬;PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在AFB致肾脏损伤中起保护作用,且其保护作用与缓解氧化应激、线粒体损伤及细胞凋亡有关。

关键词： 黄曲霉毒素B1   肝损伤   风险评估   剂量效应模型   层次分析法  

摘要： 黄曲霉毒素B(Aflatoxin B,AFB)是一种具有遗传毒性和致癌性的真菌毒素,其广泛存在于土壤、植被和谷物中,接触大量的AFB会导致动物和人类肝脏损伤、免疫抑制甚至死亡。AFB中毒常因食用被污染的粮食、豆类和发酵食品引起。目前关于AFB危害的研究大多属于慢性肝脏损伤,有关AFB导致肝脏急性损伤的研究较少,且相关风险评估还停留在定性研究阶段。在消费日益增长的今天,研究AFB对肝脏急性损伤以及相关风险评估可为食品中安全风险控制提供科学依据和管理参考。本论文主要分为两大部分:第一部分探究大鼠和青鳉鱼单次急性暴露于AFB后对于肝脏的持续性的损害作用;第二部分基于前面的研究建立相关风险评估模型,主要包括大鼠肝细胞凋亡率的剂量效应模型以及基于层次分析法构建青鳉鱼养殖过程AFB风险评估模型。具体研究结果如下:1.为了研究大鼠腹腔注射1mg/kg和2mg/kg AFB后,不改变饲养方法继续饲养2天和7天,之后处死大鼠并分析AFB对肝脏毒性作用影响。通过测定摄入AFB后大鼠体重、肝脏系数、血清肝功能生化指标、脂质过氧化产物、抗氧化酶活性的变化,分析AFB对大鼠肝脏的毒性作用。结果显示,与空白组相比,大鼠腹腔注射AFB后体重有所下降,但是肝脏系数上升,且相关生化指标、抗氧化酶活性均在注射后第2天达到峰值后呈现下降趋势,实验结果表现出剂量依赖性。由此可见,大鼠急性暴露于AFB后肝脏呈现不同程度的损伤,且随着剂量的提升肝脏损伤程度也有所上升。2.基于AFB诱导大鼠肝细胞凋亡的定量数据,计算不同剂量的AFB对于大鼠肝细胞凋亡率的影响,从而构建AFB诱导大鼠肝细胞凋亡率的剂量效应模型。通过比较指数模型、对数模型、韦布尔模型、希尔模型对实验数据的拟合结果,选择最优拟合模型。在一定的迭代次数内,通过拟合模型获取决定系数和进一步的数学检验表明,伽马模型(R=0.9964,赤池信息准则AIC=37.40,贝叶斯信息准则BIC=17.19)优于其他模型。建议选用伽马模型作为AFB诱导大鼠肝细胞凋亡率最合适的剂量效应模型,用于AFB风险评估框架中的危害特征描述。3.为探究AFB对水生模式生物肝脏的影响,选用青鳉鱼作为实验动物,腹腔注射0.25g/L和1g/L的AFB工作液,72h后解剖鱼体并分析AFB对青鳉鱼肝脏毒性作用的影响,作为大鼠实验结果的进一步验证和补充。通过测定青鳉鱼腹腔注射AFB后体重、肝脏系数、组织病理学检验、血清肝功能生化学指标、脂质过氧化产物和抗氧化酶活性的变化,分析AFB对青鳉鱼肝脏的毒性作用。结果显示,青鳉鱼腹腔注射AFB后体重、肝脏系数均有所下降,HE染色显示出肝细胞有变性、坏死的情况出现,肝功能生化学指标、脂质过氧化产物、抗氧化酶活性均表现出上升的趋势。由此可见,青鳉鱼急性暴露于AFB后肝脏也会呈现不同程度的损伤,但是随剂量上升变化趋势和大鼠变化趋势不完全相同,可能由于水生动物与哺乳动物体内代谢机制和肝脏排毒系统导致。4.基于层次分析法和德尔菲法构建青鳉鱼养殖过程中AFB风险评估模型。其中风险因素评估指标体系包括1个目标层(青鳉鱼养殖中AFB发生风险)、4个准则层(青鳉鱼自身状况、水质状况、饲养管理、养殖环境)和20个指标层(体重、p H值、水温、养殖密度、消毒情况等)。准则层风险因素权重值集合为W={0.0576,0.5681,0.1333,0.2410},指标层风险因素中p H值(0.2131)、水温(0.1344)、消毒情况(0.1138)、溶解氧(0.0779)等权重值较高,推测这些因素是影响青鳉鱼感染AFB的重要因素。

关键词： 蜡样芽孢杆菌   玉米籽粒   黄曲霉毒素B1   玉米赤霉烯酮   呕吐毒素  

摘要： 试验旨在评估可有效降低玉米籽粒中黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)和呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)含量的优良菌株。试验以霉菌毒素超标的玉米籽粒作为脱毒材料,设置4个处理组:CK(对照组);TD-1蜡样芽孢杆菌处理组(1%、5%、10%);TD-2蜡样芽孢杆菌处理组(1%、5%、10%);TD-3蜡样芽孢杆菌处理组(1%、5%、10%)。在玉米籽粒发酵后48 h进行取样,测定AFB1、DON和ZEN含量及营养成分。结果表明:TD-1蜡样芽孢杆菌对AFB1、DON和ZEN脱毒效果最优。添加5%的TD-1蜡样芽孢杆菌对玉米籽粒中AFB1和DON脱毒率分别为67.59%和73.03%;添加10%的TD-1蜡样芽孢杆菌菌液发酵48 h后,对ZEN脱毒率可达65.71%;添加蜡样芽孢杆菌菌液会降低玉米籽粒可溶性碳水化合物(Water soluble carbohydrate,WSC)含量,对其他营养成分无显著影响(P>0.05)。

关键词： 中药材   黄曲霉毒素B1   真菌毒素   污染   致癌风险  

摘要： 目的了解柏子仁等21种中药材被黄曲霉毒素B1(AFB1)污染的状况并进行致癌风险分析。方法检索中国知网、维普、Pubmed、Elsevier、Springer等数据库,检索时间2000年1月1日至2022年1月1日,筛选受AFB1污染的中药材检测相关数据与文献,共得到43篇文献,获得数据520组。对数据进行灵敏度分析及风险评估。结果柏子仁、大枣、胖大海等10种中药材的AFB1检出率较高,均不低于50.00%;柏子仁、莲子、槟榔等6种中药材的合格率均低于70.00%;莲子、柏子仁、远志、陈皮、酸枣仁、延胡索的阳性最大值超出《中华人民共和国药典(2020年版)》(以下简称《中国药典》)规定值的15~110倍。21种中药材所含AFB1的日暴露量为0~3.1370ng/kg,超额风险为0~0.9411。柏子仁、远志、陈皮等9种中药材AFB1测定均值对超额风险的灵敏度均达到了97.000%以上,人体质量对超额风险的灵敏度均小于0。当样本量足够大时,中药材AFB1测定均值为超额风险的主要影响因素。结论21种中药材受AFB1污染严重,其中19种中药材受到了AFB1污染,并且14种出现了不同程度的AFB1含量超标情况。21种中药材均符合《中国药典》用法用量,其慢性致癌风险在可控制范围内。

关键词： 固体分散技术   中药制剂   制备方法   研究应用  

摘要： 中药的活性成分比之化学药品更加复杂多样。众所周知,中药制剂的服用剂量普遍较大,这主要因其有效成分利用度较低,且药材的质量不均衡等原因所致。固体分散技术已成为现阶段中药制剂行业的焦点话题,并在不断的深入研究中,取得了突破性进展。其不仅能促进有效成分的利用率与溶出度,更有助于中药制剂的未来发展与进一步研究。本文主要就固体分散体的概念、特点、在中药制剂中的制备方法与实际应用展开综述,旨在为今后的相关研究提供有力依据。

关键词： 中药   提取物   紫外分光光度计   防晒剂  

摘要： 分别采用体积分数50%乙醇提取了11种中药,并利用紫外光谱法对11种中药提取物的紫外吸收进行了研究,初步评价了它们的防晒效果。结果表明,8种中药提取物对紫外线有一定吸收,为今后开发新型天然植物防晒剂提供了参考。

关键词： 麝香   牛黄   《中华人民共和国药典》   中药制剂   质量标准   代用品   处方量  

摘要： 作为名贵中药材,麝香、牛黄常用于急重症患者的救治,但因二者来源稀缺、价格昂贵,野生动物资源急需保护,天然麝香和牛黄已经无法满足制剂生产的需要,人工麝香、人工牛黄、体外培育牛黄等代用品的使用在一定程度上缓解了原药材紧张的问题,目前已被广泛用于中药制剂的生产和使用。2020年版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)共收载了75个中药制剂含有麝香,95个制剂含有牛黄,但在这134个中药制剂的质量标准中,对天然药材与其代用品的区别并不十分明显,部分质量控制项目较为简单。笔者通过梳理2020年版《中国药典》(一部)所载含麝香、牛黄的中药制剂的质量标准情况,包括制剂中麝香或牛黄的类型、入药形式、处方用量、每日(次)最大服用量及质量控制项目等,探讨含麝香、牛黄的中药制剂质量标准的合理性,并在规范麝香和牛黄的使用类型、结合现代研究成果和先进技术完善中药制剂中麝香、牛黄的质量控制项目等方面给出建议,以期能够科学认识、评价含有麝香和牛黄的中药制剂,并为此类中药制剂的质量标准提高提供参考。

关键词： 非酒精性脂肪性肝病   单味中药提取物   中药单体   复方  

摘要： 非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种常见的慢性肝病,其发病机制复杂多样,且与多种疾病的发展密切相关,临床治疗以调节生活方式为主,药物为辅。近年来,随着其发病率的上升,寻找特效药用于其治疗成为当前相关领域的研究方向。针对NAFLD的大量体内外实验研究表明,多种中药或复方对NAFLD的治疗有着良好的前景。

关键词： 电化学传感器   二茂铁   适配体   黄曲霉毒素  

摘要： 黄曲霉毒素B1(AFB1)在农产品和食品中的污染已严重威胁到人类健康,发展简便、灵敏、快速的AFB1检测方法至关重要。为此提出一种基于二茂铁标记适配体的电化学传感器,用于灵敏检测玉米中AFB1。该传感器通过在金电极上顺序组装巯基化互补DNA(cDNA)、巯基己醇(MCH)、二茂铁修饰AFB1适配体(Fc-Apt),形成基于双链DNA结构的传感界面。目标物AFB1存在时,其与适配体的特异性结合诱导Fc-Apt从电极表面解离,导致IFc降低,进而通过测量IFc的值,实现对AFB1的灵敏检测。该传感策略结合了电化学检测与基于DNA构象变化的开关探针的优点,使传感器具有较高的灵敏度和选择性,其对AFB1的线性检测范围为1.0 pg/mL~1.0μg/mL。应用于玉米中AFB1的检测时,回收率为93.0%~102.5%,RSD低于4.6%,具有较好的实际应用能力。该工作为构建灵敏快速的真菌毒素检测平台提供了一种简便有效的方法。