关键词： 中药协定处方   中国中医药报   中医医院   疫情防控   综合司   病毒感染   中药饮片   中药制剂  

摘要： 《中国中医药报》2023年1月6日讯:日前,国家中医药管理局综合司印发《关于加强治疗新冠病毒感染中药协定处方和医疗机构中药制剂使用的通知》,对中药协定处方和医疗机构中药制剂使用提出了五点要求,明确长江以北地区适用中药协定处方加味葛根汤,长江以南地区适用中药协定处方加减银翘散。《通知》要求,各省级中医药主管部门要组织省级新冠肺炎疫情防控中医药专家委员会(专家组)根据当地气候因素和饮片使用习惯研究制定“治疗新冠病毒感染中药协定处方”,供省内中医医院使用。“中药协定处方”应尽量精简药味,使用临床常用、市场供应充足的中药饮片,以保障临床有效供应。

关键词： 过敏性休克   用药者   过敏反应   过敏体质   中药煎剂   肌肉注射   体质差异   中药制剂  

摘要： 在生活中,中药的过敏反应常被人们忽视,不少人以为中药是天然的、无副作用,且药性温和。殊不知,中药与西药一样可以引起过敏反应,有的过敏反应还相当严重,甚至因过敏性休克而致死亡。中药致过敏反应与用药者的体质差异有关。若患者属于过敏体质,则无论中药煎剂、中成药,还是外用、肌肉注射的“合成”性中药制剂,都可能引起过敏反应。

关键词： 药品   高质量发展   中药制剂   原料  

摘要： 目的:为中药制剂监管检查更好地服务于行业高质量发展提供参考。方法:归纳中药制剂原料质量控制存在的问题,分析产生问题的原因。结果:现行GMP没有完全对焦中药制剂主要矛盾,对高质量发展关注不够。结论:中药制剂应该探索均一化投料,完善原料质量控制,加强原料供应保障,建议完善GMP中药制剂相关内容,强化投料前质量控制,细化内控质量标准要求,加强原料供应体系审计要求,突出原料供应的稳定性和保障能力,建立基础数据库,助力中药行业发展。

关键词： 探索性研究   中药制剂   质量控制   上市许可持有人   源头控制   全过程控制   整体质量控制  

摘要： 中药制剂成分复杂,其质量控制一直是中药制剂研究、生产、监管关注的重点和难点。通过分析、总结中药制剂质量控制的特点,梳理近年来国家药品抽检对中药材及饮片、中成药所开展的探索性研究取得的工作成果,探讨探索性研究对中药制剂质量控制研究的意义以及中药制剂质量控制研究思路,认为目前中药制剂质量控制研究应是一个随着技术水平的发展、研究的不断深入而不断进行质量设计、质量完善的过程;探索性研究为中药制剂质量控制提供了有效的技术支撑,对探索性研究成果的利用有助于提高中药制剂质量控制水平;药品上市许可持有人应利用国家药品探索性研究成果,研究建立全过程质量控制体系,重视对药材源头的质量控制,重视全过程质量控制及相关研究,加强中药制剂整体质量表征和多途径控制研究,以提高中药制剂质量控制水平,提升中药制剂质量。

关键词： 中药制剂   口服制剂   苦味   掩味   包衣材料   壳聚糖   环糊精   丙烯酸树脂  

摘要： 中药口服制剂多为复杂体系,口感较差,影响着患者服药的依从性,因此对其进行口感改良具有现实意义。矫掩味方法多样,其中包衣法较为常用,包衣层可减少药物与苦味受体的接触,从而达到掩味的目的。采用包衣法掩味时,除需保证良好的掩味效果外还需保证药物的释放,包衣材料的选择至关重要。中药制剂常用的包衣材料主要包括糖类如壳聚糖、环糊精、纤维素衍生物等,树脂类如丙烯酸树脂等,脂类如巴西棕榈蜡、山嵛酸甘油酯等。对常用的掩味用包衣辅料进行了综述,以期能为中药掩味包衣材料的选择提供参考。

关键词： 黄曲霉毒素B1   贵州省遵义市   购物中心   抽样检测   行政处罚决定书   百合  

摘要： 近日,贵州省遵义市播州区市场监管局发布行政处罚决定书(播市监行处字[2022]76号),涉及播州区洪浩百合购物中心。一、案情如何?2022年6月22日,贵州省遵义市播州区市场监督管理局委托“遵义市精科信检测有限公司”对当事人经营的食品(散装红皮花生)进行了抽样检测。

关键词： 生物传感   智能手机检测   金属有机框架材料   纳米模拟酶   疾病标志物   黄曲霉毒素B1  

摘要： 金属有机框架材料(MOFs)是一种比表面积较高、孔隙可调的多孔纳米材料,合成简单、催化性高、稳定性高、成本低廉等这些都是纳米模拟酶的显著优势。这两类材料被大量使用在生物传感领域,具有良好的应用潜力。本文合成Ui O-66-NH(Zr-MOF-NH)、MIL-125-NH(Ti-MOF-NH)金属有机框架材料以及具有过氧化物酶性质的NiVO、Fe/Eu-MOF材料,并将其用于疾病标记物及真菌毒素检测的传感体系中。本文工作具体分为以下四个部分:(1)实验构建了一种基于紫外可见吸收和试纸条色度的双信号检测抗坏血酸(AA)的传感体系。该传感体系基于NiVO模拟过氧化酶活性,催化TMB(3,3’,5,5’-四甲基联苯胺)生成蓝色氧化物(ox TMB)。ox TMB在652 nm波长时含有一个特征吸收峰。当抗坏血酸(Ascorbic Acid,AA)存在时,蓝色的ox TMB被还原为无色的TMB,可通过紫外-可见分光光度计检测吸收峰强度的降低实现对AA的定量检测。在最佳实验条件下,该传感体系对AA的检出限较低,具体为0.032μmol/L,并且选择性较好。将该传感体系可用于真实样品果汁和饮料中AA的检测,具有较好的应用前景。同时,实验还构建了试纸条检测AA的方法,为快速、高效、灵敏的抗坏血酸检测提供了一种新的策略。(2)RGB指色彩集合在数学上的具体表达,可以理解为给图像分配一个0～255之间的值。如今越来越多的比色反应与RGB相结合,成为研究热点。实验设计了一种以Fe/Eu-MOF为基础的高灵敏度检测胆固醇的三模式传感体系。当胆固醇氧化酶存在时,胆固醇会被催化氧化,产生过氧化氢,加入Fe/Eu-MOF材料,在氧化作用下,TMB由无色变为蓝色(ox TMB),从而通过紫外分光光度计以及智能手机测得的RGB值达到检测胆固醇含量的目的。同时ox TMB猝灭Fe/Eu-MOF的荧光信号,同样可以根据荧光强度来检测胆固醇,以此构建三模式检测胆固醇的传感体系。该传感体系具有灵敏度较高、测试时间较短、线性范围较宽、选择性较好等优点,可用在于实际血清样本中胆固醇的检测,本文研制的传感体系为检测胆固醇增加了一种新的思路。(3)采用MXene材料中的TiC掺杂金纳米颗粒作为传感器的基底材料,以负载金纳米颗粒的MOFs复合纳米材料Au NPs@Ui O-66-NH为信号探针,利用杂交作用将标记有Au NPs@Ui O-66-NH的AFB适体链结合到T链上。利用黄曲霉毒素B(AFB)特异性识别AFB适体以此测定AFB的含量。实验在Tris-HCl缓冲溶液中通过差分脉冲伏安法(DPV)测量Au NPs@Ui O-66-NH复合材料的DPV信号值,构建了signal-off型的电化学适体传感器。传感器对AFB在0.1-110 ng/m L之间表现出线性相关,检出限较低,具体值是0.033 ng/m L,线性方程为ΔI=0.5487x+0.9530。本文为AFB痕量检测提供了一种新方法。(4)网络DNA的构建越来越受到关注。实验设计了一种修饰硫堇(Thi)的Pt Ni NCs@MIL-125-NH为结点的网络DNA(多硫堇网络DNA)用于白细胞介素-6(IL-6)的灵敏检测。该方法以修饰Thi的Pt Ni NCs@MIL-125-NH为信号来源,构建了一种signal-on型的电化学适体传感器。与其它常见信号放大型传感器相比,本工作构建的传感器不需要额外的底物,并且设计的多硫堇网络DNA可以负载更多的Thi@Pt Ni NCs@MIL-125-NH信号标签用于放大信号。该适体传感器对人体血清中的IL-6有良好的电化学响应。IL-6含量的线性响应在1-10000 pg/m L之间,相关系数R=0.9917,检出限为0.89 pg/m L。实验所构建的传感器不仅可以放大信号,而且具备操作简单、灵敏度高等优势。

关键词： 黄曲霉毒素B1   T-2毒素   免疫磁珠   ELISA   荧光免疫层析检测技  

摘要： 黄曲霉毒素(Aflatoxins,AFs)中危害最大的黄曲霉毒素B(Aflatoxin B,AFB)和单端孢霉烯族毒素中毒性最大的T-2毒素都会损害人体免疫系统,低剂量的毒素可引起炎症反应、长期接触会对人体的免疫系统具有抑制作用。及时准确测出农产品中的真菌毒素污染是保障农产品安全的有效途径。免疫分析技术因其灵敏度高、操作简单等特点被广泛应用于真菌毒素快速检测中。免疫层析技术(Immunochromatographic assay,ICA)和酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒等快速检测产品常用作农产品现场快速检测,市场监管总局发布的食品检验方法中采用的均为比色和试纸条检测方法。免疫分析技术的核心试剂为抗体,获得分泌高质量单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株是单克隆抗体制备的前提。目前市场上快速检测产品灵敏度不高、容易出现假阳性、操作步骤繁琐、耗时耗财,其关键核心试剂-单克隆抗体质量亟待提高。针对污染农产品严重的AFB和T-2毒素和目前常用的快速免疫分析检测技术的缺点,本课题的主要研究内容成果如下:(1)采用类分布函数顶点亚克隆法结合三步样本放大和多浓度标准品检测筛选得到AFB单克隆抗体。研究过程中发现,随着亚克隆的进行细胞上清检测数据的分布类似于分布函数,选择分布函数顶端附近灵敏度和特异性较高的细胞孔进行亚克隆。随着亚克隆的进行逐渐降低标准品的浓度对细胞进行驯化以提高单克隆抗体的灵敏度。但是单一标准品浓度对细胞上清的检测有一定的局限性,上清中抗体较多时会忽略一些好的细胞。对96孔细胞板单一标准品下筛选出来的细胞在24孔、6孔细胞板和培养瓶中进行样本放大,并采用多浓度标准品进行上清检测,对比数据一致的细胞即为单克隆培养获得的稳定的细胞株,最终获得稳定分泌抗AFB单克隆抗体的最佳杂交瘤细胞株AFB-B56-A2-2,所分泌的单克隆抗体MAb A2-2的半抑制浓度为0.13522 ng/m L,检测范围为0.08518-0.21464ng/m L。(2)基于动态、伪均质的免疫磁珠(Immunomagnetic beads,MBs)-间接竞争ELISA(MBs-ic ELISA)的建立。针对目前ELISA耗时长、过程繁琐等问题,以单克隆抗体MAb A2-2为识别元件、MBs为抗原载体构建MBs-ic ELISA。作为固定相的MBs比平板具有更大的表面积固定更多的抗原,并将反应体系从固相转移到液相使反应体系更加均匀。增加外力条件可以使MBs-ic ELISA处于一种动态中,不仅提高结合率而且极大缩短了检测时间。与现有的ELISA相比,MBs-ic ELISA缩短了2/3检测时间,提高了灵敏度。在最优的反应条件下,甲醇溶液(10%,z/o)中线性拟合方程为Y=-0.57lg X+2.64(R=0.99396),线性检测范围为0.004-10 ng/m L,检测限(Limit of detection,LOD)为0.0013 ng/m L。(3)基于生物活性保护和信号放大荧光免疫层析检测技术(Fluorescence immunochromatography assay,FIA)的构建。目前大多数免疫层析检测技术是采用靶标抗体直接标记法,标记过程易损害抗体活性,且信号采集效率低,因此本研究建立了一种FIA用于检测T-2毒素。荧光探针(Ig G@Eu)由聚苯乙烯荧光微球与绵羊抗小鼠Ig G结合制备,不仅能保护单克隆抗体活性,提高了荧光微球与单克隆抗体的结合率进而扩增荧光信号。T-2毒素在甲醇溶液(70%,z/o)中的标准工作方程式为Y=-0.43022X+0.7308(R=0.98593)。T-2毒素在甲醇溶液(70%,z/o)中的LOD为0.01 ng/m L,线性范围为0.0625-50 ng/m L。在玉米底物、饲料底物中的LOD为0.052 ng/m L、0.071 ng/m L,T-2毒素的回收率在95.31%-119.03%、95.7%-110.33%之间,相对标准偏差小于11.38%、16.02%。采用LC-MS/MS法对该方法进行了验证,结果表明该方法具有较好的准确性。本研究为杂交瘤细胞筛选技术的创新提供了理论基础,所建立的MBs-ic ELISA和FIA在后续有望转化为产品售于市场,实现农产品现场高通量快速检测,为免疫分析方法的构建提供了理论基础和实践技术支持。

关键词： AFB1   生物降解   发酵条件优化   全基因组   AFB1降解酶  

摘要： 黄曲霉毒素B(Aflatoxin B,AFB)是由黄曲霉、特曲霉以及寄生曲霉等产生的一类含有双呋喃环和氧杂萘邻酮结构的次生代谢产物,是一种具有诱变、致癌、致畸、肝毒性和免疫抑制特性的强效真菌毒素。AFB常在土壤、谷物、坚果、奶制品和食用油等制品中检测到,饲料和食品暴露在高温高湿环境中极易发生污染。因此,寻找安全有效的AFB降解方法已成为目前研究的热点。AFB可以通过物理、化学和生物方法进行降解,其中生物法降解具有较高的特异性,对食品的品质危害较小,在适当的条件下甚至可以完全降解毒素。因此,生物法降解逐渐成为最合适的解毒方式。本研究从具有高效降解AFB能力菌株的筛选、鉴定入手,对该菌株发酵工艺、降解活性物质、降解产物以及降解酶基因挖掘和异源表达等方面进行研究,主要结果和结论如下:***降解菌的筛选及鉴定:本研究从不同样品中初步分离得到303株形态不同的菌株,以AFB降解率为指标进行复筛,通过复筛得到4株降解AFB能力良好的菌株,其中分离自玉米地土壤中的菌株A6的AFB降解能力最强,共同孵育72 h后,AFB降解率可以达到90.10%,将其命名为HNGD-A6,供后续实验研究。对菌株HNGD-A6进行菌株鉴定,经鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。2.菌株HNGD-A6发酵条件的优化:测试不同类型培养基对菌株AFB降解效果的影响,确定菌株HNGD-A6最优培养基为LB培养基。通过单因素优化得到菌株HNGD-A6最佳发酵条件为接种量0.01%、pH 8.0、温度37℃、装液量50 mL、发酵时间48 h。以发酵温度、pH、装液量为因素进行响应面试验设计,预测得到菌株HNGD-A6的最佳发酵条件为接种量0.01%、pH7.9、温度37.4℃、装液量52.2 mL、发酵时间48 h,按照最优条件,AFB降解率达到94.66%。降解AFB活性物质定位:对菌株HNGD-A6的发酵液、上清液、细胞悬液、胞内提取物分别进行AFB降解效果的测定,除去发酵液外,上清液的降解效果最佳,达到91.72%。菌株上清液经PK、PK+SDS处理后,AFB降解效果明显减弱,但热处理后降解效果几乎无变化,判断其降解活性成分为胞外蛋白质,且具有耐热性。3.降解产物的结构分析及毒理性评价:对菌株HNGD-A6上清降解AFB的降解液进行UPLC-HRMS检测,发现两个主要的降解产物,分别是P1即AFD(CHO)以及P2(CHNO)。其中P1是由AFB的主要毒性位点的内酯环打开得到的;根据P2的结构可知,AFB的三个毒性位点皆被破坏。为进一步研究降解产物的毒性,以鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA100为试验菌株,对AFB降解产物进行Ames试验探讨其致突变性。在AFB降解72 h后,试验菌株的回复突变菌落数与AFB作用下的菌落数相比,显著降低,且试验结果呈致突变阴性,表明在降解72 h后,AFB已被大部分降解,降解产物与AFB相比,致突变性大大降低。之后以斑马鱼幼鱼为试验对象,对AFB降解产物进行斑马鱼幼鱼致畸性及肝毒性试验。通过斑马鱼幼鱼存活率试验确定了AFB诱导浓度为80 ng/mL,同时降解产物及试剂组的斑马鱼幼鱼存活率皆为100%。经AFB诱导,斑马鱼幼鱼肝脏明显萎缩,卵黄囊发育不全且有明显的发黑迹象,在形态上明显出现脊柱弯曲和尾部弯曲等致畸现象,而降解产物组与之相比并无致畸现象。通过对谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及乳酸脱氢酶(LDH)指标的测定,降解产物组与对照组相比并无显著差异,表明降解产物对斑马鱼幼鱼肝脏并无致毒性。4.全基因组分析及降解酶基因的挖掘:菌株HNGD-A6经过样品质量检测、文库构建、文库质量检测、文库测序和信息分析等流程后,进行全基因组测序分析,通过测序拼装得到基因组序列长度为5321281bp,其中鸟嘌呤和胞嘧啶所占的比率(ratio of guanine and cytosine,GC)为38.11%;编码蛋白总数目为5366个;tRNA基因115个,rRNA基因39个,基因组组装的完整性良好。菌株HNGD-A6在经过测序后进行通用数据库的功能注释,包括Nr、GO、KEGG等数据库。将菌株HNGD-A6的氨基酸序列进行建库后使用Blast P功能与已知AFB降解酶基因进行比对,得到五条AFB降解酶候选基因序列。采用异源重组的方法,以pET-28a(+)为载体,进行蛋白表达载体的构建。构建成功的重组载体质粒导入大肠杆菌表达菌株BL21中,使用IPTG在16℃条件下进行低温诱导,成功表达出两个候选基因。其中AttM、CueO表达出的分子量大小分别为30 kDa、57 kDa。将纯化后的AttM和CueO在不同pH、温度条件下分别与AFB共同孵育24 h后进行降解效果的测试。AttM在pH 9时AFB的

关键词： AFB1   线粒体自噬   ROS   焦亡   肾毒性  

摘要： 焦亡是炎症性细胞死亡的一种形式,过度焦亡可导致高水平的细胞死亡、组织损伤和器官衰竭。黄曲霉毒素B1(AFB1)具有致癌性、突变性和致畸性。肾脏是AFB1毒性的主要器官,研究证实AFB1可在肾脏中积累,导致肾脏损害,包括肾组织紊乱和功能障碍,然而目前还没有见到AFB1诱导肾细胞焦亡的研究。因此,本论文旨在研究AFB1对肾细胞焦亡的影响,并阐明其具体机制。主要研究内容和结果如下:(1)探讨AFB1对NRK-52E细胞(大鼠肾小管导管上皮细胞)和小鼠肾细胞焦亡的影响(1)为了研究AFB1对NRK-52E细胞的毒性作用,我们利用MTT实验筛选出AFB1的有毒作用剂量为1.25-40μM。(2)为了研究AFB1对小鼠肾功能的影响,我们发现,与Control组相比,AFB1组的小鼠肾脏组织中尿素氮(BUN),肌酐(CRE)和尿酸(UA)的含量显著升高,HE染色切片显示,肾间质出现了充血的现象;肾小管有空泡样的病变发生,肾小囊囊腔间隙增宽。(3)为了研究AFB1对肾细胞焦亡的影响,我们通过蛋白质免疫印迹(western blot)检测发现,AFB1显著提高的小鼠肾细胞和NRK-52E细胞中焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD-N、caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)的表达和乳酸脱氢酶(LDH)含量。以上结果表明AFB1可以诱导NRK-52E细胞和小鼠肾细胞焦亡。(2)探讨AFB1对溶酶体膜通透化(LMP)以及组织蛋白酶B(CTSB)释放对细胞焦亡的影响及作用机制。(1)为了研究AFB1对溶酶体功能的影响,我们首先对小鼠和NRK-52E细胞中溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)和CTSB的表达进行检测,发现AFB1可下调LAMP1蛋白的表达水平,而上调CTSB蛋白的表达水平,说明AFB1对NRK-52E细胞溶酶体造成损伤。(2)为了研究AFB1对LMP的影响,我们对NRK-52E细胞LMP相关指标吖啶橙(AO)、Lysotracker Red(LTR)和CTSB的免疫荧光染色情况进行检测,发现AFB1可诱导LMP的发生。(3)为了研究CTSB对NLRP3的影响,我们通过免疫荧光染色发现AFB1可提升CTSB和NLRP3的共定位情况。以上结果表明,AFB1通过诱导LMP,促进CTSB释放到细胞质,激活NLRP3。(3)探讨AFB1对线粒体损伤和线粒体自噬的影响和机制。(1)为了研究AFB1对线粒体自噬的影响,我们发现AFB1可下调PINK1和Parkin蛋白的表达,同时上调LC3和P62蛋白的表达。加入线粒体自噬激活剂CCCP后,可显著增加PINK1、Parkin和LC3蛋白的表达,而降低P62蛋白的表达。通过检测LC3和线粒体红色荧光探针(Mito-Tracker Red)共定位,进一步证明了AFB1可抑制线粒体自噬。(2)为了研究AFB1对活性氧(ROS)的影响,我们通过检测线粒体膜电位(MMP)发现AFB1降低MMP,说明AFB1可诱导线粒体损伤。接下来我们发现AFB1处理显著增加了细胞内ROS和线粒体内ROS(mt ROS)。添加CCCP后,ROS水平降低,说明AFB1通过抑制线粒体自噬诱导ROS水平升高。(3)为了研究ROS对LMP的影响,我们加入ROS抑制剂NAC,发现NAC可逆转AO和LTR的结果,说明ROS升高可促进LMP的发生。以上结果说明,AFB1通过抑制线粒体自噬,导致细胞内ROS上升,从而诱导LMP。综上所述,本研究从体内和体外两个水平阐述了AFB1通过抑制线粒体自噬,促进ROS上升,诱导LMP从而释放CTSB激活NLRP3,触发肾细胞焦亡和肾损伤的分子机制。