关键词:
格列齐特
糖尿病
胰岛素抵抗
胰脏
NLRP3
摘要:
目的探究格列齐特(Gliclazide,GL)对糖尿病大鼠胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)及胰脏含NOD样受体家族Pyrin域蛋白3(Nod-like receptor family pyrin domain containing protein 3,NLRP3)炎症小体的影响。方法60只大鼠随机分为对照(Control)组、2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)组、GL低剂量(GL low dose,GL-L)组和GL高剂量(GL high dose,GL-H)组,每组15只。采用高糖高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导T2DM大鼠模型。便携式血糖监测仪检测大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),腹腔葡萄糖耐量试验(intraperitoneal glucose tolerance tests,IPGTT)检测血清胰岛素水平,评估胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR);HE染色观察胰脏组织病理损伤;酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清炎性因子白细胞介素(interleukin,IL)-18、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;免疫组化检测胰脏组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate-specific proteinase-1,Caspase-1)水平;Western blot检测胰脏组织炎性因子NLRP3、ASC、Caspase-1水平。结果与Control组相比,T2DM组、GL-L组、GL-H组体重、FBG、IPGTT-AUC、胰岛素水平、HOMA-IR水平明显升高,差异有统计学意义(F=34.48、53.42、47.90、32.89、34.15,P值均<0.05)。HE染色结果显示,GL-L组、GL-H组大鼠较T2DM组炎症程度明显减轻,胰岛细胞形态较规则、胞浆充盈。ELISA结果显示,与Control组相比,T2DM组、GL-L组、GL-H组大鼠血清和胰腺组织炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-18水平明显升高,差异有统计学意义(F=27.02、42.12、35.22、44.02、52.82、42.70,P值均<0.05);与T2DM组相比,GL-L组、GL-H组大鼠血清和胰腺组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-18水平明显降低,差异有统计学意义[血清:pg/mL:(185.34±19.31)比(141.22±11.24)或(111.36±10.56),(268.41±16.34)比(175.67±7.16)或(125.67±7.33),(280.66±18.15)比(197.61±8.55)或(127.43±8.57);胰腺:(1.10±0.08)比(0.81±0.06)或(0.41±0.04),(1.12±0.07)比(0.65±0.07)或(0.23±0.03),(1.11±0.09)比(0.60±0.05)或(0.32±0.03),P值均<0.05]。免疫组化和Western blot结果显示,与Control组相比,T2DM组、GL-L组、GL-H组大鼠胰腺组织NLRP3、ASC、Caspase-1水平明显升高,差异有统计学意义(F=37.58、45.37、34.75、44.51、48.54、38.48,P值均<0.05)。选择1μmol/L胰岛素、48 h作为IR-HepG2细胞模型最佳浓度和作用时间。与Control组相比,IR组、GL-L组、GL-H组细胞葡萄糖消耗量和糖原含量明显降低,差异有统计学意义(F=17.84、15.58,P值均<0.05)。Western blot结果显示,与Control组相比,IR组、GL-L组、GL-H组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1水平明显升高,差异有统计学意义(F=47.74、41.21、46.74,P值均<0.05);与IR组相比,GL-L组、GL-H组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1水平明显降低,差异有统计学意义[(0.85±0.05)比(0.68±0.04)或(0.20±0.04),(0.60±0.05)比(0.40±0.04)或(0.20±0.03),(0.93±0.06)比(0.72±0.05)或(0