关键词： 细胞凋亡   自噬   焦亡   铁死亡   缺氧   铜死亡   parthanatos  

摘要： 缺氧性细胞损伤（hypoxic cell damage）参与多种疾病的发生，严重危害人类的健康，因而对缺氧性细胞损伤机制的深入探索具有重要意义。目前的研究表明缺氧性细胞损伤的发生机制主要与细胞凋亡、自噬、焦亡、铁死亡、铜死亡及parthanatos密切相关。本文主要总结缺氧性细胞损伤的发生机制，阐明其关键因子及其调控机制，以期为涉及缺氧性细胞损伤的相关疾病的防治提供新思路。

关键词： 长角血蜱   卵形巴贝斯虫   天冬氨酸蛋白酶   RNA干扰   RACE  

摘要： 本试验以天冬氨酸蛋白酶(AP)为目标基因，探究其表达抑制后对卵形巴贝斯虫侵染长角血蜱的能力。利用5′/3′-RACE和PCR扩增天冬氨酸蛋白酶基因的全长和CDS，然后根据获得的序列设计siRNA干扰引物。通过颈静脉接种卵形巴贝斯虫的方式构建动物感染模型，将通过RNAi干扰AP基因表达后的长角血蜱置于感染卵形巴贝斯虫牛体表，使蜱叮咬后检测蜱及蜱卵中卵形巴贝斯虫的感染率。结果显示，长角血蜱AP基因全长为1 497 bp，编码区序列为1 176 bp。该基因的RNAi可使AP的表达丰度降低81.91%(P=0.003<0.01)具有显著性差异。感染动物过程中，相较于空白对照组和阴性对照组，qRT-PCR结果表明RNAi组的巴贝斯虫感染率下降。实验结果，表明干扰长角血蜱AP能有效抑制卵形巴贝斯虫的垂直传播，虽然该基因在蜱种间有较高保守性，但是其核酸序列仍然存在一定的差异。该基因第626～644位或第257～275位定点结合可作为潜在的阻断卵形巴贝斯虫传播的疫苗设计靶点，该位点可以发挥抑制/干扰AP的表达的作用。该作用下可有效阻止卵形巴贝斯虫的垂直传播，而且可导致巴贝斯虫的感染水平的显著降低。因此，本研究不仅有助于揭示巴贝斯虫的生物学特性，也为疾病防控提供了潜在的新策略，为公共卫生提供更加有效的干预措施。

关键词： 肝细胞癌   经肝动脉化疗栓塞术   酪氨酸激酶抑制剂   PD-1抑制剂  

摘要： 目的：系统评估经动脉化疗栓塞（TACE）和酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）联合（TT PD-1Ab）或不联合（TT）PD-1抑制剂治疗晚期肝细胞癌（aHCC）的疗效与潜在不良反应。方法：检索PubMed、中国知网（CNKI）、Embase、Web of Science等数据库，时限为各数据库建库始至2024年1月31日。由2位评价员独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后，采用Stata16.0软件进行Meta分析。结果：纳入17项研究，共2334名aHCC患者。Meta分析结果显示：①与TT疗法相比，PD-1抑制剂的加入显著改善了aHCC患者的总生存期（OS）[HR = 0.44，95% CI（0. 36，0.51），P <0. 00001]和无进展生存期（PFS）[HR = 0.47，95% CI（0. 42，0.52），P <0. 00001]，同时提高了aHCC患者的客观缓解率ORR[HR = 1.65，95% CI（1.46，1.86），P <0. 00001]和疾病控制率DCR [HR = 1.26，95% CI（1.15，1.38），P <0. 00001]；②不同基线资料如ECOG-PS、肝外转移与否、BCLC分期、肿瘤大小、Child-Pugh评分及肝门静脉侵犯与否等aHCC患者均可从TT PD-1Ab疗法中获益；③两治疗方案间全级别与≥3级不良事件（AEs）的总发生率无显著差异，但在高血压、甲状腺功能减退及反应性皮肤血管增生等症状在接受TT PD-1Ab治疗的患者中更为常见。结论：①相较于TT疗法，PD1抑制剂的加入可显著延长aHCC患者OS和PFS，并提高其整体ORR与DCR；②TT PD-1Ab治疗组患者发生所有级别及≥3级AEs的整体发生率没有显著增加，整体耐受性良好，但在在高血压、皮肤黏膜及甲状腺不良反应上有较高的发生率，应予以重视。

关键词： 乐果   C2C12   内质网应激   成肌分化  

摘要： 本试验用不同浓度（0、0.3、0.6、0.9 mmol/L）的乐果（DIM）处理C2C12细胞24 h，采用CCK-8检测细胞活力，光镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构，Western-blot检测Bip、PERK/eIF2α通路相关蛋白及成肌分化相关蛋白MyOD、MyOG、MyHC的表达水平。结果显示，与0 mmol/L组相比，0.3 mmol/L组的细胞活力、Bip及PERK/eIF2α 通路相关蛋白表达水平、成肌分化相关蛋白的蛋白表达水平均无显著差异。随DIM浓度升高，细胞活力极显著降低（P＜0.01）；细胞形态发生改变，死细胞增多，细胞超微结构受损明显；Bip及PERK/eIF2α通路相关蛋白表达水平显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）升高；成肌分化相关蛋白的表达水平显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）降低。添加PERK/eIF2α通路特异性抑制剂GSK2606414与DIM共处理，相关蛋白的表达水平被扭转。结果表明，DIM导致C2C12细胞内质网应激并激活了下游的PERK/eIF2α通路，且该通路介导了DIM致C2C12细胞成肌分化受损的过程。

关键词： 远志皂苷元   脂多糖   小胶质细胞   NLRP3炎性小体   炎症反应  

摘要： 目的 探究远志皂苷元（SEN）通过核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/NOD样受体蛋白3(NLRP3通路缓解小胶质细胞炎症反应的机制。方法 将BV2小鼠小胶质细胞随机分为对照组、模型组、SEN组和MCC950组。对照组细胞不做处理，模型组细胞加入1μg/ml脂多糖（LPS）,SEN组细胞加入1μg/ml LPS+4μmol/L SEN,MCC950组加入1μg/ml LPS+10μmol/L MCC950，作用24 h。采用CCK-8法检测不同浓度SEN对BV2细胞活力的影响。采用Griess法测定上清液一氧化氮（NO）释放量；实时荧光定量PCR法测定NLRP3、淋巴细胞凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1(caspase-1)、白细胞介素（IL）-1β和IL-18 mRNA的表达水平；免疫荧光染色法检测ASC、IL-1β、Nrf2和血红素加氧酶-1(HO-1)的表达水平；Western blotting检测NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18、Nrf2、HO-1及核因子κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达水平。结果 CCK-8法检测结果显示，2～20μmol/L SEN处理的BV2细胞活力与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较，模型组BV2细胞活力明显下降（P<0.05）；与模型组比较，4μmol/L SEN组BV2细胞活力明显恢复（P<0.05）。Griess法检测结果显示，与对照组比较，模型组细胞NO释放量明显增加（P<0.05）；实时荧光定量PCR结果显示，模型组细胞NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平均明显增高（P<0.05）;Western blotting检测结果显示，模型组细胞NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达水平明显增高（P<0.05）；免疫荧光染色结果显示，模型组细胞iNOS、NF-κB蛋白表达水平增高，Nrf2和HO-1表达水平下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，SEN组和MCC950组细胞NO释放减少，NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA和蛋白表达水平降低，差异均有统计学意义（P<0.05）;SEN组iNOS和NF-κB表达水平降低，免疫荧光染色显示Nrf2易位到核内，Nrf2和HO-1蛋白表达明显增多，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 SEN可缓解LPS诱导的小鼠小胶质细胞炎症反应，抑制NLRP3炎性小体的活化和表达，效果与炎性小体抑制剂MCC950相当；其机制可能与调控上游因子Nrf2和HO-1的表达有关。

关键词： 糖尿病   中国内脏脂肪指数   浦东新区   前瞻性队列研究   影响因素分析  

摘要： 背景 糖尿病仍是全球重大公共卫生问题，横断面研究发现内脏脂肪与糖尿病患病密切相关，但糖尿病发病时间趋势及与内脏脂肪关系（CVAI）的前瞻性队列研究较少。目的 通过前瞻性队列研究分析浦东新区居民糖尿病发病时间趋势及其与中国内脏脂肪指数的关系，为其科学防治提供依据。方法 本研究为前瞻性队列研究。选取2013年参与浦东新区慢性病危险因素监测项目的 12个乡镇街道、35个村居委的居民5 236人为研究队列。收集其基线资料，内容包括CVAI、内脏脂肪指数（VAI）、BMI、腰围（WC）、腰臀比（WHR）、腰高比（WHtR）、身体形态指数（ABSI）和身体肥胖指数（BAI），分别于2016年和2019年进行追踪随访；截至随访结束（2019年10月），通过问卷调查、实验室检查、医疗系统就诊信息和生命统计信息系统判断该研究队列糖尿病新发情况。依据基线CVAI、VAI、BMI、WC、WHR、WHtR、ABSI、BAI四分位数将纳入人群分别分为第Q1～Q4四分位数：CVAI各组例数依次为1 306、1 307、1 307、1 307例；VAI各组例数依次为1 300、1316、1 306、1 306例；BMI各组例数依次为1 305、1 302、1 312、1 311例；WC各组例数依次为1 302、1 273、1 287、1 367例；WHR各组例数依次为1 180、1 203、1 332、1 514例；WHtR各组例数依次为1 199、1 393、1 400、1 237例；ABSI各组例数依次为1316、1 302、1 302、1 308例；BAI各组例数依次为1 310、1 304、1 308、1 307例。采用多因素Cox回归分析CVAI和其他肥胖指标与糖尿病发病的关系；采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）比较CVAI与其他肥胖指标的预测作用。结果 浦东新区居民2013—2016年糖尿病发病密度33.55/1 000人年，2016—2019年糖尿病发病密度23.25/1 000人年，随着年龄的增长，糖尿病总发病密度呈现出升高趋势(2013—2016年：χ2=28.503,P趋势<0.001;2016—2019年：χ2=25.600,P趋势<0.001)。截止2016年，基线CVAI四分位数越高，糖尿病累积发病率(CVAI：χ2=131.865,P趋势<0.001)和发病密度(CVAI：χ2=100.105,P趋势<0.001)均越高。调整相关混杂因素后的多因素Cox回归分析结果显示，与CVAI处于Q1相比，CVAI处于Q4的男性糖尿病的发病风险增加79.4%（HR=1.794,95%CI=1.044～3.083,P<0.05），女性糖尿病的发病风险增加371.2%（HR=4.712,95%CI=2.601～8.538,P<0.05）。ROC曲线结果显示，在预测男性糖尿病发病情况中，CVAI对男性糖尿病预测的AUC为0.600（95%CI=0.561～0.640）)，识别男性糖尿病的约登指数为0.181，截断值为104.118;Delong检验结果显示，CVAI对女性糖尿病预测的准确性最高（AUC=0.699），且在识别女性糖尿病时有最大的约登指数值0.317，最佳截断值为104.609。结论 2013—2019年浦东新区居民糖尿病发病密度随年龄的增长呈升高趋势；且相较于其他肥胖指标，CVAI可作为预测糖尿病发病风险的指标。

关键词： γ-突触核蛋白   结肠癌   内质网应激   自噬   细胞凋亡  

摘要： 目的：研究γ-突触核蛋白（γ-synuclein）对内质网应激诱导的结肠癌细胞自噬和凋亡的影响及其细胞保护作用。方法：针对稳定表达γ-synuclein siRNA的人结肠癌HCT116细胞和空载体HCT116细胞，通过基因表达谱芯片分析γ-synuclein下游差异基因，找到可能的自噬及凋亡相关分子。用毒胡萝卜素（thapsigargin, TG）模拟内质网应激，采用Western blot检测γ-synuclein蛋白、自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3)、beclin-1、自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5, ATG5)和ATG7]及凋亡相关蛋白{多腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose) polymerase, PARP]、pro-caspase-3和pro-caspase-9}的表达，CCK-8法检测细胞活力，荧光显微镜观察吖啶橙染色的酸性囊泡细胞器和绿色荧光蛋白标记的LC3，检测人结肠癌HCT116和SW480细胞自噬、凋亡及活力的变化。分别采用γ-synuclein siRNA、细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase, ERK）抑制剂PD98059、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase, JNK）抑制剂SP600125和JNK激活剂anisomycin预处理，Western blot检测γ-synuclein及ERK和JNK信号通路相关蛋白表达，检测伴随的HCT116细胞自噬和凋亡的变化，研究γ-synuclein通过调控相关信号通路对细胞自噬的影响及其细胞保护作用。结果：TG模拟内质网应激诱导的结肠癌细胞自噬主要发生在早期（0～24 h），细胞凋亡主要发生在晚期（36～48 h）。内质网应激上调γ-synuclein的表达，并伴有自噬的增强。γ-synuclein早期（0～24 h）通过激活ERK和JNK通路促进自噬，晚期（36～48 h）通过抑制JNK通路抑制凋亡，从而起到保护细胞的作用。γ-synuclein可能在内质网应激诱导的细胞自噬和凋亡之间的过渡发挥一定的作用。结论：在内质网应激环境下，γ-synuclein通过调控ERK和JNK信号通路来促进自噬、抑制凋亡，发挥针对结肠癌细胞的保护作用，这为抗肿瘤治疗提供了一个潜在的思路。

关键词： 香连化浊方   加权基因共表达网络分析(WGCNA)   慢性萎缩性胃炎   增殖   细胞周期  

摘要： 目的：运用生物信息学技术和动物实验探究香连化浊方调节细胞周期抑制增殖治疗萎缩性胃炎（CAG）的潜在作用机制。方法：利用GEO数据库和GEO2R工具筛选出CAG差异基因，使用加权基因共表达网络分析（WGCNA）寻找CAG的核心基因（hub gene），与GeneCards数据库获得细胞周期-增殖相关基因取交集，并进行富集分析，得到与CAG相关的信号通路和生物过程。基于STRING数据库进行PPI网络的构建，寻找核心基因2.0（hub gene2.0），并进行动物实验验证。从70只雄性Wistar大鼠中随机抽取14只作为正常组，其余56只大鼠采用“饥饱失常+N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）+水杨酸钠”联合造模法制备CAG模型。将造模成功的大鼠随机分组，各组给予相应干预，疗程60 d。使用苏木精-伊红（HE）法观察大鼠胃黏膜组织病理学变化；透射电镜观察胃黏膜组织细胞超微结构，蛋白质印迹法（Western blot）检测胃黏膜组织中TGF-β1/Smads信号通路TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白，S/G2/M期标志物Geminin、增殖标志物Mcm2的蛋白相对表达量并进行spearman相关性分析。结果：最终得到包括TGF-β1在内的15个hub2.0基因，TGF-β1信号通路参与CAG发病。与正常组比较，模型组大鼠胃黏膜组织中TGF-β1、Smad2、Geminin、Mcm2蛋白表达升高（P<0.05），Smad3蛋白表达水平明显下降（P<0.05）；与模型组比较，各药物组胃黏膜组织中TGF-β1和geminin表达明显降低（P<0.05），香连化浊方中高剂量组和摩罗丹组Smad2、Mcm2蛋白表达水平明显下降（P<0.05），香连化浊中高剂量组和摩罗丹组Smad3蛋白表达水平明显上升（P<0.05）。spearman相关性分析表明smad3和其余指标均负相关，其余指标之间均正相关（P<0.01）。结论：香连化浊方可能通过抑制TGF-β1/Smads信号通路，调节细胞周期，抑制增殖治疗CAG。

关键词： 葛连调糖丸   糖尿病肾脏病   细胞焦亡   炎症反应   肾脏纤维化  

摘要： 目的：基于NOD样受体蛋白3（NLRP3）/半胱天蛋白酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）信号通路探讨葛连调糖丸对2型糖尿病db/db小鼠肾脏纤维化的干预作用。方法：将成模的40只db/db小鼠随机分为模型组、阳性对照组和葛连调糖丸高、中、低剂量组，每组8只。另取8只db/m小鼠作为正常组。正常组和模型组给予等体积纯水，中药高、中、低剂量组分别给予3.12 g·kg·d-1、1.56 g·kg·d-1和0.78 g·kg·d-1葛连调糖丸混悬液灌胃，阳性对照组给予1.3 mg·kg·d-1达格列净混悬液，各组小鼠每日灌胃1次，连续给药12周。每日观察小鼠一般情况；每4周检测小鼠空腹血糖及体质量，取材后称肾重，计算肾脏指数；全自动生化仪检测血清中TG、TC的表达水平，以及Scr、BUN的表达情况；用苏木精-伊红（HE）、过碘酸雪夫（PAS）和马松（Masson）染色法观察肾组织病理形态、细胞外基质沉积情况及纤维化程度；酶联免疫吸附法（ELISA）检测肾组织IL-1β、IL-18的含量；免疫组化法（IHC）检测肾组织Fibronectin、Collagen I的蛋白定位表达；蛋白质印迹法（Western blot）检测肾组织NLRP3、Caspase-1、cleaved-Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N的蛋白表达情况。结果：与正常组比较，模型组小鼠一般状态较差；体质量、肾重、肾脏指数、FBG、TG、TC、Scr、BUN表达水平明显升高（P<0.01）；肾小球固缩，基质增多，肾小管上皮细胞空泡样变性，间质伴有炎性细胞浸润（P<0.01）；肾组织IL-1β、IL-18水平均显著升高（P<0.01）；肾组织NLRP3、Caspase-1、cleaved-Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、Fibronectin、Collagen I蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）。经药物干预12周后，与模型组比较，各药物组体质量、肾重、肾脏指数、FBG、TG、TC、Scr、BUN表达水平及肾组织IL-1β、IL-18水平均降低（P<0.05，P<0.01），肾组织病变程度得到改善，且肾组织NLRP3、Caspase-1、cleaved-Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、Fibronectin、Collagen I蛋白表达水平均降低（P<0.05，P<0.01，P<0.01，P<0.01，P<0.01，P<0.05，P<0.01），以葛连调糖丸高剂量组效果最佳。结论：葛连调糖丸可能通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路，抑制细胞焦亡，减轻炎症反应，进而延缓糖尿病肾脏纤维化的疾病进程。

关键词： 甲状腺癌   中医药   PI3K/Akt信号通路   细胞增殖   细胞凋亡   侵袭转移   自噬  

摘要： 甲状腺癌是全球常见的内分泌恶性肿瘤，其发病率及死亡率逐年增高，且具有很强的隐匿性，在早期不易识别。磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路可以调控机体内细胞功能，包括细胞的生长、增殖、凋亡、侵袭，并参与肿瘤细胞恶性增殖、转移等过程。中医药通过调控PI3K/Akt通路，促使细胞周期停滞，诱导甲状腺癌细胞凋亡，从而抑制增殖、分化；通过抑制上皮间质转化，从而阻止甲状腺癌细胞侵袭转移；上调自噬相关蛋白的表达，促进甲状腺癌细胞自噬；纠正甲状腺癌糖代谢紊乱，抑制甲状腺癌的发生发展。通过检索近年来相关文献，就中医药基于PI3K/Akt通路治疗甲状腺癌的机制进行综述，以期为中医药临床治疗甲状腺癌提供参考建议。