关键词:
脉络膜新生血管
树鼩
动物模型
VEGF
PIGF-1
摘要:
一、研究目的:探讨利用激光诱导建立树鼩脉络膜新生血管动物模型的可行性、形态学和组织学变化。二、实验方法:,1.激光损伤动物模型制作选取成年健康树鼩25只(48只眼),分为6组,每组4只(8眼),第6组为空白对照组。空白对照组不做任何处理.模型建立的方法:树鼩腹腔内注射戊巴比妥钠麻醉后,复方托吡卡胺散瞳三次,盐酸奥布卡因眼表面麻醉,对试验1-5组进行氪红激光视网膜光凝,每眼距离视盘约1PD位置做8个光凝点,出现爆破音和视网膜上有水泡改变,证明Bruch膜成功受到破坏。2、建模成功的判定激光光凝术后有气泡形成,标志Bruch’s膜破裂,成为CNV形成的基础,以FFA出现荧光渗漏作为建模成功的评判标准。3、模型的组织学评价(1)FFA:分别于光凝后3、7、14、21、28d,行FFA检查。CNV判定取造影晚期像(FFA>5min)观察CNV形成渗漏情况。计算机图像分析系统计算每个时间点CNV的荧光素渗漏积分面积。(2)免疫组化检测包括:VEGF-A、PIGF、Ⅷ因子。4、统计分析经过统计分析,判断动物模型建立的成功率、临床表现和组织病理表现与人类疾病过程的相似程度,对激光诱导树鼩CNV模型建立进行总体评价。三、研究结果:1.在同一时间点早、中、晚期FFA荧光渗漏面积可看出中、晚期渗漏面积大于早期,p<0.05, FFA渗漏面积早、中、晚期渗漏面差异性,有统计学意义。在不同时间点FFA同一时期表现出7~14天为渗漏面积高峰时期,随着3天、7天、14天、21天、28天时间的增加,FFA渗漏面积增加,p<0.005, FFA渗漏面积在不同的时间点的差异,有统计学意义。2.树鼩生物学分类接近于灵长类,视网膜结构与人类非常相似,HE染色可见,空白对照组的正常树鼩视网膜、脉络膜各层组织结构清晰,完整,分为十层,从内到外依次为内界膜、神经纤维层、节细胞层,内从状层、内核层、外丛状层、外核层、外界膜、视锥视杆细胞层、色素上皮层。实验1-5组激光损伤后可见视网膜各层广泛的血管扩张和管腔内淤血。3.实验组与空白组激光光凝术后进行PIGF、VEGF-AⅧ因子染色比较:运用SPSS17.0软件,实验结果以均数±标准差表示,对实验组术后激光着色强度、着色面积、总分情况进行方差齐性检验,结果P<0.05。经t检验, 实验组与空白组经PIGF、VEGF-A染色,实验组与空白组相比较随着造模时间延长,表达显著增高,差异有统计学意义。(P<0.05)。Ⅷ因子染色,经t检验,实验组从第14天开始随着造模时间延长表达才出现增高,从第14天起实验组对照组差异有统计学意义。(P<0.05)。可认为在激光损伤树鼩视网膜后VEGF、 PIGF-1、Ⅷ因子表达显著增高。四、结论:1.氪红激光视网膜光凝术可诱导树鼩脉络膜新生血管的形成。2.病理切片HE染色结果仅显示视网膜节细胞层广泛血管扩张和管内淤血,未见机械损伤,未能显示脉络膜新生血管的生长,可能与病理切片取材部位不准确有关。3.在激光损伤树鼩视网膜后,视网膜新生血管生长的相关因子均出现阳性表达,且表达的强度随观察时间延长而增强,出现阳性表达的时间VEGF和PIGF-1为激光后第7天,Ⅷ因子为第14天。