关键词： 流式细胞术   生物素⁃蛋白   荧光素⁃亲和素   新型冠状病毒   抗原特异性B细胞  

摘要： 建立一种新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS⁃CoV⁃2)S1、S2、NTD蛋白特异性B细胞及其亚型的标记技术,该技术可通过与流式细胞术联用检测抗原特异性B细胞及其亚型含量,或与10×免疫组库联用对抗原特异性B细胞进行测序。首先,测试最佳蛋白使用浓度:将生物素标记的S1、S2和NTD蛋白按照600 nmol/L、1200 nmol/L、2400 nmol/L、3600 nmol/L和4800 nmol/L分别与荧光素⁃亲和素偶联,通过流式检测S1+CD19+B、S2+CD19+B、NTD+CD19+B细胞占比,确定不同蛋白对应的最佳使用浓度;进一步优化生物素⁃蛋白与荧光素⁃亲和素的比例:将检测生物素⁃蛋白与荧光⁃亲和素的摩尔比分别按照4∶1,5∶1和6∶1比例测试,对小鼠脾脏S1+CD19+B、S2+CD19+B、NTD+CD19+B细胞及S1+CD19+CD27+B、S2+CD19+CD27+B、NTD+CD19+CD27+B细胞的检测效果,优化荧光素⁃亲和素的最佳使用量;通过测试BV421、Super Bright 600、PE、PE/Cy7和APC等荧光对小鼠脾细胞的非特异结合能力,选择非特异结合较弱的荧光;根据筛选的荧光,给生物素化的S1、S2和NTD均标记PE和APC荧光,建立检测这3个蛋白特异性B细胞和记忆B细胞的方法,并测试带核酸序列的荧光素⁃亲和素对B细胞和记忆B细胞的检测效果,测试该方法的稳定性。S1、S2和NTD蛋白浓度分别为4800 nmol/L、3600 nmol/L和3600 nmol/L时,对B细胞的检测效果最佳,且对阴性小鼠的染色效果较低;生物素⁃S1蛋白与荧光素⁃亲和素的最佳摩尔比为6∶1时,检测结果最佳;生物素⁃S2蛋白、生物素⁃NTD蛋白与荧光素⁃亲和素均在4:1时,检测结果最佳,且在该浓度下BV421、APC、Super Bright 600、PE与细胞的非特异结合较弱;建立了一种检测SARS⁃CoV⁃2 S1、S2和NTD抗原特异性B细胞及记忆B细胞的方法,通过对一批样本的重复3次检测,发现该方法较为稳定,CV值≤20%。通过抗原特异性B细胞标记技术,实现了对SARS⁃CoV⁃2 S1、S2和NTD蛋白特异性B细胞及其亚型标记技术方法,并且具有良好的适用性,可用于与流式细胞术检测抗原特异性B细胞及记忆B细胞和10×免疫组库测序联合使用。

关键词： 新型冠状病毒   奥密克戎感染   瘟疫  

摘要： 新型冠状病毒奥密克戎感染属中医“瘟疫”范畴。该病内因是正气亏虚,外因是湿、毒、热、瘀阻肺。该病病机复杂,传变迅速,适合大方复治,轻型治疗以表里双解、扶正败毒为主,发展到普通型,出现病毒性肺炎时,治以清热解毒、补肺宣肺。该文主要介绍新型冠状病毒奥密克戎感染的中医药治疗体会,并介绍典型病案1则。

关键词： 灭活疫苗   生物制品研究所   接种时间   斑丘疹   注射部位   左上臂   玫瑰糠疹  

摘要： 患者女,38岁,因周身红斑、丘疹、斑丘疹、脱屑伴瘙痒9 d于2021年3月26日就诊。患者9天前注射2019新型冠状病毒灭活疫苗(生产企业:北京生物制品研究所有限责任公司;批号202012332)第2剂(第1剂接种时间2021年3月1日,两剂间隔15 d)10 h后于左上臂注射部位出现红斑、丘疹、斑丘疹。

关键词： 新型冠状病毒   儿童   中医证候  

摘要： 目的分析新型冠状病毒(SARS-CoV-2,简称“新冠病毒”)感染儿童的中医证候特征,为临床辨证施治提供参考。方法运用描述性研究方法,观察北京中医药大学厦门医院发热门诊、急诊治疗的110例新冠病毒感染患儿的一般信息、中医证候及血常规特征。结果110例新冠病毒感染患儿中男61例,女49例;临床分型中轻型94例,普通型16例;年龄最小17 d,最大13岁9个月,平均(7.30±4.96)岁;轻型与普通型患儿年龄及性别分布比较,差异无统计学意义(P>0.05);轻型与普通型患儿的血常规各项指标比较,差异无统计学意义(P>0.05);多表现为鼻塞、流涕、咽痛、咳嗽等肺系症状,发热、乏力、肌肉疼痛、头痛等外邪束表症状,恶心、呕吐、腹泻、便秘、腹痛等脾胃症状;舌质以淡红、红居多,舌苔以薄白微腻、白腻、薄黄微腻、黄腻多见;临床证候以湿热蕴肺证多见,寒湿郁肺证及疫毒袭表证次之,较为特殊的是9例热盛动风证,表现为惊厥,占比为8.18%。结论新冠病毒感染患儿临床分型大部分为轻症,临床表现以表证、肺系及脾胃症状为主,惊厥发生率偏高,证候要素责之于疠气、寒、热、湿,辨证分型主要为疫毒袭表证、湿热蕴肺证、寒湿郁肺证、热盛动风证。

关键词： 病毒与人   课程思政   新型冠状病毒  

摘要： 思政教育应贯穿于大学生教育的始终。针对“病毒与人”这门基础通识课程,运用“问题导向”,传统经典案例与时下“新鲜”案例结合以及“以赛促学”等教学方法,让学生在学习专业知识的同时,了解人类在抗争病毒过程中的顽强生命力,帮助学生建立融会贯通的全景知识体系,提高学生的综合素养,凸显当代年轻人的使命与担当,提升思政教学质量。此外,将“绿色生态”、“抗疫精神”等思政元素纳入教学设计,使学生充分理解病毒与人的密切关系,从而做到尊重自然,敬畏自然,与自然和谐相处,发扬“抗疫精神”,甘于奉献,砥砺前行,勇担时代责任和历史使命,做有远大理想、家国情怀的中国人。

关键词： 肝硬化   新型冠状病毒感染   治疗  

摘要： 由新型冠状病毒(新冠病毒)引发的新冠病毒感染(COVID-19)至今仍呈全球流行,虽然其对人类的威胁在逐渐减弱,但老年人、免疫功能缺陷人群以及伴有严重基础疾病患者的重症率、病死率仍高于一般人群。肝硬化是一种进展期慢性肝病,全球共有1.12亿例患者,每年约200万例死于失代偿并发症及肝细胞癌[1],造成了沉重的健康和经济负担。肝硬化患者因存在免疫功能障碍,感染新冠病毒后将加快患者肝硬化病程,促进急性失代偿事件的发生[2]。尽管对COVID-19的认识不断增加,但有关肝硬化合并COVID-19这一特殊人群的具体管理流程仍在不断探索和优化中。因此,本文就肝硬化患者合并COVID-19的流行病学、发病机制、高危因素及预后评估、临床特点、治疗及疫苗预防的进展展开综述。

关键词： 新型冠状病毒   mRNA疫苗   交叉中和活性   氨基酸突变  

摘要： 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)在感染和持续性进化过程中不断发生变异,导致现有疫苗的有效性降低,因此人类迫切需要能够建立广谱免疫保护的有效疫苗.作者采用mRNA疫苗技术,设计了原型(Prototype)株刺突(Spike,S)蛋白mRNA疫苗(P0).在S蛋白基因序列中引入氨基酸突变位点,制备了Prototype-mut mRNA疫苗P1~P7,并对小鼠进行了免疫.结果表明,引入Q498R-Y505H-H655Y和Q498R-N501Y突变位点的S蛋白mRNA疫苗可以显著提升对Delta株的中和抗体(neutralizing antibody,NAb)滴度(P<0.05).引入Q493R-Q498R-H655Y和Q498R-N501Y突变疫苗对Prototype、Alpha、Beta、Delta、Omicron BA.1等多个毒株的几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为1∶194.0、1∶73.5、1∶32.0、1∶194.0、1∶16.0和1∶294.1、1∶294.1、1∶64.0、1∶256.0、1∶8.0.同时,引入Q493R-Q498R-H655Y、Q498R-Y505H和Q498R-Y505H-H655Y等突变疫苗对Prototype、Alpha、Beta、Delta 4种毒株的中和抗体阳转率可达到100%.通过在S蛋白mRNA疫苗中引入点突变的策略,验证了可能具有免疫逃逸或改变受体结合亲和力潜力的氨基酸突变位点的引入对mRNA疫苗交叉中和活性的影响,这为提升mRNA疫苗广谱性的研发提供了参考.

关键词： 变异体XBB.1.5,新型冠状病毒   S蛋白   受体结合区域   分子对接   虚拟筛选  

摘要： 目的利用虚拟筛选技术筛选出可抑制新冠病毒变异体XBB.1.5 S蛋白受体结合区域(RBD蛋白)与血管紧张素转化酶2(ACE2)结合的小分子抑制剂,从而阻断新冠病毒对宿主的识别。方法在Mcule小分子数据库中下载486387个配体小分子。使用Jarvis-Patrick聚类后采用AutoDock Vina软件进行基于质心的分子对接。结果确定了XBB.1.5 RBD蛋白与ACE2相互作用的关键氨基酸残基,深入分析了5个候选物小分子与XBB.1.5 RBD蛋白的结合模式,化合物1与XBB.1.5 RBD蛋白的TYR489和SER490残基形成π-π堆积和氢键相互作用;化合物2与TYR449、SER494和TYR501通过氢键和π-π堆积结合;化合物3主要与TYR451形成氢键;化合物4与TYR427通过π-π堆积结合;化合物5则与ARG381、GLN387和ASN395残基形成π-阳离子堆积和氢键。上述相互作用均干扰了XBB.1.5 RBD与ACE2的结合,起到抑制作用。通过ADMET模拟分析,预测了候选化合物的生物利用度、遗传毒性和致癌性,最终得到了潜在的抑制剂分子。结论从数据库中筛选出潜在的新型冠状病毒变异体XBB.1.5 RBD蛋白的小分子结构,进而阻断S蛋白与ACE2之间的结合,为抗新型冠状病毒药物研究及处方筛选提供参考。

关键词： 新型冠状病毒感染   重症   危险因素   胸部CT影像  

摘要： 目的分析重症新型冠状病毒感染(COVID-19)的危险因素及胸部CT影像变化特点。方法选取2021年12月21日至2022年1月31日在西安市定点医院ICU治疗的新型冠状病毒感染病人40例,分为普通组22例和重症组18例,回顾两组病人一般资料、血常规、并发症和胸部CT影像特点及演变情况,并应用多因素logistic回归分析重症新型冠状病毒感染的危险因素。结果与普通组相比,重症组病人年龄更高[67.50(64.0,80.0)岁比60.5(43.0,66.0)岁],疫苗接种剂量更少,发病至入院时间更长[3(2,5)d比2(1,3)d]、入院至肺部病灶明显进展时间更短[(4.44±2.28)d比(6.59±1.97)d],入院1周时淋巴细胞比率(LY%)更低[(12.26±7.33)%比(18.49±5.72)%],并发症更多(尤其肝功能损害、低蛋白血症、D-二聚体升高及电解质紊乱),差异有统计学意义(P<0.05)。重症组胸部CT更易出现病变分布为始发灶累及更多肺叶,尤其波及左肺上叶、右肺上叶和右肺中叶,及存在非胸膜下病灶;病变特点为肺实变和支气管充气征,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,入院至肺部病灶明显进展时间、始发灶累及肺叶数和并发症个数与重型新型冠状病毒感染明显相关(P<0.05)。结论始发灶累及肺叶数和并发症个数与COVID-19的严重程度呈正相关,入院至肺部病灶明显进展时间与COVID-19的严重程度呈负相关。

关键词： 新型冠状病毒感染   炎症   营养评价   预后  

摘要： 目的探究外周血中营养及炎症相关指标对新型冠状病毒感染患者预后的影响。方法回顾性分析2022年11月—2023年2月就诊于徐州医科大学附属医院的新型冠状病毒感染患者1351例,根据随访3个月的预后情况分为预后良好组(治愈或好转,1091例)和预后不良组(放弃治疗或死亡,260例)。收集所有患者的一般临床资料、BMI、血清学营养及炎症指标等,计算并比较2组患者炎症、营养相关指标及复合指标。结果预后不良组患者的年龄、合并脑血管病、合并糖尿病、中性粒细胞计数、系统性免疫性炎症指数(SII)均高于预后良好组(P<0.01),预后不良组BMI、淋巴细胞计数、白蛋白水平、血小板计数、晚期肺癌炎症指数(ALI)、预后营养指数(PNI)低于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,高龄是新型冠状病毒感染患者预后的独立危险因素(P<0.05),高ALI、高PNI均是新型冠状病毒感染患者预后的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,中性粒细胞、淋巴细胞、白蛋白、血小板的AUC分别为0.707(95%CI:0.672~0.742,P<0.001)、0.728(95%CI:0.694~0.762,P<0.001)、0.720(95%CI:0.686~0.753,P<0.001)、0.645(95%CI:0.607~0.684,P<0.001);复合指标ALI、PNI的AUC分别为0.783(95%CI:0.744~0.821,P<0.001)、0.744(95%CI:0.705~0.782,P<0.001)。复合指标的曲线下面积更大,即复合指标的预测价值更高。结论血清学营养及炎症指标与新型冠状病毒感染患者预后相关,复合指标如ALI、PNI可以作为预后不良的预测指标,且预测价值更高。