关键词： 地中海贫血   肝脏   胰腺   铁定量   磁共振铁定量技术  

摘要： 【目的】　　探讨1.5T场强下不同平台磁共振铁定量技术非对称回波最小二乘估算法迭代水脂分离序列(Iterativedecompositionofwaterandfatwithechoasymmetryandleast-squaresestimationquantitationsequence,IDEAL-IQ)和魔镜成像(mDixonQuant)序列对地中海贫血患者肝脏、胰腺铁沉积评估的差异。　　【方法】　　前瞻性收集地中海贫血患者57名（男性34例，女性23例）并记录相关临床资料。每位患者均在同一天上午接受不同平台IDEAL-IQ和mDixonQuant两种序列的扫描，图像经各自平台的后处理软件自动重建出R2*图。在两个平台的后处理工作站上，由两名主治医师将感兴趣区域放置在两套R2*图肝脏Couinaud分法的8个分段和胰腺的头、体、尾部的同一区域中，取8个肝段和胰腺3部位的平均值分别代表全肝和全胰腺的最终R2*值。按照血清铁蛋白水平，将血清铁蛋白≤3000ng/mL的患者纳入A组（n=22），血清铁蛋白＞3000ng/mL的患者纳入B组（n=35）。使用统计学软件SPSS25.0版本对得到的2508个ROIs进行分析，采用组内相关系数评价两名主治医师所测得R2*值的一致性;采用Wilcoxon符号秩检验比较IDEAL-IQ和mDixonQuant序列在A组和B组中测得肝脏和胰腺R2*值的差异。　　【结果】　　1．两名主治医师在IDEAL-IQ序列上测得的肝脏R2*值分别为480.08Hz(312.22~549.57)Hz和438.90Hz(290.79~529.65)Hz，ICC值为0.982;胰腺R2*值分别为89.08Hz(25.96~222.29)Hz和91.71Hz(26.48~220.73)Hz，ICC值为0.997。两名主治医师在mDixonQuant序列上测得的肝脏R2*值分别为591.87Hz(306.58~739.52)Hz和613.75Hz(325.99~759.85)Hz，ICC值为0.994;胰腺R2*值分别为88.45Hz(26.08~213.44)Hz,和84.41Hz(25.27~197.98)Hz，ICC值为0.997。　　***-IQ和mDixonQuant两种序列在A组肝脏R2*值分别为300.61Hz(204.68~504.21)Hz和298.65Hz(177.82~568.80)Hz，统计学上没有显著性差异（P＞0.05）;在B组肝脏R2*值分别为473.94Hz(431.72~555.76)Hz和721.63Hz(576.55~771.66)Hz，统计学上具有显著性差异（P＜0.05）。IDEAL-IQ和mDixonQuant两种序列在A组胰腺R2*值分别为26.22Hz(21.94~53.11)Hz和25.80Hz(20.18~49.99)Hz，统计学上没有显著性差异（P＞0.05）;在B组胰腺R2*值分别为148.03Hz(89.49~312.27)Hz和142.71Hz(78.17~291.06)Hz，统计学上没有显著性差异（P＞0.05）。　　【结论】　　1．1.5T场强下，IDEAL-IQ和mDixonQuant序列对地中海贫血患者肝脏、胰腺铁定量具有高度一致性，有助于地贫患者铁过载的诊断随访以及临床治疗方案的选择和调整，证明其在多中心研究中的潜力。　　2．在血清铁蛋白超过3000ng/mL时，建议此类地中海贫血患者使用同一种技术进行诊断随访。　　***-IQ和mDixonQuant技术在观察者之间具有较高的可重复性，证实R2*是一种准确而可靠的铁定量无创性生物标志物。

关键词： 胚胎植入前遗传学检测   地中海贫血   单基因病   单核苷酸多态性   抗缪勒管激素   窦卵泡数目   获卵数   胚胎植入前遗传学检测   地中海贫血   单核苷酸多态性  

摘要： 第一部分胚胎样本中不同地贫基因型捕获深度比值参考范围的探讨研究目的探讨活检胚胎样本中不同地贫基因型捕获深度比值的参考范围,寻找参考胚。研究方法纳入自2019年8月至2021年11月因夫妻双方地贫携带就诊于广州医科大学附属第三医院（以下简称广医三院）生殖中心行PGT的家系。依据该家系活检胚胎的地贫基因型将其分为3个组:(αα/--)组、无突变组、(--/--)组。选取胚胎植入前单基因遗传病检测panel中16号染色体SNP数据,计算目标区域（致病基因区域）与非目标区域的平均测序深度比值为捕获深度比值,比对各组胚胎地贫基因型与捕获深度比值之间的关系,建立胚胎样本中不同地贫基因型的捕获深度比值参考范围。数据应用统计学软件SPSS25.0分析,利用Kolmogorov-Smirnov对数据进行正态性检验,符合正态分布,可用均数和标准差衡量,不符合正态分布,则需用中位数及四分位数来衡量或将数据进行变量转换,若变换后的数据符合正态分布,也可用均数和标准差衡量。研究结果1.在(αα/--)组捕获深度比值的统计分析中,其显著水平Sig<0.05,数据不符合正态分布,其偏度值（1.414）为标准差（0.2452）的3倍以上,呈中度的正偏态分布,对数据取对数（ln）转换,转换后的数据显著水平Sig>0.05,符合正态分布,可用均数（-0.9280）和标准差（0.5379）衡量。估计(αα/--)组捕获深度比值对数转换后95%参考范围为（-1.9823,0.1262）,则估计原数据95%参考范围为（0.1378,1.1345）。2.在无突变组捕获深度比值的统计分析中,其Sig>0.05,符合正态分布,可用均数（0.7213）和标准差（0.2468）衡量。估计无突变组捕获深度比值95%参考范围为（0.2376,1.2049）。3.(--/--)组捕获深度比值均小于0.01。研究结论1.(αα/--)组和无突变组的捕获深度比值95%参考范围间重叠区域大,捕获深度比值无法预测基因型为(αα/--)或无突变的胚胎作为参考胚用于构建夫妻双方单倍型,用于胚胎致病性的检测。2.(--/--)组与(αα/--)组和无突变组的捕获深度比值间无重叠,捕获深度比值可以预测基因型为(--/--)的胚胎作为参考胚用于构建夫妻双方单倍型,用于胚胎致病性的检测。第二部分影响获得参考胚的临床因素研究研究目的探讨参考胚与受试者活检胚胎数之间的关系及影响受试者术中获卵数的相关因素。研究方法纳入自2019年8月至2023年2月因夫妻双方地贫携带就诊于广医三院生殖中心行PGT的家系。按照受试者可供活检胚胎中是否含参考胚(--/--)将家系分为2组:含参考胚组、不含参考胚组,探讨参考胚与受试者活检胚胎数之间的关系。数据应用统计学软件SPSS25.0进行统计分析,使用简单线性回归模型分析活检胚胎数与不含参考胚家系数间的相关性,P<0.05认为差异有统计学意义。依据术中获卵数的第25百分位数和第75百分位数将周期获卵数分成三组:≤8组,9～20组,≥21组。利用Kolmogorov-Smirnov对数据进行正态性检验,符合正态分布用均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析,不符合正态分布用中位数（第25百分位数,第75百分位数）表示,组间比较采用非参数Kruskal-wallis H检验。计数资料采用频数、百分率或构成比（%）进行描述。使用多元logistic回归分析影响术中获卵数的因素,包括年龄、AMH、AFC、BMI及FSH,并评估影响因素的比值比（OR）和95%置信区间。采用ROC曲线参考胚的临床影响因素进行数据管理与分析。同时,对不同促排卵方案下的获卵情况进行方差分析,计量资料以均数±标准差表示。统计学处理采用SPSS25.0软件,P<0.05认为差异有统计学意义。研究结果1.活检胚胎数与不含参考胚家系数间呈显著负相关且具有统计学意义（r=-0.810,P<0.001）。当可供活检胚胎数≥4时,有83.1%的几率可以找到参考胚,获得参考胚的几率随可供活检胚胎数的增加而增加。2.获卵数与活检胚胎数间呈显著正相关且具有统计学意义（r=0.233,P<0.001）。3.三组患者在年龄、BMI及FSH差异均无统计学意义（P均>0.05）,在AMH、AFC间差异均有统计学意义（P均<0.05）。4.在获卵数≤8组与≥21组的比较中,AMH、AFC是显著影响因素（P均<0.05）;在获卵数9～20组与≥21组的比较中,AMH是显著影响因素（P<0.05）;在获卵数9-20组与≤8组的比较中,AFC是显著影响因素（P<0.05）。***是影响获卵数的独立因素（P≤8/≥21=0.001,P9-20/≥21=0.02）,AFC也是影响获卵数的独立因素（P≤8/≥21=0.001,P≤8/9-2

关键词： 重型β-地中海贫血   患儿   心理行为问题   质性研究   量性研究   影响因素  

摘要： 目的:本研究采用半结构式深入访谈与横断面研究相结合,探讨桂西地区重型β-地中海贫血(Beta-Thalassemia Major,β-TM)患儿心理行为问题及其影响因素,旨在为患儿制定科学合理的早期心理行为干预提供参考依据。方法:(1)第一部分:质性研究法,采用目的抽样法选取2021年5月～2021年7月,在广西百色市某三甲医院进行治疗的14名β-TM患儿父母作为研究对象,开展一对一半结构式深入访谈,应用Colaizzi的现象学分析法进行资料整理分析,从父母的角度探讨β-TM患儿心理行为问题现状。(2)第二部分:横断面研究方法,采用整群抽样法选取2021年8月～2022年8月,在百色市3家三级甲等医院住院治疗、符合纳入及排除标准的240名β-TM患儿父母为研究对象进行调查。采用一般资料调查问卷、conners父母用症状问卷(Parent Symptom Questionnaire,PSQ)、焦虑自评量表(Self-rating Anxiety Scale,SAS)、抑郁自评量表(Self-rating Depression Scale,SDS)、简易应对方式问卷(Simplified Coping Style Questionnaire,SCSQ)、父母教养方式量表父母版(Egna Minnen Betrafande Uppfostran-Parents,EMBU-P)分别调查患儿及父母一般人口学资料,患儿心理行为问题,父母负性情绪、应对方式、教养方式,以上问卷均由患儿父母填写。采用SPSS 24.0对调查所得数据资料进行统计描述、单因素分析、相关分析、多因素回归分析,以α=0.05为检验水准。结果:(1)质性研究结果,父母对β-TM患儿心理行为问题现状描述总结出3个主题:(1)β-TM患儿存在明显心理行为问题;(2)父母担心患儿身心健康及未来发展;(3)期望获得更多医疗与社会支持。(2)量性研究结果:(1)描述统计分析显示:β-TM患儿心理行为问题总得分为53.84±10.34分,有30.00%患儿被检出存在心理行为问题。β-TM患儿父母焦虑检出率55.00%,抑郁检出率47.92%。β-TM患儿父母消极应对占比29.58%。β-TM患儿父母教养方式的拒绝、情感温暖、过分保护三个维度占比分别为26.25%、35.42%、38.33%。(2)单因素分析结果显示,患儿性别、年龄、是否是独生子女、确诊后是否立即治疗、是否规律除铁、是否觉得影响学业、父母受教育程度、家庭情况、家庭收入、疾病经济负担重的β-TM患儿的心理行为问题差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)相关分析表明:β-TM患儿的心理行为问题与父母焦虑、抑郁、拒绝、过分保护的教养方式、消极应对方式呈正相关(r=0.629、0.836、0.770、0.517、0.504,P<0.05)、与父母积极的应对方式、情感温暖的教养方式呈负相关(r=-0.689、r=-0.503,P<0.05)。(4)多因素Logistic回归分析显示:患儿性别、年龄、家庭情况、是否规律除铁、母亲受教育水平、家庭经济水平、疾病经济负担、父母焦虑、抑郁、应对方式、教养方式共11个因素是桂西地区β-TM患儿心理行为问题发生的主要影响因素。结论:(1)质性与量性研究结果均表明桂西地区β-TM患儿心理行为问题均较为突出,检出率较高,急需解决。(2)桂西地区β-TM患儿心理行为问题与父母焦虑、抑郁、应对方式及教养方式密切相关。(3)桂西地区β-TM患儿心理行为问题受患儿性别、年龄、未规律除铁、家庭情况、母亲受教育水平、家庭经济水平、疾病经济负担、父母焦虑、抑郁、应对方式及教养方式因素影响。

关键词： 地中海贫血   血红蛋白   产前诊断   木签电喷雾电离   质谱技术  

摘要： 背景与目的:地中海贫血是人类最常见的以血红蛋白合成障碍为主的遗传性溶血性贫血,是引起胎儿出生缺陷、围产儿死亡、孕产妇死亡的原因之一。地中海贫血遍布全球100多个国家和地区,尤以地中海沿岸国家和东南亚各国多见,我国南方发病率较高。地中海贫血属于单基因隐性遗传病,其分子基础是珠蛋白基因(主要为α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因)缺陷导致相应珠蛋白肽链合成障碍,使形成血红蛋白四聚体的类α-珠蛋白链/类β-珠蛋白链比例失衡,进而引起红细胞破坏而溶血。绝大部分地中海贫血基因携带者没有明显的临床症状,其智力、寿命、生长发育等和正常人没有明显区别,亦不需治疗,因此常被人们忽视,但如果夫妇双方携带有同型地贫基因,就有可能生出重型或中间型的地中海贫血小孩。因该病目前尚无理想的治疗方法,预防是最有效的措施,其方法是筛查出高危夫妇,尽早对高危孕妇进行产前诊断,避免重型及中间型地中海贫血胎儿出生,同时也可预防孕产妇严重并发症。血常规检测和血红蛋白电泳是目前临床上常用地中海贫血一线筛查方法,MCV,MCH及Hb A2等血液学参数作为最常用的筛查指标,不仅受缺铁性贫血、叶酸缺乏影响,也会受到储存过程中全血样品溶血和降解的影响,存在漏诊的风险。为探索更经济有效的地中海贫血筛查方法,本课题首次将木签电喷雾电离直接质谱法创新性的应用在地贫筛查当中。木签电喷雾电离直接质谱法是一种经济便捷、高灵敏度、高特异性的质谱分析方法,它可用于复杂样品中目标分析物的定量,只需少量样品制备,无需色谱分离,其分析能力、准确度、精密度、灵敏度均比较高,可用于检测未处理生物样品的蛋白质结构表征。将木签电喷雾电离直接质谱应用到地中海贫血的筛查当中,不再依赖于血红蛋白四聚体结构的完整性,可直接检测α-与β-珠蛋白肽链,同时无需复杂、耗时的样本预处理过程,通过低成本的木签尖端直接取样分析,是对探索一种经济便捷、直接准确的地贫筛查方法进行的全新尝试。同时,本课题拟从地中海贫血的一、二级预防角度出发,对来我院就诊的育龄人群进行地中海贫血携带者筛查,分析育龄人群中地中海贫血基因的携带情况及我省常见地中海贫血基因突变类型,找出高风险夫妇并对高危孕妇行产前诊断,避免重型及中间型地中海贫血胎儿出生。实验方法:1、收集健康血液样本(非地中海贫血基因携带者),通过基因检测确诊的α-地中海贫血基因携带者血液样本及β-地中海贫血基因携带者血液样本;将收集的血液样本分别行木签电喷雾电离直接质谱技术,分析在不同电荷状态下α-地中海贫血及β-地中海贫血与健康对照样本α-链和β-链的信号比。2、对15万来我院就诊的育龄人群行血常规及血红蛋白电泳分析筛查地中海贫血,筛查出的高风险人群进一步通过导流杂交技术对地中海贫血基因进行检测;当地中海贫血筛查存在异常血红蛋白带,或常规地贫基因检测结果与表型明显不符时,为明确是否携带罕见变异,进一步行高通量测序检测;分析这15万育龄人群地中海贫血基因携带率、基因型分布特点及本省特有的基因突变情况。3、找出地中海贫血携带高风险孕妇(即夫妇均为相同类型地中海贫血携带者,有生育中重度地中海贫血患儿的概率);对高风险孕妇行介入性产前诊断(孕早期行绒毛活检,孕中期行羊膜腔穿刺,孕中晚期行脐静脉穿刺)获取胎儿样本;根据夫妇携带的地中海贫血基因型对获取的胎儿样本行相应的地中海贫血基因诊断;根据地中海贫血产前诊断基因结果,为孕妇及家属提供详细的遗传咨询;随访孕妇的妊娠结局及新生儿预后。结果:1、在不进行样品预处理的情况下,木签电喷雾电离质谱技术可以通过蛋白质离子峰值比值直接从原始血液样本中检测血红蛋白含量。2、木签电喷雾电离质谱技术在+11电荷及+12电荷状态时,α-地中海贫血和β-地中海贫血与健康对照样品α-链和β-链的信号比均无显著差异。3、木签电喷雾电离质谱技术在带电状态为+13时,α-地中海贫血与健康对照样本之间α-链和β-链的信号比没有显著差异,但β-地中海贫血与健康对照样本之间α-链和β-链的信号比存在显著差异。4、2012年1月至2021年12月在江西省妇幼保健院接受常规检查的育龄人群155353例,14959例行α-地中海贫血基因检测,11470例行β-地中海贫血基因检测,检出α-地中海贫血携带者2784例,携带率为1.79%;β-地中海贫血携带者2729例,携带率为1.76%;α复合β-地中海贫血携带者125例,携带率为0.08%;罕见地中海贫血携带者82例,携带率为0.05%;总携带率为3.68%。5、14959例行α-地中海贫血基因检测,检出12种常见α-地中海贫血基因型,共计2784例;以缺失型为主,缺失型以αα/--SEA最多,其次是αα/-α3.7及αα/-α4.2,突变型的α-地中海贫血以αα/αα为主。6、11470例行β-地中海贫血基因检测,共检出14种常见点突变型β-

关键词： 地中海贫血   输血依赖型   诊疗   疾病负担   回顾性研究  

摘要： 目的:了解输血依赖型地中海贫血患者的基本情况、生长发育、实验室检查、诊疗及疾病负担情况,为临床规范化治疗提供参考,为国家医疗保障和救治政策提供依据及建议。方法:通过病例报告量表收集并回顾性分析2011-10-30至2021-10-30就诊于遵义医科大学附属医院的输血依赖型地中海贫血患者10年间住院及门诊诊疗的全部临床资料,并通过问卷调查了解患者的个人、家庭及疾病负担等情况。所有资料均采用SPSS18.0、Graph Pad prism9.2.0软件分析。Kolmogorov-Smirnov test检验正态性。计量资料符合正态分布以均数±标准差(x±s)描述,组间采用独立样本t检验;不符合正态分布以M(P25,P75)表示,多组间比较采用Kruskal Wallis H检验,组间两两比较采用Bonferroni检验;非正态分布以中位数和四分位间距M(P25,P75)描述,组间采用Mann-Whitney U检验。计数资料以n(%)表示,组间对比采用χ检验。以双侧检验、P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1.112例输血依赖型地贫患者中,重型β地贫82例(73.21%),中间型β地贫3例(2.68%),中间型α地贫14例(12.51%),重型血红蛋白病13例(11.61%);β地贫基因型以CD17/CD17及CD41-42/CD41-42基因型最为常见,各占21.8%,其次为CD17/CD41-42、CD17/IVS-II-654,各占10.9%,α地贫基因型以-α/--最常见,其次为αHb Constant Springα/--SEA、αα/--SEA;2.本研究中,患者的中位年龄为7岁,正常上学患儿的比例为81.13%;与正常同龄儿相比,输血依赖型地贫患儿的生长发育落后于正常同龄儿,差异具有统计学意义;其父母学历及家庭收入普遍较低,父母职业以务农、自由职业及无业为主;患者家庭年总收入普遍偏低,其中收入在5万以下的家庭占73.44%,超过80%的家庭存在负债情况;***患者临床表现以肝脾肿大为主,本次研究中TDT患者肝脏肿大35例,占31.25%,脾脏肿大59例,占52.96%,肝脾均肿大患者35例,占31.25%,近1/3的患者存在肝脏肿大,存在肝脏肿大的患者均合并脾大;4.输血依赖型地贫患者血红蛋白高于90g/L以上输血的占42.1%,低于90g/L以下的比例为57.9%,低于60g/L输血的占6.9%。随着年龄的增长,血红蛋白维持水平逐年下降,P<0.05;铁过载的比例为77.19%,重度铁过载为14.51%,其中3岁以上的患者铁过载及重度铁过载比例明显高于3岁以下的患者,P<0.05;5.输血依赖型β-地贫患者的白细胞计数及血清铁蛋白水平均高于α地贫患者,P<0.05;在输血依赖型β地贫患者中,血红蛋白低于90 g/L以下的患者总胆红素及肌酐水平显著高于血红蛋白维高于90 g/L以上的患者,P<0.05;6.通过调查随访,本研究中患者规律输血治疗的比例占86.05%,未规律输血治疗的占13.95%,其主要原因以经济困难及血资源紧张为主,其中经济困难占50%,血源紧张占33.33%;规律祛铁治疗的患者比例占83.33%,未规律祛铁治疗的占16.67%,其主要原因以患儿依从性差及经济困难为主,其中患儿依从性差占42.86%,经济困难占28.57%;7.112例输血依赖型地贫患者中,造血干细胞移植患者23例,其骨髓来源以非同胞全相合为主,占14例(60.87%),未接受造血干细胞移植的原因主要为配型困难,占59.52%。23例移植病例中,22例(95.65%)患者生存状态可,1例(4.35%)患者死亡,死亡原因为院外移植排斥反应;8.输血依赖型地贫患者每年常规治疗总费用约为3.06万元,其中输血治疗相关费用为1.80万元,祛铁治疗费用为0.66万元,交通及住宿费用为0.60万元;β地贫患者的年均住院治疗费用为1.85万元,α地贫患者年均住院治疗费用为0.95万元,β地贫患者年均住院治疗费用显著高于α地贫患者,P<0.05;规律输血及祛铁治疗的患者中,其治疗费用与血红蛋白的维持水平差异无统计学意义。结论:1.本中心输血依赖型地贫患者中位年龄为7岁,学龄儿童中大部分患儿能正常上学,其生长发育落后于正常同龄儿;患者家庭收入普遍较低,大部分家庭存在负债情况;2.本中心大部分输血依赖型地贫患者规律接受输血及祛铁治疗,血红蛋白及铁蛋白维持水平与年龄相关;血红蛋白维持水平低组可能提示更高的肾功能损害风险以及更严重的溶血反应;3.本中心TDT患者每年的常规治疗费用约为3.06万元,占大部分患者家庭收入的一半以上。

摘要： 地中海贫血（简称地贫）又称海洋性贫血，属于遗传性溶血性贫血。这种疾病的共同特点是：失去珠蛋白基因，导致一种或多种珠蛋白多肽的合成减少或不能产生，成分发生改变。临床表现各异，主要表现为慢性、进行性溶血性贫血。地中海贫血血常规特点是血红蛋白、平均红细胞血红蛋白浓度等降低，所以其属于一种小细胞低色素的贫血。导致地中海贫血的因素1.地贫是由于遗传性基因的缺失，造成了一个或多个血红蛋白中的一条或多条珠蛋白链的合成不足,需要及时治疗。如果病情加重，就会出现贫血、

关键词： 地中海贫血   第三代测序技术   罕见基因型   基因检测  

摘要： 背景地中海贫血（简称地贫）,是一种世界范围内广泛分布的常染色体隐性遗传性疾病。重型地贫目前有效的的治疗措施是骨髓移植但日常治疗费用较高。重型地贫患儿的出生给国家、社会与家庭带来了沉重的负担,因此产前筛查与产前诊断出重型地贫胎儿显得尤为重要。产前诊断的条件是先证者或其父母的基因型必须明确。目前国内的地贫分子诊断检测方法较多,一类是针对常见型地贫基因进行检测的技术,包括裂隙聚合酶链反应、反向斑点杂交技术、基于PCR的多色熔解曲线分析法等,一类是检测基因突变谱更广泛的检查,包括多重连接探针扩增技术、一代测序等。虽然前述方法可检测部分罕见型地贫,但由于各种方法都有其局限性仍需多种方法联合检测,对于罕见复杂结构变异导致的罕见地贫仍无法明确诊断或漏诊,从而导致重型地贫的发生,因此需引起临床高度重视。如何快速有效全面地检出罕见型地贫是临床实际工作中需要经常面对的问题。三代测序技术是近年新兴的分子生物学检测方法,包括单分子实时测序（Single Molecule Real Time,SMRT）和纳米孔测序技术,前者更加成熟。三代测序技术现已在遗传病的分子诊断中逐渐得到应用,但在地贫检测方面的报道较少。目的1.报道9例罕见型地贫家系。2.通过SMRT技术解决传统PCR技术难以诊断的罕见型地贫临床病例,探究三代测序技术在临床诊断罕见型地贫的准确性。方法1.收集2021年1月至2022年10月在广州市妇女儿童医疗中心地贫筛查室中筛选出的9例表型疑似地贫但传统PCR检测技术未能明确基因型的罕见型地贫病例。2.对9例疑似罕见型地贫的先证者及其家系成员的血液样本送检,进行三代测序检测。3.测序结果返回后对其进行分析,采取其他分子生物学方法进行验证并进行家系分析,比较其与传统地贫分子诊断技术结果是否有差异;结合临床病历资料及其他检查结果,分析三代测序技术检测罕见型地贫的准确性,探究罕见型地贫发病机理。4.总结归纳三代测序技术诊断罕见型地贫的优缺点,为临床选择合适的诊断路径提供实验室依据。结果1.明确9例罕见型地贫样本基因型,包括ɑɑ/ɑɑ、342bp的基因插入以及ɑɑ/ɑɑ、ɑɑɑ/HKɑɑ、--/ɑɑɑ、--/ɑ1ɑ1、-ɑ/ɑ1ɑ1、ɑɑɑɑ/ɑɑ、ɑɑɑɑ/ɑɑ,并提供临床血液学表型信息。2.首次报道4种基因型类型,包括ɑɑ/ɑɑ、ɑɑ/ɑɑ、ɑɑɑ/HKɑɑ、ɑɑanti3.7ɑanti4.2ɑ/ɑɑ。3.初步确定以上罕见型地贫样本的产生机制,包括1例缺失、1例插入、1例重复、2例基因融合、2例复杂三联体及2例基因交换结构重排。结论1.临床上血液学表型提示地贫,但多种传统基因诊断技术（Gap-PCR、RDB、MMCA、MLPA等）检测的地贫基因型结果与表型不符或各方法学间检测结果不一致,需引起临床重视,考虑罕见型地贫的可能。2.罕见型地贫的发病机制复杂,发病类型包括缺失、插入、重复、基因融合、三联体及基因交换结构重排等。3.相比于传统基因检测技术,SMRT技术更适于复杂结构变异导致的罕见地贫基因检测,并可明确顺反式。4.明确传统检测方法检测罕见型地贫尤其是复杂结构变异导致地贫的局限性,为发现和诊断复杂结构变异导致的罕见地贫初步提供临床诊断路径。