关键词： Sabin株脊髓灰质灭活疫苗(sIPV)   皮内免疫   免疫持久性   加强免疫   Wistar大鼠  

摘要： 脊髓灰质炎野毒株消灭后,口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(Oral polio vaccine,OPV)将被停止使用,脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)将全面替代OPV,但IPV成本过高,难以满足全球需要。皮内免疫可以降低Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine derived from Sabin strain,sIPV)的免疫剂量,本研究将观察sIPV疫苗皮内免疫大鼠后的免疫持久性及加强免疫效果。本研究采用sIPV,设皮内免疫组、全剂量肌肉免疫组和皮内免疫阴性对照组,接种Wistar大鼠,于3剂基础免疫程序完成后第1个月、12个月采血;第12个月采血后加强免疫1剂,并于加强免疫1个月后采血。中和试验检测各血清抗脊灰病毒中和抗体效价,评价皮内免疫sIPV的免疫持久性及加强免疫效果。Wistar大鼠3剂基础免疫后1个月,1/5、1/3剂量皮内免疫组与全剂量肌肉免疫组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率均达到了100%,各型别中和抗体几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)均远高于1∶8保护水平。基础免疫后12个月,sIPV全剂量组各型阳转率均维持在80%以上,1/10剂量皮内免疫组在50%以上,1/5剂量皮内免疫组维持在70%以上,1/3剂量皮内免疫组维持在80%以上,除1/10剂量组Ⅱ型外其余各组各型别GMT均维持在1∶8以上。加强免疫后1个月,1/5剂量皮内免疫组、1/3剂量皮内免疫组及全剂量组的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型各组中和抗体阳转率均达到100%,并能够诱导产生远高于1∶8的抗体水平。本研究结果显示sIPV疫苗皮内免疫具有良好的免疫持久性及加强免疫效果。

关键词： 脊髓灰质炎后综合征   脊髓灰质炎病毒   疲劳   肌无力   肌萎缩   疼痛  

摘要： 脊髓灰质炎后综合征(post-poliomyelitissyn-drome,PPS)是指急性脊髓灰质炎患者在症状恢复的数十年后,原来受累或不受累的骨骼肌肉出现新的症状,称为***通常进展缓慢,表现为新出现的肌无力、肌肉疲劳、萎缩和疼痛.20世纪中叶,随着减毒活疫苗的推广应用,脊髓灰质炎发病率明显下降.2000年10月,世界卫生组织宣布中国已实现无脊髓灰质炎目标[1],但是仍现存有大量脊髓灰质炎后遗症患者,这些患者均有可能发展为PPS.近年来,国外对PPS进行较多研究,但国内对此病尚缺乏充分认识,加上我国PPS患者有增加的可能性,应当引起重视.

关键词： IRV   IPV   Combination vaccine   Dose sparing   IMMUNOGENICITY   MORTALITY  

摘要： A parenteral inactivated rotavirus vaccine (IRV) in development could address three problems with current live oral rotavirus vaccines (ORV): their lower efficacy in low and middle-income countries (LMICs), lingering concerns about their association with intussusception, and their requirement for a separate supply chain with large volume cold storage. Adding a new parenteral IRV to the current schedule of childhood immunizations would be more acceptable if it could be combined with another injectable vaccine such as inactivated polio vaccine (IPV). Current plans for polio eradication call for phasing out oral polio vaccine (OPV) and transitioning to IPV, initially in LMICs as a single dose booster after two doses of OPV and ultimately as a two dose schedule. Today in many LMICs, IPV is administered as a standalone vaccine, which involves a separate cold chain and is relatively costly. We therefore tested in two animal models formulations of IPV with IRV to determine whether co-administration might interfere with the immune response to each product and spare antigen dose for both vaccines. Our results demonstrate that IRV when adjuvanted with alum and administered alone or in combination with IPV did not impair the immune responses to either rotavirus or poliovirus serotypes 1, 2 and 3. Similarly, IPV when formulated and administered alone or together with IRV induced comparable levels of neutralizing antibody to poliovirus type 1, 2 and 3. Furthermore, comparable antibody titers were observed in animals vaccinated with low, middle or high dose of IPV or IRV in combination. This dose sparing and the lack of interference between IPV and IRV administered together represent another step to support the further development of this novel combination vaccine for children. Published by Elsevier Ltd.

关键词： 脊灰病毒Ⅰ型   脊灰病毒Ⅰ型单克隆抗体   胶体金试纸条  

摘要： 脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV,简称脊灰)是引起脊髓灰质炎的病原体,主要是通过侵犯中枢神经系统,引发弛缓性肌肉麻痹。世界卫生组织(WHO)于1988年提出“到2000年全球消灭脊髓灰质炎”的决议后,全球广泛使用脊灰疫苗,脊髓灰质炎病例也减少了99%以上。目前,世界上除极少数国家偶有少量脊灰病例发生外,世界正处于彻底根除脊髓灰质炎的边缘,世界各国正在为实现全球无脊灰做出最后的努力。脊灰病毒抗体检测对于研究脊灰病毒流行病学监视、疫苗免疫效果评估和衍生型病例具有重要的意义,本论文拟用脊灰病毒Sabin株I型单克隆抗体研制检测人类血清中脊灰病毒抗体的试纸条,为临床诊断提供重要参考。复苏培养本实验室制备的抗脊灰病毒Sabin株Ⅰ型单克隆细胞株62-F5,细胞状态良好。用间接ELISA测定单克隆细胞上清效价为1:8,与此细胞冻存之前的效价一致,表明此单克隆细胞较稳定。用弗氏不完全佐剂对Balb/c雌鼠致敏,一周后,腹腔接种以上杂交瘤细胞,接种一周后开始密切观察小鼠生命体态。当小鼠腹部膨大,有紧绷感时,活体抽取腹水;若小鼠活力下降,体感温度降低,应及时处死小鼠收集腹水。腹水收集后,用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体,通过超滤浓缩后测得单抗浓度为15.364 mg/mL,Reduced SDS-PAGE与Non-reduced SDS-PAGE分析纯化后的单抗,结果表明:单抗纯度较高,重链约70 KDa,轻链约23 KDa;根据Non-reduced SDS-PAGE电泳图谱可知,此单抗分子量约800～900 KDa,此单抗类型可能为IgM。用间接Elisa测定浓缩后的单抗效价为1:51200。采用柠檬酸三钠还原法制备40 nm胶体金颗粒,用此胶体金标记单抗,再与脊灰Ⅰ型抗原结合,形成胶体金-抗体-抗原复合物,将此复合物固定在金标垫上;将NC膜黏附在PVC板中间位置,在T线处包被浓度为1mg/mL的鼠抗人IgG(2μg/cm);在C线处包被1mg/mL的羊抗鼠IgG(2μg/cm);将金标垫黏接在NC膜一端,重叠约2 mm;样品垫黏接在金标垫上,重叠约2 mm;吸水垫黏接在NC膜另一端,重叠约2 mm;最后将试纸条组装在塑料外壳中。该胶体金试纸条检测脊髓灰质炎病毒抗体标准阳性血清的敏感性为1:80;特异性检测显示对脊灰阳性为阳性结果,对甲型肝炎病毒抗体阳性血清、乙型肝炎病毒抗体阳性血清、麻疹病毒抗体阳性血清、脊灰病毒抗体阴性血清进行检测显示为阴性结果,说明该试纸条特异性良好。与PV-IgG ELISA检测符合率为86.7%。在4℃和室温条件下保存3个月,其灵敏度和特异性没有明显变化,该胶体金试纸条稳定性良好。本研究初步建立检测脊髓灰质炎病毒I型抗体胶体金试纸条,该研究为脊灰的流行病学研究以及快速大规模检测脊灰Ⅰ型疫苗免疫效果均具有重要意义。

关键词： 急性弛缓性麻痹   疫苗免疫程序转换   流行特征   病原学监测  

摘要： 目的:分析比较河北省脊髓灰质炎（poliomyelitis,脊灰）疫苗免疫程序转换前后急性弛缓性麻痹（acute flaccid paralysis,AFP）病例流行特征,评价脊灰疫苗免疫程序转换的效果,为继续调整脊灰疫苗免疫策略、消灭脊灰提供科学依据。方法:1.采用描述性流行病学方法比较分析河北省脊灰疫苗免疫程序转换前后两年（2014年5月016年4月与2016年5月018年4月）AFP病例的流行病学和病原学特征。2.采用人横纹肌肉瘤细胞（RD细胞）、转人脊灰病毒受体基因的小鼠肺细胞（L20B细胞）分离脊灰病毒,细胞病变效应阳性分离物采用实时荧光定量RT-PCR方法进行型内鉴定;采用细胞中和抗体试验检测血清脊灰中和抗体水平。3.采用SPSS21.0软件进行统计检验:率、构成比的比较采用卡方检验和Fisher's确切概率法,等级资料的比较采用秩和检验,脊灰中和抗体水平比较采用方差分析,检验水准α=0.05;多变量影响因素分析采用Logistic回归。结果:1.脊灰疫苗免疫程序转换前后河北省AFP病例分别报告652例、633例,15岁以下儿童报告发生率分别为2.49/10万、2.26/10万（χ2=2.903,P=0.088）。2.脊灰疫苗免疫程序转换前后0～4岁AFP病例占比分别为63.50%、54.98%,比较年龄构成（Z=-3.438,P=0.001）;男女性别比分别为1.72:1、1.30:1（χ2=5.886,P=0.015）;各月份、各地市病例均散在分布。AFP病例60d残留麻痹率分别为14.72%、16.27%（χ2=0.588,P=0.443）。3.脊灰疫苗免疫程序转换前河北省报告疫苗相关麻痹型脊灰（Vaccine-associated Paralytic Poliomyelitis,VAPP）病例4例、脊灰疫苗衍生病毒（Vaccine-derived Polio virus,VDPV）病例1例,转换后无VAPP病例、VDPV病例的报告。4.脊灰疫苗免疫程序转换前后AFP病例脊灰病毒阳性分离率分别为2.91%、1.26%（χ2=4.252,P=0.039）,血清型分别是Ⅰ型（7株）、Ⅱ型（11株）、Ⅲ型（4株）和Ⅰ型（5株）、Ⅲ型（5株）(P=0.010)。非脊灰肠道病毒（Non-polio entervirus,NPEV）分离率阳性分别为14.88%、12.95%（χ2=0.002,P=0.960）。5.2012～2016年河北省0～2岁儿童Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型脊灰中和抗体几何平均滴度（Geometric Mean Titer,GMT）分别为1:216.93、1:217.18和1:168.04;2017～2018年Ⅰ型、Ⅲ型GMT分别为1:237.15、1:114.71;脊灰疫苗免疫程序转换前后Ⅰ型（F=0.091,P=0.764）、Ⅲ型（F=0.687,P=0.408）GMT比较差异无统计学意义。结论:1.河北省脊灰疫苗免疫程序转换前后脊灰中和抗体GMT水平未发生改变,AFP病例的季节、地区分布、NEPV阳性分离率、AFP病例60天残留麻痹率等流行特征未发生改变。2.河北省脊灰疫苗免疫程序转换后无VAPP、VDPV病例的报告,AFP病例PV阳性分离率下降。

关键词： 脊髓灰质炎   脊灰病毒抗体   胶体金试纸条   Sabin株  

摘要： 脊髓灰质炎病毒(Poliovirus，PV，简称脊灰)是引起脊髓灰质炎的病原体，主要是通过侵犯中枢神经系统，引发弛缓性肌肉麻痹。世界卫生组织(WHO)于1988年提出“到2000年全球消灭脊髓灰质炎”的决议后，全球广泛使用脊灰疫苗，脊髓灰质炎病例也减少了99%以上。目前，世界上除极少数国家偶有少量脊灰病例发生外，世界正处于彻底根除脊髓灰质炎的边缘，世界各国正在为实现全球无脊灰做出最后的努力。脊灰病毒抗体检测对于研究脊灰病毒流行病学监视、疫苗免疫效果评估和衍生型病例具有重要的意义，本论文拟用脊灰病毒Sabin株Ⅰ型单克隆抗体研制检测人类血清中脊灰病毒抗体的试纸条，为临床诊断提供重要参考。　　复苏培养本实验室制备的抗脊灰病毒Sabin株I型单克隆细胞株62-F5，细胞状态良好。用间接ELISA测定单克隆细胞上清效价为1∶8，与此细胞冻存之前的效价一致，表明此单克隆细胞较稳定。　　用弗氏不完全佐剂对Balb/c雌鼠致敏，一周后，腹腔接种以上杂交瘤细胞，接种一周后开始密切观察小鼠生命体态。当小鼠腹部膨大，有紧绷感时，活体抽取腹水;若小鼠活力下降，体感温度降低，应及时处死小鼠收集腹水。腹水收集后，用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体，通过超滤浓缩后测得单抗浓度为15.364mg/mL，ReducedSDS-PAGE与Non-reducedSDS-PAGE分析纯化后的单抗，结果表明：单抗纯度较高，重链约70KDa，轻链约23KDa;根据Non-reducedSDS-PAGE电泳图谱可知，此单抗分子量约800~900KDa，此单抗类型可能为IgM。用间接Elisa测定浓缩后的单抗效价为1∶51200。　　采用柠檬酸三钠还原法制备40nm胶体金颗粒，用此胶体金标记单抗，再与脊灰Ⅰ型抗原结合，形成胶体金-抗体-抗原复合物，将此复合物固定在金标垫上;将NC膜黏附在PVC板中间位置，在T线处包被浓度为1mg/mL的鼠抗人IgG（2μg/cm）;在C线处包被1mg/mL的羊抗鼠IgG（2μg/cm）;将金标垫黏接在NC膜一端，重叠约2mm;样品垫黏接在金标垫上，重叠约2mm;吸水垫黏接在NC膜另一端，重叠约2mm;最后将试纸条组装在塑料外壳中。该胶体金试纸条检测脊髓灰质炎病毒抗体标准阳性血清的敏感性为1∶80;特异性检测显示对脊灰阳性为阳性结果，对甲型肝炎病毒抗体阳性血清、乙型肝炎病毒抗体阳性血清、麻疹病毒抗体阳性血清、脊灰病毒抗体阴性血清进行检测显示为阴性结果，说明该试纸条特异性良好。与PV-IgGELISA检测符合率为86.7%。在4℃和室温条件下保存3个月，其灵敏度和特异性没有明显变化，该胶体金试纸条稳定性良好。　　本研究初步建立检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体胶体金试纸条，该研究为脊灰的流行病学研究以及快速大规模检测脊灰Ⅰ型疫苗免疫效果均具有重要意义。

关键词： 脊髓灰质炎灭活疫苗   脊髓灰质炎减毒活疫苗   序贯免疫   粪便排毒  

摘要： 目的 本研究旨在讨论脊髓灰质炎疫苗不同序贯免疫的接种效果和排毒情况,为制定合理的脊髓灰质炎疫苗免疫程序提供依据;并比较了不同的脊髓灰质炎检测方法,为选择合理的脊髓灰质炎病毒检测方法提供参考。方法 选取广西壮族自治区1200名2～3月龄健康的未接种过脊灰疫苗的婴幼儿,随机分为IPV和OPV序贯免疫组,共12组,每组100人,在第0、28、56天接种相应疫苗,在免前和基础免疫后28天检测血清中脊灰各型抗体阳转率和抗体滴度,并随机抽取各组入组时前10%的受试对象在第二剂接种前和第二、三接种后第7、14、28天进行粪便采集,总共7次,所有的粪便样本通过L20B和RD两种细胞系进行分离培养,通过中和试验对细胞培养物中脊灰病毒进行血清型别鉴定。比较各序贯免疫程序组不同时期各型病毒的排毒率情况。第二部分从上述免疫程序组每组抽取6个粪便样本,通过实时荧光定量PCR法检测粪便上清中脊灰病毒的排毒情况,并与细胞培养法进行比较,分别用ELISA、RT-PCR对细胞培养物中的脊灰病毒进行型内鉴定,比较中和试验、ELISA、RT-PCR三种方法分型结果的一致性。结果 排除脱落与其他不符合实验方案的受试者,总共2062份配对血清和806份粪便样本进入统计学分析。12个序贯免疫组各组免前脊灰各型抗体阳性率和GMT均无统计学差异。相同免疫程序不同剂型免后脊灰各型抗体阳转率和GMT均无显著差异。相同剂型不同免疫程序免后Ⅰ、Ⅲ型抗体阳转率组间比较均无显著差异,2IPV+bOPV组免后脊灰Ⅰ、Ⅲ型抗体GMT均高于其他组;接种2剂IPV后Ⅱ型抗体阳转率和GMT显著升高。cIPV/OPV序贯免疫组与sIPV/OPV序贯免疫组相同免疫程序免后各型脊灰抗体阳转率均无统计学差异;sIPV/OPV序贯免疫组免后Ⅰ型抗体GMT均高于相同免疫程序的cIPV/OPV序贯免疫组,Ⅱ型抗体低于cIPV/OPV序贯免疫组,接种2剂sIPV后与cIPV/OPV序贯免疫组无显著差异;IPV/OPV序贯免疫组与sIPV/OPV序贯免疫组免后Ⅲ型抗体GMT无显著差异。各免疫程序组在接种首剂OPV后7天内排毒率达到最高峰,随后排毒率逐渐降低。首剂OPV接种后3周内均出现任意一型病毒的排毒,且Ⅲ型脊灰病毒排毒率最高。各免疫程序组Ⅰ、Ⅱ型脊灰病毒排毒率无显著差异;sIPV+2bOPV组Ⅲ型病毒总排毒率显著高于 2sIPV+bOPV 组与 2sIPV+tOPV 组,cIPV+2bOPV 液体组显著高于 2cIPV+tOPV液体组。细胞培养法检测出的阳性样本用实时荧光定量PCR法均能检测出来,且实时荧光定量PCR法检测的阳性结果更多;中和试验、ELISA、RT-PCR三种方法对细胞培养物中脊灰病毒的分型结果无显著差异。结论 脊灰疫苗基础免疫效果受到不同序贯免疫程序的影响,2剂IPV免疫效果优于1剂IPV,尤其是Ⅱ型。不同的脊髓灰质炎序贯免疫排毒情况有差异,IPV剂次增加虽然不能显著降低排毒率,但能缩短各型病毒的排毒时间。实时荧光定量PCR法对原始粪便标本中脊灰病毒的检出率比细胞培养法更高,但无法判断病毒是否具有感染性,因此样本量较大时可以用来初步筛选出阳性样本,然后再用细胞培养法进行检测。中和试验、ELISA、RT-PCR三种方法对脊灰病毒的分型结果一致性很高,可以使用后面的两种方法替代经典的中和试验法来对细胞培养物中的脊灰病毒进行型内鉴定。

关键词： 脊髓灰质炎减毒活疫苗   脊髓灰质炎灭活疫苗   疑似预防接种异常反应   安全性  

摘要： 目的了解新纳入国家免疫规划的脊髓灰质炎(脊灰)疫苗的疑似预防接种异常反应(AEFI)的发生特征,评价其安全性。方法各接种单位逐级上报2017-2018年口服二价脊灰减毒活疫苗(bOPV)和脊灰灭活疫苗(IPV)的接种剂次数,通过AEFI信息管理系统收集bOPV和IPV的AEFI个案数据,采用描述性方法统计分析AEFI报告发生率及流行病学特征。结果 2017-2018年江西脊灰疫苗AEFI报告434例,发生率为9.69/10万剂次,bOPV、IPV分别为5.85/10万剂次、21.52/10万剂次。AEFI报告例数为男童多于女童,以0岁组儿童为主,一般反应为主,主要发生在接种后48小时以内。异常反应病例的临床诊断主要为过敏性皮疹。bOPV接种后疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎的报告发生率为0.09/10万剂次。结论江西省脊灰疫苗安全性在可接受范围,需进一步防范严重预防接种异常反应病例的发生,并建议国家尽快制定2剂IPV加2剂bOPV的免疫策略。

关键词： 顾方舟   活疫苗   脊髓灰质炎病毒  

摘要： 顾方舟从31岁开始,就努力在中国消灭导致小儿麻痹症的脊髓灰质炎病毒,为此花了40余年时间。他在中国研制出首批脊灰活疫苗,并把疫苗包裹进糖丸中,以便送到农村和偏远地区。2000年,世界卫生组织宣布中国消灭脊髓灰质炎病毒时,顾方舟曾作为代表在证实报告上签字,但他从来没因此放弃警惕。他研制的糖丸已经被证明可以明