关键词： Sabin株脊髓灰质炎病毒   凝胶过滤层析   Capto   Core   400   复合型层析介质   参数优化  

摘要： 目的:分别用新型复合型层析介质Capto Core 400和传统介质Sepharose 6FF纯化Sabin株脊髓灰质炎病毒(Sabin strain poliovirus,sPV)去除宿主细胞蛋白(hostcell protein,HCP)和DNA,并且比较纯化结果及工艺参数。方法:用Capto Core 400与Sepharose 6FF纯化Vero细胞培养的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sPV浓缩液。分别检测纯化后sPV的D抗原含量、HCP残留量和DNA残留量,计算D抗原回收率、HCP和DNA去除率,并用t检验分析差异。结果:Capto Core 400与Sepharose 6FF纯化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sPV的D抗原回收率差异均无统计学意义(t值分别为1.09、1.08、1.02,P值均>0.05),但前者的Vero细胞HCP(t值分别为3.15、3.23、3.54)和DNA去除率均高于后者(t值分别为3.41、3.25、3.62),且差异有统计学意义(P值均<0.05)。Capto Core 400与Sepharose 6FF的介质使用体积比值为0.05,上样后纯化时间比值为0.04,工作缓冲液使用量比值为0.25,工艺线性流速比值为10,每升介质上样量比值为20,最大耐压力比值为2。结论:对比Sepharose 6FF,Capto Core 400可以更有效地去除Vero细胞HCP与DNA,各个工艺参数得到了优化,提高了sPV层析纯化的工作效率,并节约了时间和成本。

关键词： Vero细胞   Ⅲ型脊髓灰质炎病毒   感染性滴度   D抗原  

摘要： 型脊髓灰质炎病毒经下游灭活工艺后抗原损失量较大,可以通过优化上游培养工艺来提高病毒产量。为研究病毒接种时间、感染复数(MOI)和病毒收获时间对Ⅲ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度(CCID50)和D抗原的影响,优化Ⅲ型脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中的增殖条件,为生产及毒种制备提供指导依据,本研究以接种胞龄和MOI为病毒接种的两个变量条件,以病毒滴度和D抗原含量为病毒收获液中病毒产量的判定指标。先固定MOI,在不同胞龄的Vero细胞上以相同MOI接种Ⅲ型脊髓灰质炎病毒,根据病毒收获液中病毒产量的结果筛选出产毒量最高的接种胞龄范围。然后以最佳产毒胞龄为固定条件,暨Vero细胞生长至96h^144h,以不同MOI接种病毒,进一步筛选出产毒量最高的MOI范围。结果显示,当MOI=0.003时,Vero细胞培养48h、72h、96h、120h和144h种毒组均在种毒后70h完全病变,Vero细胞培养120h种毒所得收获液D抗原含量和病毒滴度均为最高,分别为(331±31)DU/mL、(8.04±0.14)lgCCID50/mL。接种胞龄固定在96h^144h范围,当MOI为0.001、0.01和0.1时,细胞完全病变时间分别为81h、66h和55h,所得病毒收获液的D抗原含量分别为(301.1±13.8)DU/mL、(303.7±15.6)DU/mL和(272.6±19.6)DU/mL,滴度分别为(7.88±0.13)lgCCID50/mL、(7.58±0.14)lgCCID50/mL和(7.75±0.13)lgCCID50/mL。本研究提示,相同MOI下,不同细胞胞龄种毒后细胞达到完全病变时间相同;细胞培养至平台期前后接种Ⅲ型脊髓灰质炎病毒所获得的收获液D抗原含量和感染性滴度均最高;MOI影响Ⅲ型病毒病变进程,但对病毒产量影响不大;90%以上Vero细胞发生病变、脱落时为最佳收获病毒时间点。

关键词： 生活污水   脊灰病毒   环境监测  

摘要： 目的通过对2018年江西省污水处理厂生活污水中脊髓灰质炎病毒(脊灰病毒,PV)的持续监测,为维持无脊灰状态提供实验室环境监测数据支持,将预防工作关口前移。方法选择青山湖区污水处理厂作为长期固定监测点,每月在污水处理厂入水口采集1L污水作为样本。膜浓缩后在L20B、RD、Hep-2三种细胞上培养,鉴定1型、2型、3型脊灰病毒。结果采集生活污水样本12份,共10个月分离出脊灰病毒23株,分离率为83.33%,分别为PV 1型2株(8.7%),PV 3型21株(91.3%)。有1株PV1(JX2018JHH024R)在突变热点nt2749处发生(A->G)的突变,导致甲硫氨酸(Met)替代了异亮氨酸(Ile),有2株PV3(JX2018JHH095L、JX2018JHH097L)在nt2636处发生了(G->A)的变异,导致了极性氨基酸替代了疏水氨基酸。结论PV 3型为江西省生活污水中的PV优势株。未在环境监测中发现脊灰野病毒、脊灰病毒疫苗衍生株及PV2株。分离出的PV1和PV3株有部分位点发生突变,需持续监测。

关键词： 脊髓灰质炎   实验室质量控制标准毒株   细胞敏感性  

摘要： 目的制备和滴定2019年河南省脊髓灰质炎病毒实验室质量控制标准毒株(Laboratory Quality Control Strain,LQCS)。方法中国Sabin参考毒株(China Sabin Test Reference Strain,CSTRS)扩增制备LQCS,以CSTRS为平行实验,进行三次独立实验完成LQCS滴定。结果LQCS RDⅠ型为108.48 CCID50/0.1 mL、RDⅢ型为108.57 CID50/0.1 mL、L20BⅠ型为107.82CCID50/0.1 mL和L20BⅢ型为107.20 CCID50/0.1 mL。结论河南省已制备可用于细胞敏感性实验的LQCS。

关键词： 柯萨奇A组病毒   急性弛缓性麻痹   手足口病  

摘要： 目的对2015—2019年河南省急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中,在转人类脊髓灰质炎病毒受体小鼠肺细胞(mouse cell line expressing the gene for human cellular receptor for poliovirus,L20B)增殖的非脊髓灰质炎肠道病毒基因定型和序列特征分析。方法利用VP4-VP2编码区引物EVP4和OL68-1进行肠道病毒鉴定,均为柯萨奇A组病毒(coxsackievirus A,CV-A),分别为CV-A4、CV-A8和CV-A10。在利用CV-A4、CV-A8和CV-A10 VP1区特异性引物进行VP1区序列扩增和亲缘进化树构建。结果9例L20B阳性分离物中,1例为CV-A4,1例为CV-A8,7例为CV-A10。通过亲缘进化树构建,CV-A4属于D基因型,CV-A8属于B基因型,CV-A10属于E基因型。结论河南省L20B细胞增殖的非脊髓灰质炎肠道病毒为CV-A4、CV-A8和CV-A10,通过这些病毒基因特征分析对手足口病和AFP预防控制具有重要意义。

关键词： 脊髓灰质炎疫苗   疑似预防接种异常反应   免疫策略   转换  

摘要： 目的比较辽宁省脊髓灰质炎(脊灰)疫苗免疫策略转换前后不同脊灰疫苗疑似预防接种异常反应(AEFI)发生率。方法通过中国AEFI监测系统收集辽宁省脊灰疫苗免疫策略转换前(2013年5月-2016年4月)三价脊灰减毒活疫苗(tOPV)和转换后(2016年5月-2019年12月)二价脊灰减毒活疫苗(bOPV)、脊灰灭活疫苗(IPV)AEFI数据,比较AEFI报告发生率。结果辽宁省免疫策略调整前tOPV和调整后bOPV和IPV的AEFI报告发生率(/10万)分别为6.03、11.11、27.80,其中一般反应分别为5.44、10.14、26.16,异常反应分别为0.28、0.62、1.29。在tOPV、bOPV、IPV异常反应中,过敏性皮疹报告发生率(/10万)分别为0.10、0.47、1.17,疫苗相关麻痹型脊灰报告发生率(/10万)分别为0.07、0.04、0.00。结论辽宁省脊灰疫苗免疫策略调整前后三种脊灰疫苗不良反应发生率在预期范围内,严重反应极为罕见。

关键词： 脊髓灰质炎   序贯程序   免疫原性   安全性  

摘要： 目的:比较脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)与二价脊髓灰质炎减毒活疫苗(bOPV) 3种序贯免疫接种程序的免疫原性和安全性。方法:2月龄的健康婴儿随机分配到3个研究组,于2,3,4月龄按照IPVbOPV-bOPV,IPV-IPV-bOPV和IPV-IPV-IPV的免疫程序完成基础免疫程序。分别于免前和最后一次接种后28~40 d内采血,采用细胞培养微量中和试验检测脊灰Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型中和抗体水平。采用发放日记卡的形式收集每次接种后30 d内的不良事件。结果:共入组648例符合条件的2月龄婴儿,每个研究组216例。入组性别、3种抗体的免前阳性率与几何平均滴度(GMT)在3个研究组间的统计学差异不显著。完成基础免疫后,Ⅰ型、Ⅲ型抗体免后阳性率均为100%,阳转率全部99%以上,3个研究组间统计学差异显著(P>0.05)。对于Ⅱ型抗体,免后阳性率分别为97.20%,100%和99.53%,阳转率分别为66.82%,93.02%和94.42%,3个研究组间的统计学差异具有显著性(P <0.001)。不良事件症状以发热为主,3个研究组发热发生率分别为15.89%,21.40%和27.91%,组间统计学差异具有显著性(P=0.010)。结论:3种脊灰疫苗序贯程序均有良好的安全性,目前国家免疫规划推荐的IPV-IPV-bOPV序贯接种程序相比IPV-bOPV-bOPV序贯接种程序具有更好的免疫效果。

关键词： 脊髓灰质炎病毒   细胞质量控制   评价  

摘要： 目的评价2016-2018年河南省脊髓灰质炎(简称脊灰)实验室所用细胞的质量控制情况。方法采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法对细胞支原体进行检测,采用96孔微量板病毒滴定法检测细胞对三个型别脊灰病毒的敏感性。结果2016-2018年河南省脊灰实验室所使用的细胞支原体检测结果均为阴性,细胞敏感性检测结果与实验室质量控制(Laboratory quality control,LQC)株标准值的差值均在±0.5 logCCID50/0.1 mL的有效性范围内。结论2016-2018年河南省脊灰实验室细胞质量状况良好,未出现细胞支原体污染和敏感性下降,为维持好河南省无脊灰的状态提供坚实的保障。

关键词： 脊髓灰质炎灭活疫苗   安全性   剂次   不良事件  

摘要： 目的:评价脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine,IPV)不同剂次接种的安全性。方法:2018年12月—2019年4月,以IPV作为研究疫苗,将360例2月龄婴儿作为研究对象,观察其在2,3,4月龄分别接种1剂次IPV后的不良事件发生情况。结果:各剂次注射部位不良事件症状以触痛、红肿、硬结为主,第1剂、第2剂和第3剂注射部位不良事件发生率分别为6.39%,3.06%和2.25%,各剂次间发生率差异有统计学意义(P=0.010),第1剂注射部位不良事件发生率高于第2剂、第3剂。各剂次全身不良事件症状以发热、易激惹、嗜睡和进食障碍为主,第1剂、第2剂和第3剂全身不良事件发生率分别为21.67%,14.44%和8.71%,各剂次间发生率差异有统计学意义(P <0.001),第1剂全身不良事件发生率高于第2剂、第3剂。各剂次不良事件严重程度以轻度反应(1级)为主,全部、注射部位及全身不良事件严重程度分布在各剂次间差异均无统计学意义(P> 0.05)。在研究观察期间,各剂次接种后均未观察到严重不良事件发生。结论:全程使用IPV具有良好的安全性,接种第2,3剂次IPV后的注射部位和全身不良事件发生率均低于第1剂次。

关键词： 疑似预防接种异常反应   脊髓灰质炎减毒活疫苗   脊髓灰质炎灭活疫苗  

摘要： 目的比较河北省二价脊髓灰质炎(脊灰)减毒活疫苗(bivalent oral polio attenuated live vaccine,bOPV)、脊灰灭活疫苗(Salk株)(inactivvated poliomyelitis vaccine made from Salk strains,IPV-Salk)和脊灰灭活疫苗(Sabin株)(inactivated poliomyelitis vaccine made from Sabin strains,IPV-Sabin)接种后疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)的发生特征,评价脊灰疫苗的安全性。方法通过疑似AEFI信息管理系统收集河北省2016年5月1日—2018年4月30日脊灰疫苗接种后AEFI个案,比较分析三种脊灰疫苗接种后AEFI的报告发生情况。结果bOPV、IPV-Salk和IPV-Sabin的AEFI报告发生率分别为13.53/10万剂、40.50/10万剂和63.70/10万剂。bOPV与IPV-Salk、bOPV与IPV-Sabin、IPV-Salk与IPV-Sabin的AEFI报告发生率(χ2=360.355,P<0.001,χ2=360.247,P<0.001,χ2=34.895,P<0.001)和一般反应报告发生率(χ2=373.009,P<0.001,χ2=564.795,P<0.001,χ2=35.382,P<0.001)差异均有统计学意义,由高到低依次为:IPV-Sabin、IPV-Salk和bOPV;异常反应报告发生率(χ2=3.077,P=0.079,χ2C=1.165,P=0.281,χ2C=0,P=1)差异均无统计学意义。三种脊灰疫苗的AEFI中均以一般反应为主,年龄主要集中在≤1岁组,主要发生在接种后1 d内。结论河北省三种脊灰疫苗总体安全性良好,但仍需加强脊灰疫苗安全性监测。